郭江
- 作品数：122 被引量：204H指数：7
- 供职机构：首都医科大学附属北京地坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白4基因剪切体HBeBP4A的克隆与原核表达
- 2007年
- 目的:克隆乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白未知功能新基因HBeBP4的剪切体基因HBeBP4A,构建其原核表达载体,诱导在大肠埃希菌中表达。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术及生物信息学(bioinformat-ics)技术从HepG2细胞提取的cDNA模板中扩增获得HBeBP4基因的剪切体基因HBeBP4A,选用pGEM-T-easy载体进行TA克隆,通过PCR、限制性酶切分析及测序进行鉴定,再将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化进BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导HBeBP4A融合蛋白的表达,表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,考马斯亮蓝染色,以抗-His的单克隆抗体进行Western blotting免疫印迹分析鉴定证实表达蛋白的特异性。结果:成功扩增出HBeBP4剪切体基因HBeBP4A,并将其插入pET-32a(+)原核表达载体,经BL21(DE3)受体菌转化、IPTG诱导、SDS-PAGE分析获得了HBeBP4A重组蛋白的表达,Western blotting证实了重组蛋白表达的特异性。结论:发现了乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白4(HBeBP4)基因的剪切体HBeBP4A,构建了pET-32a(+)-HBeBP4A原核表达载体,并利用大肠埃希菌原核表达系统成功获得了pET-32a(+)-HBeBP4A重组蛋白的表达。
- 张健康郭江成军伦永志王丹琼赵龙凤蓝贤勇洪源毛羽
- 关键词：E抗原结合蛋白剪切体生物信息学原核表达
- 应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选PS1TP5反式激活相关基因
- 2009年
- 目的构建乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活基因5(PS1TP5)的反式激活相关基因差异表达的cDNA,克隆PS1TP5蛋白反式激活相关基因。方法以PS1TP5表达质粒pcDNA3.1(-)-myc-his(A)-PS1TP5转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)-myc-his(A)为对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析。结果成功构建人PS1TP5蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到70个200～1 000 bp插入片段的克隆,随机挑选其中30个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得24种编码基因,其中1个为未知功能的新基因,电子拼接后命名为HBV PS1TP5TP1(乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白5反式激活蛋白1),GenBank注册号DQ487761。结论筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因。PS1TP5与人类免疫调节、物质代谢、信号转导、肝纤维化形成、肿瘤发生发展有密切关系。为进一步研究HBV前-S1蛋白的功能提供了新的线索。
- 张健康刘春燕成军郭江赵龙凤洪源毛羽
- 关键词：乙型肝炎病毒前-S1蛋白抑制性消减杂交
- 人肝再生增强因子上调硫氧还蛋白还原酶1基因表达的研究
- 2004年
- 目的探讨人肝再生增强因子(hALR)对硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)启动子转录的激活作用。方法以我室构建的hALR的cDNA基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定TXNRD1的启动子区域(TXNRD1p),聚合酶链反应(PCR)扩增TXNRD1p,亚克隆至真核报告载体pCAT3Basic中,构建pCAT3TXNRD1p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与表达载体pcDNA31(-)ALR共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果pCAT3TXNRD1p和pcDNA31(-)ALR瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3Basic空载体的104倍,pcAT3TXNRD1p的21倍。本实验进一步验证了我室利用基因表达谱技术研究ALR蛋白反式激活作用的结果。结论我室克隆的TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性;hALR蛋白具有对TXNRD1的反式激活作用。
- 纪冬成军郭江王琳杨瑗刘妍
- 关键词：肝再生增强因子反式激活作用硫氧还蛋白还原酶PCDNA3表达活性
- 应用抑制性消减杂交技术筛选NS4ATP2反式激活基因
- 目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建人类新基因NS4ATP2反式激活基因差异表达的cDNA 消减文库,克隆NS4ATP2反式激活相关基因,了解该基因的可能生物学功能。方法以NS4ATP2表达质粒pcDNA3．1(-)...
- 杨瑗成军赵英仁郭江刘妍黄燕萍
- 文献传递
- 苦草甜素下调基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达的研究
- 目的了解甘草甜素对基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因启动子活性的调节作用,为甘草甜素的抗纤维化作用提供理论依据。方法应用聚合酶链反应(PCR扩增基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 基因启动子,命名为TIMP-1P,以T-A克...
- 王巧侠成军李文凡郭江魏红山
- 文献传递
- 应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选HBV XTP12蛋白反式激活基因的上调基因
- 为筛选与克隆乙型肝炎病毒(HBV)反式激活基因XTP12的上调基因,了解其可能存在的调节功能线索,我们应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioin-formatics)技术筛选并克降XTP12反式激活的新型靶...
- 宫嫚成军纪冬刘妍郭江张黎颖李筠
- 关键词：X蛋白反式激活抑制性消减杂交
- 文献传递
- 应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒DNAPTP1的反式调节基因被引量：3
- 2005年
- 目的:应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆乙型肝炎病毒DNAPTP1反式激活的新型靶基因．方法:以HBV DNAPTP1表达质粒pcDNA3．1(-)- DNAPTP1 转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建 cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析．结果:成功构建DNAPTP1反式激活基因差异表达的cDNA 消减文库．文库扩增后得到60个白色克隆,经菌落PCR分析,得到32个200-1 000 bp插入片段．对所得片段测序,并进行同源性分析,获得3个差异表达的已知蛋白基因和4个未知功能的染色体序列．结论:筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢、免疫及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了DNAPTP1可能存在的调控机制的线索．
- 高学松成军甄真郭江张黎颖陶明亮
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节抑制性消减杂交
- 应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选HCV p7蛋白反式调节基因
- 目的:构建丙型肝炎病毒HCV p7蛋白反式激活相关基因差异表达的差异cDNA,克隆HCV p7蛋白反式激活相关基因。方法:以HCV p7表达质粒pcDNA3．1(-)-p7转染HepG2细胞,以空载体pcD- NA3．1...
- 郭江成军纪冬赵龙凤王建军刘妍黄燕萍
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白2基因的克隆化研究被引量：7
- 2004年
- 目的 :应用抑制性消减杂交 (SSH )技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)前 S1蛋白 (pre S1)反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制。方法 :以HBV前 S1蛋白表达质粒 pcDNA3 1( -) pre S1转染HepG2细胞 ,以空载体 pcDNA3 1( -)为平行对照 ,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆HBV前 S1反式激活作用的新的靶基因。结果 :对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,因其可以被前 S1蛋白反式激活 ,故命名为前 S1反式激活蛋白 2 (PS1TP2 ) ,已在GenBank中注册 ,注册号 :AY42 6673。PS1TP2基因的编码序列全长为 5 73个核苷酸 (nt) ,编码产物由 190个氨基酸残基 (aa)组成。结论 :HBV前 S1蛋白在HBV进入宿主细胞的过程中起着重要作用 ,最近的研究表明前 S1蛋白还具有反式激活的作用 ,上调宿主细胞某些基因的表达 ,从而改变宿主正常的免疫应答水平 ,引起病变。HBV前 S1反式激活新靶基因的发现 ,为进一步研究HBV前
- 郭江成军纪冬赵龙凤王建军刘妍刘蔚
- 关键词：乙型肝炎病毒前-S1蛋白基因克隆化
- 乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节人类新基因HBVDNAPTP1的克隆及原核表达与组织表达分析被引量：3
- 2007年
- 目的克隆应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学技术筛选得到的乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶反式调节新型靶基因HBVDNAPTP1,构建HBVDNAPTP1基因的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中表达,并进一步分析HBVDNAPTP1在组织中的分布表达水平。方法应用RT-PCR技术扩增获得HBVDNAPTP1基因片段,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导以获得HBVDNAPTP1融合蛋白的表达,利用Westernblot证实表达蛋白的特异性。应用UniGene数据库对HBVDNAPTP1基因的染色体中定位及组织分布表达水平进行分析。结果RT-PCR扩增获得HBVD-NAPTP1基因片段,插入pET-32a(+)表达载体,转化BL21(DE3)受体菌,经IPTG诱导获得了HBVDNAPTP1重组蛋白的表达,Westernblot证实了表达的重组蛋白的特异性。HBVDNAPTP1在多数组织中低表达,仅在脑垂体腺、扁桃体、舌、胸腺、气管与脐带中无表达。结论成功构建了HBVDNAPTP1基因的原核表达载体,利用大肠埃希菌原核表达系统获得了重组蛋白的表达,并初步了解了HBVDNAPTP1基因的染色体定位与组织表达水平。
- 伦永志张黎颖成军郭江洪源赵宝昌
- 关键词：乙型DNA聚合酶原核表达组织表达分析
