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金詟: 作品数：12 被引量：30H指数：4; 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>

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耐热邻苯二酚2,3双加氧酶的随机突变研究: 1999年; 季朝能徐明姜涛金詟盛小禹毛裕民; 关键词：突变体随机突变负相关

林肯链霉菌林肯变种谷氨酰胺合成酶的研究(英文)被引量：1: 1999年; 林肯链霉菌林肯变种是林可霉素的产生菌，研究中发现其菌丝体中谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）的比活力与林可霉素的生物合成存在正相关性．在此基础上，报道了ＧＳ的分离纯化、分子特征、酶学性质和活力调节特性．采用硫酸铵分级沉淀、ＤＥ５２离子交换层析、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ凝胶过滤等方法，从林肯链霉菌林肯变种中分离纯化了ＧＳ，用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）鉴定为单一组分．以梯度ＰＡＧＥ和凝胶过滤法测得ＧＳ的相对分子质量为６６００００，ＳＤＳ ＰＡＧＥ测得其亚基相对分子质量为５５０００，表明该酶由１２个相同的亚基构成．Ｍｇ２＋或Ｍｎ２＋作为辅助因子对ＧＳ的催化活性是必需的．反馈抑制是ＧＳ的一种重要调节方式，这种抑制作用是以累积的方式进行的，这表明各种代谢物对ＧＳ的作用位点不同，它们对ＧＳ的抑制作用是相互独立的．以受腺苷化去腺苷化调节的产气克雷伯氏菌ＧＳ作对照，研究发现林肯链霉菌林肯变种ＧＳ没有明显的氨休克作用，且经蛇毒磷酸二酯酶处理后，其活力没有变化．这些结果都说明林肯链霉菌林肯变种ＧＳ不存在腺苷化共价修饰这一调节方式．另外，对不同氮源生长条件下林肯链霉菌林肯变种无细?; 金詟张双全季朝能毛裕民; 关键词：谷氨酰胺合成酶林可霉素

林肯链霉菌谷氨酸合酶的纯化和性质被引量：1: 1998年; 采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析、凝胶过滤和吸附层析等方法 ,分离纯化了林肯链霉菌谷氨酸合酶 ,电泳鉴定为单一组分 .这是链霉菌中的第 1例 .谷氨酸合酶很不稳定 ,向酶缓冲液中加入α KG ,PMSF ,EDTA ,β 巯基乙醇和甘油可以大大提高其稳定性 .测得全酶分子量为 1 38ku ,亚基分子量为 81和 5 7ku ,表明该酶由2个不相同的亚基构成 .吸收光谱在 380和 440nm附近没有吸收峰 ,表明该酶是不含铁的非黄素蛋白质 .该酶反应的最适 pH为 7 2 ,最适温度为 30℃ .该酶对NADH ,α KG和L Gln的表观Km 值分别为 5 2 1× 1 0 -5 ,4 1 7× 1 0 -4 和 4 35× 1 0 -4mol/L .以NADPH代替NADH作电子供体 ,该酶仍表现出部分活力 .反应产物Glu和NAD+,部分金属离子、氨基酸及三羧酸循环中间物对该酶活力有不同程度的抑制作用 .; 金詟焦瑞身; 关键词：谷氨酸合酶提纯氨同化氮代谢

家蚕抗菌肽CM4对大肠杆菌超微结构影响的研究(简报)被引量：1: 2000年; The effect of antibacterial peptide CM4 of Bombyx mori against E. coll K12 was investigated using scanning electron microscopy(SEM) and transmission electron microscopy (TEM). The ultrastructural changes of E. coli K12 were observed by the challenge of the purified antibacterial peptide CM4. The results showed that the antibacterial peptide caused a series of pathological changes on E. coli. SEM and TEM revealed aggregates of bacteria and SEM revealed wrin-kled bacterial surfaces in the early stage. Thereafter, plasmolysis was observed with irregular holes appearing in the two ends of bacteria and the cytoplasmic contents of the cells leaking out. Finally, bacteria became empty vesicles and disintegrated into small fragments subsequently. Comparatively, the bacterial membrane was normal and the bacterial structure remained intact in the control group.; 金詟韩亚平张文宏王芳张双全毛裕民; 关键词：抑菌活性大肠杆菌超微结构抗肿瘤

中国家蚕抗菌肽A基因片段的初步分离被引量：4: 1999年; 从中国家蚕蛹中提取基因组ＤＮＡ，根据中国家蚕抗菌肽Ａ的ｃＤＮＡ序列设计引物，从基因组ＤＮＡ中扩增天然抗菌肽Ａ基因，得到７５０ｂｐ、１１００ｂｐ、１６００ｂｐ左右的３个片段，用内引物扩增法，初步证实中国家蚕抗菌肽Ａ基因至少存在７５０ｂｐ、１１００ｂｐ; 刘丽张双全李建民周开亚金詟; 关键词：家蚕基因组 DNA

林肯链霉菌谷氨酰胺合成酶活力调节的研究被引量：3: 2001年; 对不同氮源生长条件下林肯链霉菌无细胞粗提液中谷氨酰胺合成酶 (GS)的研究结果表明 ,高浓度NH+4阻遏了GS的生物合成。从不同氮源生长条件下林肯链霉菌中分离纯化了GS ,其性质没有差别。以受腺苷化调节的产气克雷伯氏菌GS作对照 ,林肯链霉菌GS没有明显的氨休克作用 ,经蛇毒磷酸二酯酶处理后 ,其活力没有变化。这些结果都说明林肯链霉菌GS不存在腺苷化共价修饰这一调节方式。反馈抑制作用是林肯链霉菌GS的一种重要的调节方式 ,这种抑制作用是以累积的方式进行的 ,这表明各种抑制剂对GS作用位点不同 ,各种抑制剂对GS的抑制作用是相互独立的。由此推测 ,林肯链霉菌GS是一种变构酶。; 金詟焦瑞身毛裕民; 关键词：谷氨酰胺合成酶酶活性

遗传密码的信息内涵及其与氨基酸的对应联系被引量：4: 2001年; 为了探讨遗传密码的起源 ,本文系统考察了四种核苷酸和各类密码子的编码信息、密码子与氨基酸的对应分类关系 ,发现 :①四种核苷酸的编码能力依次为A >U >G >C ;②嘌呤型 (PP)、嘧啶型 (MM)与嘌嘧混合型 (PM)密码子的编码能力表现为PP >MM >PM ;③氨基酸与碱基型密码子的对应分类关系较为确定 ,其中PP有酸性、碱性及酰氨型氨基酸 ,MM有芳香族、杂环族氨基酸 ;PM有脂肪族氨基酸编码的偏爱性 .认为遗传密码与氨基酸对应联系的起源不是随机发生的 .; 许晓风汪四水金詟胡艳; 关键词：遗传密码氨基酸

定量PCR的非同源对照模板的构建被引量：6: 2001年; 建立了HCVRNA和hTERTmRNA的竞争定量PCR系统。对照模板的构建方法是 :利用计算机辅助优选设计连接引物 ,低严紧型扩增大肠杆菌DNA ,回收并克隆预期的DNA片段。该片段与靶序列除两端引物序列完全相同外 ,无同源性 ,因此可作为非同源对照模板。这种构建非同源对照模板的方法 ,简便易行。; 陈燃金詟毛裕民; 关键词：异源双链大肠杆菌

耐热碱性磷酸酶突变体耐热性变化机理研究被引量：1: 2003年; 从耐热碱性磷酸酶 (TAP) 2 0 0多个随机突变体的克隆库中选出耐热性明显下降的 4株突变体 ,进行全序列及表达产物的最高耐受温度和最适反应温度测定和酶分子高级结构的模拟 ,分析突变位点、高级结构和耐热性表现三者的关系 ,探讨引起耐热性变化的机理。结构模拟显示所有突变位点都仅能引起细微的、局部的结构变化 ,除T3 2 0→I外都未直接触及酶的活性中心 ;结构上的细微改变虽然对最适反应温度影响不明显 ,但却使最高耐受温度降低了 10℃左右 ;T3 2 0→I靠近酶的活性中心 ,尽管未能引起结构的较大变化 ,但却使最高耐受温度和最适反应温度同时显著降低。可见 ,多数点突变对高级结构的影响都不剧烈 ,但对耐热性尤其是最高耐受温度的影响却比较明显 ,一般地 ,在非活性区的突变通常只能引起最高耐受温度的降低。; 郁锋许晓风金詟; 关键词：耐热碱性磷酸酶突变体耐热性

甲硒氨酸耐热邻苯二酚2,3双加氧酶的高表达和分离纯化被引量：5: 2000年; 甲硒氨酸多波长反常散射法是国际上 90年代发展的蛋白质晶体结构测定的新方法 ,该法得以实施的首要一步是获得硒取代 (硫 )的高纯蛋白质 .通过亚克隆将编码耐热邻苯二酚 2 ,3双加氧酶 (简称TCTD)的基因PHEB克隆至表达载体 pRSET ,得到了高表达质粒pRSET PHEB ,转入Met缺陷的菌株B834DE3.通过诱导表达和分离纯化得到了甲硒氨酸参入的TCTD .经质谱测定发现TCTD的所有 7个甲硫氨酸都被甲硒氨酸所替代 ,这为Se Met多波长反常散射法研究TCTD的晶体结构打下了基础 .; 季朝能姜涛殷长传殷长传金詟金詟张志鸿; 关键词：纯化

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