陈利苹 作品数:27 被引量:51 H指数:3 供职机构: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 更多>>
副结核分枝杆菌MAP1068胞外蛋白酶的特性研究 被引量:1 2019年 为研究副结核分枝杆菌(MAP)1068蛋白的特性,本研究以MAP参考株K10基因组为模板,PCR扩增其map1068基因,构建p ET28a-map1068重组载体,将其转化BL21后诱导表达并纯化MAP1068蛋白。利用纯化的重组蛋白免疫(100μg/只/0.1 m L)小鼠制备多克隆抗体,应用该抗体对MAP1068蛋白进行亚细胞定位。以酪蛋白为底物测定MAP1068蛋白的酶活性。结果显示,MAP1068蛋白以包涵体形式表达;经变性、复性、亲和层析纯化后获得目的蛋白;将该蛋白免疫小鼠后其血清抗体效价可达1∶204 800;该蛋白主要定位于MAP细胞壁,可降解酪蛋白,为胞外蛋白酶。本实验为进一步研究MAP的致病机制奠定了基础。 王忠星 党光辉 党光辉 臧鑫鑫 崔莹莹 崔莹莹 宋宁宁 宋宁宁 陈利苹关键词:副结核分枝杆菌 酶活性 结核分枝杆菌rv3802c基因双顺反子真核表达质粒的构建及鉴定 2014年 为了构建结核分枝杆菌rv3802c基因双顺反子真核表达质粒,本研究利用重叠延伸PCR技术扩增出rv3802c-HisFlag基因片段,将其克隆到真核表达载体pCDNA3.1(+)上,测序验证后,将基因合成的内部核糖体进入位点和增强型红色荧光蛋白基因片段(IRES-DsRed2)定向插入到这个重组质粒上,经酶切鉴定获得双顺反子表达质粒pC3.1-3LHF-Red。将质粒pC3.1-3LHF-Red转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,通过荧光显微镜观察到增强型红色荧光蛋白成功表达;经Western blot分析表明Rv3802c-HisFlag融合蛋白在CHO细胞中获得了表达。结果表明,本研究成功构建了共表达增强型红色荧光蛋白和Rv3802c-HisFlag融合蛋白的双顺反子表达质粒pC3.1-3LHF-Red,为进一步研究结核分枝杆菌Rv3802c蛋白在分枝杆菌感染细胞过程中的作用奠定基础。 张娈娈 陈利苹 曹俊 崔保亮 李华芳 刘思国关键词:CHO细胞 一种大肠杆菌与副猪嗜血杆菌穿梭载体pSHK4及制备方法与应用 本发明涉及基因工程技术领域,目的在于构建一种大肠杆菌与副猪嗜血杆菌之间的穿梭载体,该载体被命名为pSHK4,其包含有如序列表SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列,它的编码区位于该序列的927-1742位序列对应的序列,... 徐晓娟 陈利苹 陈焕春 蔡旭旺 吴东方 郭凤娟 王湘如文献传递 结核分枝杆菌rv0199基因在耻垢分枝杆菌中的表达及检测 被引量:2 2014年 为研究结核分枝杆菌(M.tb)rv0199基因在该病原致病性中可能发挥的作用,本研究克隆了rv0199基因,在耻垢分枝杆菌(Ms)中异源表达,并对其表达进行检测。将大肠杆菌—分枝杆菌穿梭表达载体pMV261进行改造,向载体中引入常用的6His和StrepⅡ重组蛋白标签,命名为pMV262。使用Ms/pMV262表达系统对rv0199基因进行超表达,用抗6His标签抗体和抗StrepⅡ标签抗体均能特异的检测到重组蛋白。本试验改造的pMV262穿梭表达载体可很方便的检测M.tb的基因在Ms中的异源表达,不用制备针对蛋白的多克隆抗体或单克隆抗体。构建的重组菌Ms/262-99为进一步研究rv0199基因的功能提供了材料,奠定了基础。 崔保亮 陈利苹 张娈娈 李华芳 刘思国关键词:结核分枝杆菌 耻垢分枝杆菌 副猪嗜血杆菌分离株内源性质粒的分离、分析及应用 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)是猪上呼吸道的一种常在菌,特定条件下可入侵机体引起严重的全身性感染,称为格拉瑟氏病,表现为多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。世界各主要养猪国家都有该病发生或流... 陈利苹关键词:副猪嗜血杆菌 穿梭载体 文献传递 结核分枝杆菌新型分泌性核酸酶(Rv0888)的特性研究 引言许多种细菌能产生胞外核酸酶,胞外核酸酶在细菌毒力、生物被膜的形成、利用胞外DNA作为营养和降解胞外诱捕网(NETs)的DNA中起着重要作用。结核分枝杆菌(M. tuberculosis)是引起结核病的主要病原菌,为革... 党光辉 曹俊 崔莹莹 宋宁宁 陈利苹 庞海 刘思国文献传递 鸡肠炎沙门氏菌转座突变体库的构建及减毒菌株的筛选 2013年 为筛选减毒肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)菌株,本研究以含有Mini-Tn5转座子的重组自杀质粒pUT对S.enteritidis SM6株进行转座诱变,利用双亲本滤膜杂交方法与供体菌E.coliβ2155进行接合转移,构建并优化接合转移体系,利用卡那抗性和DAP营养缺陷培养平板筛选法构建了SM6的随机转座突变体库。其中包含5个子库,共计获得364株突变体,经PCR鉴定表明转座子均插入SM6株的基因组中。通过Caco-2细胞侵袭试验筛选S.enteritidis侵袭力减弱并在细胞内增殖受到抑制的减毒突变株,经初筛及验证最终获得3株稳定减毒菌株,为进一步研究减毒菌株突变毒力基因的定位及SM6株的侵袭及感染机制奠定了基础。 吕爽 朱婷 王秀梅 刘慧芳 司微 于申业 陈利苹 刘思国关键词:肠炎沙门氏菌 转座子 突变体库 猪源链球菌的分离鉴定及生物学特性研究 被引量:24 2007年 通过生化试验、药敏试验、PCR分型、毒力基因的PCR检测及动物试验对分离的猪源链球菌进行药物敏感性、血清型和分子流行病学初步研究。从不同省份猪链球菌病疑似病例猪的心血、肝、淋巴结、脑和关节液组织分离出97株链球菌,药敏试验结果表明各菌株对13种抗菌素的耐药谱不同,但对先锋霉素V和环丙沙星的耐药率均低于5%。通过对分离菌株进行PCR鉴定和分型,确认26株为猪链球菌,其中1株为1型,16株为2型,4株为7型,没有9型,另5株为其它型。进一步对1型、2型和7型猪链球菌mrp、epf和sly3种毒力基因的分布情况进行了PCR检测。动物试验表明能100%致死小白鼠的猪链球菌基因型均为epf+mrp+sly+2型猪链球菌,1株2型和1株7型猪链球菌均能复制出典型的猪链球菌病例。 赵战勤 胡睿铭 吴斌 向敏 陈利苹 杨明柳 金梅林 陈焕春关键词:链球菌 药敏试验 PCR 毒力因子 细菌菌蜕在制备病毒性疫苗佐剂中的应用 本发明公开了细菌菌蜕在制备病毒性疫苗佐剂中的应用,本发明还公开了一种细菌菌蜕的大规模发酵方法。本发明的有益效果主要体现在:本发明提供了细菌菌蜕的大规模制备方法,为菌蜕疫苗的商品化生产奠定了坚实的基础;此外,本发明系统性的... 刘思国 于申业 司微 危艳武 陈利苹文献传递 一种新型的结核分枝杆菌胞外核酸酶及其用途 本发明公开了一种新型的结核分枝杆菌胞外核酸酶及其用途。本发明证实了Rv0888是结核分枝杆菌的一个胞外核酸酶。基于序列分析,Rv0888核酸酶与已知的胞外核酸酶没有同源性,表明Rv0888是一个新型的胞外核酸酶。Rv08... 刘思国 陈利苹 宋宁宁文献传递