陈检
- 作品数：9 被引量：9H指数：2
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- RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用
- 本发明提供了一种RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用。本发明所述RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.12所示。本发明的融合蛋白通过以下制备方法获得：采用重叠延伸PCR...
- 周建中汪德强苟冶然龙小滨陈检杨可白垒雷寒黄爱龙何泉张宏鹏
- 文献传递
- 重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的:表达和纯化重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,并初步鉴定其生物学活性。方法:利用重叠延伸PCR方法使基因重组获得目的基因片段,插入带有GST标签的原核高效可溶性表达载体pEGX-6P-1中,构建重组表达质粒pEGX-6P-1-SAK-HC,将重组表达质粒转化大肠杆菌B834,经IPTG诱导目的蛋白表达;对融合蛋白用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱(GST)亲和层析柱及DEAE离子交换柱纯化,用PreScission蛋白酶切除GST标签,SDS-PAGE分析该融合蛋白的表达量和纯度,应用纤维蛋白平板溶圈法测定评价其生物学活性。结果:构建的重组表达质粒经PCR、内切酶鉴定及基因序列测定证实,目的蛋白在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)为36 000;对表达产物进行了亲和层析纯化,从上清中获得了纯度较高的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,体外实验显示其纤溶活性为9.4×104IU/mg。结论:获得了可溶性的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,且其纤溶活性与尿激酶标准品相当。为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础。
- 陈检杨可郭珍张阳丽张绍城杨伟赵沙沙何泉汪德强周建中
- 关键词：重组葡激酶融合蛋白表达纯化体外活性
- RGD‑重组葡激酶‑人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用
- 本发明提供了一种RGD‑重组葡激酶‑人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用。本发明所述RGD‑重组葡激酶‑人α微球蛋白融合蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.12所示。本发明的融合蛋白通过以下制备方法获得：采用重叠延伸PCR...
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- 文献传递
- 一种组织型纤溶酶原激活剂的构建、表达纯化及功能鉴定
- 一种重组组织型纤溶酶原激活剂，即r‑tPA，重组质粒的构建及其原核上清表达及纯化方法，它涉及组织型纤溶酶原激活剂重组质粒的构建、原核表达及纯化技术；本发明在含有人tPA全长基因质粒基础上在N端引入能去除载体上标签的3C序...
- 汪德强周建中龙小滨够怡然白垒黄爱龙张宏鹏杨可陈检
- 文献传递
- RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白原核表达、纯化及鉴定被引量：3
- 2015年
- 目的构建RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化并初步鉴定其生物学活性。方法利用重叠延伸PCR获得目的融合基因片段RGD-r SAK-α1M,插入带有His-GST标签的原核高效可溶性表达载体PEGX-6P-1中。经酶切鉴定后,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,经Ni+亲和层析柱纯化后用3C蛋白酶切除重组蛋白的His-GST标签,再利用DEAE离子交换柱和分子筛纯化蛋白。最后应用纤维蛋白平板溶圈法和血小板聚集抑制试验分别测定评价重组融合蛋白的溶栓活性和抗血小板聚集作用。结果 1)成功构建了RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白。2)实现了目的融合蛋白在大肠杆菌上清液中的高效表达,并纯化了融合蛋白。3)体外实验表明纯化后的融合蛋白纤溶活性同尿激酶标准品无明显差异。4)融合蛋白抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶明显提高。结论经文献检索确认为首次获得了纯化的RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白,并验证了其纤溶活性和尿激酶标准品无明显差异,而抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶增强,为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础。
- 苟冶然龙小滨白磊何泉陈检张绍城汪德强周建中
- 关键词：重组葡激酶RGD融合蛋白抗血小板聚集
- 严重急性失代偿心力衰竭患者血浆copeptin水平的意义
- 目的:探讨在中国人群中copeptin水平与严重急性失代偿性心力衰竭预后的相关性.
方法:选取2012年2月至2013年3月间于我院心内科就诊的急性失代偿性心力衰竭患者共200人,收集所有患者的临床资料,并测量...
- 雷宇陆凯陈检范忠才
- 关键词：血浆检测预后评估
- 重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白的原核表达、纯化及功能鉴定
- 目的表达和纯化重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,并初步鉴定其生物学活性。方法利用重叠延伸PCR方法使基因重组获得目的基因片段,插入带有GST标签的原核高效可溶性表达载体pEGX-6P-1中,构建重组表达质粒pEGX-6P-...
- 陈检周建中杨可郭珍张阳丽张绍成杨伟赵莎莎何泉汪德强
- 稀有密码子对人源Id2基因表达的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:通过对人Id2基因的稀有密码子进行突变并构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌(escherichia coli,E.coli)中表达Id2蛋白,分析稀有密码子对Id2基因表达的影响。方法:PCR扩增突变Id2基因序列,然后转入E.coli BL21中进行表达,利用镍离子亲和层析、离子交换层析及分子筛纯化。结果:正确构建了Id2基因的基因突变表达质粒,基因突变表达的Id2蛋白在E.coli BL21中为可溶性上清表达,成功纯化了目的蛋白,且分子筛结果显示其在溶液中呈现二聚体状态。结论:稀有密码子对Id2蛋白在E.coli BL21中大量可溶性上清表达有重要影响。
- 杨伟周华赵沙沙金丽郭珍张绍城陈检汪德强
- 关键词：ID2突变纯化
- 一种组织型纤溶酶原激活剂的构建、表达纯化及功能鉴定
- 一种重组组织型纤溶酶原激活剂，即r-tPA，重组质粒的构建及其原核上清表达及纯化方法，它涉及组织型纤溶酶原激活剂重组质粒的构建、原核表达及纯化技术；本发明在含有人tPA全长基因质粒基础上在N端引入能去除载体上标签的3C序...
- 汪德强周建中龙小滨够怡然白垒黄爱龙张宏鹏杨可陈检
- 文献传递
