马春姑
- 作品数：10 被引量：50H指数：3
- 供职机构：复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：上海市卫生局中医药科研基金国家中医药管理局中医药科学技术研究专项上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 含人纤溶酶原K5基因的腺病毒载体制备和功能研究被引量：2
- 2003年
- 应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA基因 ,与真核表达载体pcDNA3重组 ,形成重组质粒pcDNA3K5 ,与穿梭质粒pShuttle重组得pShuttleK5 ,经与腺病毒DNA重组 ,PCR鉴定正确 ,即为pAd K5。脂质体法将其转染 2 93细胞后 ,制备细胞裂解液 ;噬斑分析法测定病毒滴度为 5× 10 8pfu mL。将病毒以不同的感染系数 (MOI)感染人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,MTT法检测两者的增殖情况 :ECV30 4细胞增殖受抑制 ,而MDA MB 2 31细胞增殖未受明显影响。将感染病毒的ECV30 4细胞接种于ECMatrixTM胶 ,显示内皮细胞分化和毛细血管管腔形成受抑制。表明所构建的含人纤溶酶原K5基因的重组复制缺陷型腺病毒具有抑制ECV30 4细胞增殖、分化和管腔形成的作用而对MDA MB 2 31细胞的生长则无影响。
- 杨健王跃祥官孝群马春姑王龙生宋后燕
- 关键词：腺病毒基因治疗肿瘤
- 人源性组织因子在SP2/0细胞中的初步表达被引量：2
- 2009年
- 构建组织因子表达质粒并转染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0,分泌表达有活性的组织因子。用阳离子聚合物法将构建好的转染质粒pIRESneo3-TF1-218转染入SP2/0细胞,经G418抗性筛选后,蛋白可由SP2/0细胞无血清培养分泌表达。G418 800ug/ml筛选到的表达克隆,经无血清培养,可分泌表达,western blot证明其为人组织因子衍生物,Mr为40k,脂化后,具有促凝血活性。成功构建组织因子蛋白表达质粒pIRESneo3-TF1-218。
- 王羽雄马春姑顾银良宋后燕于敏
- 关键词：稳定转染凝血酶原时间
- TCM对3T3-L1脂肪细胞分化过程的影响
- 目的:研究从中国传统中药地黄中得到的粗提物TCM对3T3-L1脂肪细胞分化过程的影响,探讨可能的分子机制.
方法:用3T3-L1前脂肪细胞株建立成熟的体外诱导脂肪细胞分化的药理模型,通过细胞形态学直接观察、核酸...
- 张乃娴马春姑陈幼妹汤其群宋后燕
- 关键词：TCM脂肪细胞分化转录调控因子药理模型
- 文献传递
- 胰岛素、地塞米松、甲基异丁基黄嘌呤对脂肪细胞分化过程及PAI-1基因表达的影响被引量：6
- 2002年
- 目的 通过体外培养的 3T3 L1细胞分化模型 ,研究胰岛素 (Ins)、地塞米松 (Dex)和甲基异丁基黄嘌呤(Mix)对脂肪细胞分化过程及纤溶酶原激活剂抑制剂 1(PAI 1)基因表达的影响。方法 观察Ins与Dex及Mix加入前后脂肪细胞形态的变化 ,并应用RT PCR方法 ,在不同浓度的Ins、Dex和Mix及其不同组合的条件下 ,对3T3 L1细胞分化为脂肪细胞过程中PAI 1mRNA表达水平进行相对定量分析。结果 Ins与Dex及Mix显著促进了 3T3 L1细胞向脂肪细胞分化 ,Ins、Dex及其组合Ins加Dex对PAI 1基因的表达有促进作用 ,其中尤以0 .15 μmol/LIns加 0 .1μmol/LDex的作用最为显著 ,且有叠加效应。 结论 Ins与Dex加Mix对 3T3 L1细胞分化为脂肪细胞起重要作用 ,同时Ins、Dex对PAI 1基因表达也有显著影响 。
- 陈可洋马春姑陈幼妹汤其群宋后燕
- 关键词：脂肪细胞胰岛素地塞米松纤溶酶原激活剂抑制剂-1
- 重组腺病毒介导VEGF_(121) cDNA体外转移与表达
- 2003年
- 构建携带VEGF12 1cDNA重组复制缺陷型腺病毒表达载体 ,制备重组腺病毒 ,该腺病毒能介导VEGF12 1cDNA基因促进人脐静脉血管内皮细胞增殖 ,促进毛细血管管腔样结构形成 .ELISA检测表明VEGF12 1cDNA基因表达产物分泌至培液上清 ,并显示强烈血管通透作用 .为进一步利用重组腺病毒介导VEGF12
- 王跃祥杨健马春姑杨新英宋后燕
- 关键词：重组腺病毒基因转移血管内皮细胞生长因子
- 人纤溶酶原K5区基因真核表达载体的构建和活性鉴定被引量：3
- 2003年
- 目的 构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体 ,转染人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和MDA MB 2 31细胞增殖的影响。方法 应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA ,所得的目的片段与真核表达载体 pcDNA3重组 ,构建重组质粒pcDNA3K5 ,脂质体法将其转染MDA MB 2 31,G4 18筛选阳性克隆 ,PCR鉴定 ,RT PCR和Westernblot检测K5的表达。将鉴定正确的阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞 ,MTT法检测其增殖情况 ,并用MTT法检测转染 pcD NA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖的影响。结果 构建的重组质粒 pcDNA3K5经酶切鉴定、测序正确 ,将其转染MDA MB 2 31后挑取的阳性克隆有 3个经PCR鉴定正确 ,并经RT PCR和Westernblot检测证实K5的表达。阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞后 ,其存活率降低 ;转染 pcDNA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖无明显影响。结论 应用脂质体法将带有人纤溶酶原信号肽序列的K5cDNA转染MDA MB 2 31细胞后 ,其分泌产生的有生物学活性的K5 ,呈现对ECV30 4细胞增殖的抑制作用 ,而对MDA MB 2 31细胞的生长则无影响。
- 杨健王跃祥官孝群马春姑陶贤梅宋后燕
- 关键词：乳腺癌基因治疗基因表达真核表达载体活性鉴定
- 大黄提取片对高脂饮食诱导肥胖大鼠脂代谢及相关基因表达的影响被引量：23
- 2006年
- 目的:观察大黄提取片对高脂饮食诱导肥胖大鼠脂代谢、骨骼肌脂联素受体1(AdipoR1)和过氧化物酶体增殖物激活受体a(PPARa)基因表达的影响,以探讨大黄的减肥作用机理。方法:给饮食诱导肥胖大鼠灌服低、中、高剂量(200,400,800mg.kg-1.d-1)大黄提取片,测定血脂、脂联素,应用Real-time PCR检测大鼠骨骼肌中AdipoR1和PPARa mRNA表达水平。结果:大黄提取片呈剂量依赖性的增强降脂作用,高剂量大黄提取片能显著降低肥胖大鼠血总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA),显著增加骨骼肌组织PPARa mRNA表达水平,但3种剂量大黄均不能明显改变脂联素和骨骼肌AdipoR1mRNA水平。结论:大黄提取片可通过增加肥胖大鼠骨骼肌PPARa表达、降低血脂水平而促进机体减肥。
- 查兵兵李益明焦东海洪晓武万睿马春姑马端
- 关键词：大黄提取片脂联素脂联素受体
- 脂肪细胞分化过程中影响PAI1基因转录表达的Dex和C/EBPs顺式调控元件的分析( 英文)被引量：2
- 2002年
- 在研究胰岛素 (Ins)、地塞米松 (Dex)和甲基异丁基黄嘌呤 (Mix)对脂肪细胞分化过程中PAI 1基因表达的影响基础上 ,为进一步探讨Ins、Dex调控PAI 1基因转录表达的调控机制 ,应用DNA重组技术 ,构建含萤光素酶 (luciferase)报告基因和PAI 1启动子不同长度片段的嵌合质粒 ,转染 3T3 L1前脂肪细胞并测定报告基因荧光素酶的活性 .结果表明 ,小鼠PAI 1基因起动子 - 6 90至 - 85 0碱基序列之间有一个Dex的正调控元件 .用计算机软件进行分析发现 :Dex顺式元件位于PAI 1启动子的 - 75 0至 - 770碱基序列 .其组成为 :5′GGTAACCTCTGTTCTCAT 3′ .同时还发现在PAI 1启动子的- 72 0至 - 74 0碱基序列中 ,存在一个C/EBPs的结合元件 5′CCAAT3′并用凝胶电泳迁移实验对这些元件进行了鉴定 .表明Dex正是通过激活转录因子 (糖皮质激素受体 ,GR)和C/EBPα一起与各自的顺式元件结合来促进PAI 1基因的表达 .
- 陈可洋马春姑汤其群宋后燕
- 关键词：PAI-1基因转录表达DEX顺式调控元件
