高劲松
- 作品数：1 被引量：19H指数：1
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- 永生化人晶状体上皮细胞细胞周期调控相关基因表达的检测被引量：19
- 2002年
- 目的 探讨人类晶状体上皮细胞 (humanlensepithelialcells,HLEC)周期调控中的细胞周期蛋白E、细胞周期蛋白激酶 (cyclindependentkinase 2 ,CDK2 )和细胞周期蛋白激酶抑制因子 (cyclin dependent kinaseinhibitor,CKI)p2 1基因的表达 ,阐明HLEC增殖和晶状体后囊膜混浊 (posteriorcapsuleopacification ,PCO)的分子机制。方法 体外培养永生化HLEC系HLE B3,用二步过量胸苷阻断法进行细胞周期同步化 ;流式细胞仪检测细胞周期 ;收集不同时相的细胞提取总RNA。用逆转录聚合酶链反应 (reversetranscriptionpolymerasechainreaction ,RT PCR)方法检测细胞周期蛋白E、CDK2 和p2 1的mRNA表达 ;分别用免疫组织化学染色和Westernblot法检测细胞周期蛋白E和CDK2 及p2 1的蛋白表达。结果 流式细胞仪检测 :HLE B3细胞周期处于G1期 ,占 33 5 % ;S期 ,占 4 6 1% ;G2 期 ,占2 0 4 % ;处于S期及G2 期细胞的比例约占总数的 6 6 5 %。RT PCR检测 :可见不同周期时相的HLE B3细胞 (细胞周期蛋白E和CDK2 )mRNA的表达 ,但在不同步化的细胞时相中未检测出细胞周期蛋白E的表达。而在同步化的S期细胞中有少许p2 1mRNA表达。免疫组织化学染色未检测出细胞周期蛋白E阳性细胞 ,仅可检测出少部分p2 1阳性细胞。Westernblot法检测?
- 吴明星李绍珍曾骏文高劲松刘奕志
- 关键词：晶体上皮细胞细胞周期蛋白E细胞周期蛋白质依赖激酶类
