黄瑾
- 作品数：4 被引量：24H指数：3
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- 细粒棘球蚴中国大陆株重组14-3-3蛋白基因的克隆和序列分析被引量：7
- 2006年
- 目的对细粒棘球蚴中国大陆株14-3-3蛋白(E．g-14-3-3Pc)基因进行克隆及序列分析,为进一步重组抗原的表达奠定基础。方法根据互联网GeneBank中检索到的E．g-14-3-3Pc序列设计一对PCR 引物,用RT-PCR方法以细粒棘球蚴总RNA为模板扩增出目的DNA片段,并克隆于载体pGEM-T,测定其核苷酸序列。结果成功克隆出E．g-14-3-3Pc基因片段,测序证明克隆基因确为E．g-14-3-3Pc。结论成功构建细粒棘球蚴pGEM-E．g 14-3-3菌株。
- 黄瑾赵嘉庆王娅娜丁淑琴王健李宗吉张静赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴重组抗原
- 细粒棘球蚴谷胱甘肽s-转移酶重组抗原的高效融合表达、纯化及免疫特性的研究被引量：8
- 2007年
- 目的构建细粒棘球蚴重组蛋白谷胱甘肽s-转移酶(EgGST)的表达载体,获得纯化的重组蛋白,并对其免疫学特性进行初步鉴定,为重组疫苗研制的后续工作提供依据。方法从本室已构建的重组质粒GST/pGEM-T中酶切下GST目的片段,亚克隆入表达载体pET28a,转化入大肠杆菌BL21plys进行融合表达,经His-bind树脂纯化系统小量纯化,得到纯化的重组融合蛋白作为抗原。免疫ICR小鼠,获得抗血清。通过蛋白免疫印迹试验(Western blot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重组抗原的免疫学特性。结果成功构建具有高效表达能力的基因工程菌株,并纯化了重组蛋白,纯化的重组抗原免疫小鼠的抗血清可识别天然与重组抗原,实验组血清与对照组血清抗体含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组蛋白具有良好的抗原性和免疫原性。
- 李宗吉黄瑾张静张焱王洁王淑静高岭赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴谷胱甘肽S-转移酶免疫印记酶联免疫吸附试验
- 细粒棘球蚴重组14-3-3基因的表达、纯化及免疫学鉴定被引量：10
- 2006年
- 目的构建细粒棘球蚴14-3-3基因的重组质粒并原核表达、纯化该重组蛋白,对其免疫学特性进行初步鉴定。方法从重组质粒pGEM-T/Eg14-3-3中获取14-3-3基因,亚克隆于表达载体pET28a构建基因工程菌株,并表达、纯化重组蛋白,经Western blot、ELISA对该蛋白的免疫学特性进行初步研究。结果成功构建含目的片段14-3-3的基因工程菌株;ELISA检测显示,用表达、纯化的重组蛋白免疫小鼠,诱导产生了特异性抗体,Western blot鉴定该抗体能识别重组抗原及原头蚴、囊液、囊壁抗原。结论构建的pET28a/Eg 14-3-3菌株能高效表达14-3-3蛋白,初步鉴定该重组蛋白具有较好的抗原性和免疫原性。
- 黄瑾李宗吉张静王淑静王洁张焱高岭赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴基因克隆纯化
- 细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因的克隆和序列分析被引量：3
- 2006年
- 目的对细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因进行克隆和序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据国外细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因的已知序列设计一对引物,采用RT-PCR技术扩增,将PCR产物纯化后,将其克隆到pGEM-T载体后进行序列测定以及生物信息学分析。结果用RT-PCR成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因,测序表明该基因开放阅读框为660bp,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为99%。结论成功克隆了细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因序列,为其进一步的研究奠定基础。
- 李宗吉赵嘉庆王娅娜王健丁淑琴黄瑾张静赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴克隆
