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排序方式：

高致病性PRRSV缺失变异株Nsp2基因的克隆与遗传变异分析被引量：3: 2008年; 从湖南省内多个出现疑似猪"高热病"症状的猪场采集病料70份,采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查.结果检出PRRSV阳性病料54份,阳性率高达77.14%(54/70).对其中8份分别来自娄底、浏阳、永州、双峰、益阳、株洲、宁乡和溆浦的病料中的PRRSV基因组Nsp2高变区部分基因片段进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定分析.与国内外美洲型PRRSV分离株比较,序列相似性为72.2%～100%,其中,与公布的高致病性PRRSV缺失变异毒株的同源性最高,序列相似性为98.2%～100%.序列分析表明,这些毒株均是天然存在缺失的变异毒株,其Nsp2均有2个部位出现了缺失,分别为编码1个氨基酸的3个核苷酸的缺失和编码29个氨基酸的连续87个核苷酸的缺失,与高致病性PRRSV缺失变异毒株序列的缺失情况完全一致,且与其具很高的同源性,从而确定了分离的毒株均为引起猪"高热病"的猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株,这是国内外少见的PRRSV缺失变异及毒力显著增强的现象.; 黄泽彬李润成尹德明颜运秋刘忠华丁建汪镇南余兴龙; 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因

卵黄抗体和灭活疫苗同时注射紧急预防H5N1亚型禽流感被引量：5: 2008年; 丁建余兴龙白霞刘春红李润成黄泽彬汪镇南刘忠华; 关键词：H5N1亚型禽流感病毒灭活疫苗卵黄抗体 A型流感病毒公共卫生意义

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病RT-PCR快速鉴别诊断方法的建立与临床应用被引量：18: 2008年; 根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2基因的缺失信息,设计了3条特异性引物,以含高致病性PRRSVNsp2基因的质粒pMDNSP2及普通PRRSVVR2332株RNA为模板,建立了快速诊断高致病性PRRSVRT-PCR方法。通过对临床组织病料的总RNA进行不同稀释倍数检测,结果表明该方法能从0.265pg的总RNA中检测到PRRSV的基因,说明敏感性高。用该方法对猪瘟病毒(CSFV)、Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)、伪狂犬病病毒(PRV)、链球菌(Streptococcus)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis)和大肠杆菌(Escherichiacoli)同条件检测,结果都为阴性。进一步对36份疑似高致病性PRRSV临床组织病料细胞培养物、2株PRRSV商品活疫苗以及52个猪场所送检的184份临床样品进行了检测应用,结果36份疑似高致病性PRRSV临床组织病料的细胞培养物有5份样品为阳性且都为高致病性PRRSV,2株PRRSV商品活疫苗为普通PRRSV,52个猪场中有42个猪场(123份样品)呈阳性,其中只有1份为普通PRRSV。实验表明该方法能够准确地鉴别诊断高致病性PRRSV和普通PRRSV,且具有快速、敏感和特异的特点,具有临床实用性。; 刘忠华余兴龙李润成黄泽彬廖立珊白霞李晶向卫军汪镇南丁建

首次从国内鉴定到猪肠道杯状病毒及其分子流行病学调查被引量：12: 2009年; 目的了解国内猪札如病毒（猪肠道杯状病毒成员）的存在和流行情况。方法从多个腹泻猪场共采集腹泻猪粪便189份，采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查。结果检出猪札如病毒阳性病料24份，阳性率为12.70%（24/189）。测序后与国外已发表的毒株比较，表明了所测定流行毒株的序列与猪札如病毒代表株Cowden相近（同源性介于75.6%-88.3%之间），证实了其均为猪札如病毒。结论首次发现我国猪群中存在猪札如病毒。; 黄泽彬余兴龙李润成谢小雨尹德明颜运秋白霞刘忠华丁建汪镇南黎满香; 关键词：腹泻

猪札幌病毒VP1基因的表达及ELISA抗体检测方法的建立被引量：1: 2012年; 为了在大肠杆菌中表达猪札幌病毒VP1基因,并以纯化的重组蛋白为抗原建立猪札幌病毒血清抗体ELISA检测方法。采用RT-PCR技术扩增VP1基因,并将其克隆到pMD18-T载体中,再将所克隆的衣壳蛋白的编码序列亚克隆到表达载体pET-28a(+)中,将成功构建的原核表达质粒pETSAVCAP转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达。用纯化的VP1蛋白作为抗原建立了猪札幌病毒血清抗体间接ELISA检测方法并初步用于临床样品的检测。结果显示,猪札幌病毒VP1基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达,Western-blot分析表明该重组蛋白具有良好的反应原性。经对反应条件进行优化,确定间接ELISA的抗原最佳包被浓度为0.5μg/mL,且不与其他常见猪病的阳性血清发生交叉反应,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。通过对从多个省份收集的490份猪血清样品进行检测,阳性率为65.31%。表明,以大肠杆菌表达的猪札幌病毒VP1重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法可以用于猪札幌病毒抗体的检测。; 李润成刘国华黄泽彬丁建汪镇南肖朝庭余兴龙; 关键词：VP1基因酶联免疫吸附试验抗体

猪'高热病'相关猪繁殖与呼吸综合征病毒不同缺失变异株Nsp2基因、糖蛋白基因的克隆与遗传变异分析: 从湖南省内各地区多个出现可疑猪'高热病'症状的猪场共采集病料70份,采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查。检出PRRSV阳性病料54份,阳性率高达77.14％(54/70)。对其中八份分别来自湖南娄底、淑浦、益阳、浏...; 黄泽彬刘忠华丁建汪镇南李润成余兴龙; 关键词：猪高热病猪繁殖呼吸综合征病毒糖蛋白; 文献传递

猪瘟病毒E^(rns)基因RNase酶活性位点的定点突变对其原核表达的影响被引量：3: 2008年; 利用重组PCR技术将猪瘟病毒兔化弱毒株(Hog cholera virus lapinized Chinese strain,HCLV)Erns编码区30位His残基密码子CAT突变为Pro残基密码子CCC,将突变后的基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建成重组质粒pETmErns,并将此重组子转入宿主菌BL21(DE3)plysS中,在IPTG的诱导下表达重组转化菌.结果:突变的mErns基因能在pET表达系统成功表达.用Western blotting检测表明,所表达的蛋白是猪瘟病毒特异性的,但克隆于pET-28a(+)中未突变的Erns基因却不能表达,说明Erns基因的RNA酶活性是影响该基因在Escherichia coli中表达的因素之一.; 白霞李润成余兴龙丁建黎满香; 关键词：猪瘟病毒定点突变原核表达

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丁建