乔明明
- 作品数：40 被引量：100H指数：5
- 供职机构：北京世纪元亨动物防疫技术有限公司更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 一种用于反转录聚合酶链式反应试剂盒的阳性对照组合物及其制备方法
- 本发明提供了一种用于反转录聚合酶链式反应试剂盒的阳性对照组合物及其制备方法，其特征在于以一种非靶病毒作为阳性对照，同时设计一对引物，进行扩增，扩增的片段长度与反转录聚合酶链式反应试剂盒的目的基因的长度相同；非靶病毒用异硫...
- 孙明陈西钊乔明明赵铁柱田克恭
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查被引量：44
- 2009年
- 2006年6月份以来,我国多个省份暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征,给我国养猪业造成了巨大经济损失。为全面了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国的流行情况以及遗传变异规律,本研究采用RT-PCR的方法,对从2006年8月至2007年10月期间,来自于19省(市)共474份样品进行高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸的检测,结果检出阳性样品294份。在各省不同时期样品中均有阳性样品检出。通过对阳性样品进行Nsp2基因和ORF5基因扩增,序列分析发现所有检测的猪繁殖与呼吸综合征病毒株高度同源,为同一毒株遗传变异而来,所有猪繁殖与呼吸综合征毒株与HB-1株遗传关系最近;且Nsp2均缺失30个氨基酸。
- 侯丽丽赵铁柱遇秀玲曹振邓小雨乔明明张硕王斌陈西钊田克恭
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2ORF5
- 用于检测禽流感病毒H7亚型的引物对、探针、试剂盒及检测方法
- 本发明属于病毒检测领域，涉及一种用于检测禽流感病毒H7亚型的引物对、探针、试剂盒及检测方法。本发明所述的引物对其中一条引物包含SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，另一条引物包含SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，...
- 孙明陈西钊乔明明陈南华陈曦刘巧荣
- 文献传递
- 牛γ-干扰素在大肠杆菌中的表达及抗原性鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的在大肠杆菌中高效表达牛γ-干扰素(bovine interferon-γ,BovIFN-γ),并对其生物活性进行初步鉴定。方法依据GenBank上基因序列人工合成BovIFN-γ基因,PCR方法扩增该基因,将其插入PET-28a载体构建原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21中,在IPTG诱导下表达BovIFN-γ,并进行Western blot鉴定。Ni-NTA亲和层析法和电洗脱方法纯化表达的重组蛋白,用Western blot和商品化的BovIFN-γ检测试剂盒进行重组蛋白的抗原性检测。结果成功构建了BovIFN-γ原核表达载体PET-28a-BIFN-γ,并在大肠杆菌中高效表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的32%,表达产物主要以可溶性形式存在于菌体裂解液上清中;重组蛋白可与BovIFN-γ单克隆抗体反应,Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白抗原活性比电洗脱方法纯化的抗原活性高。结论在大肠杆菌中成功表达了可溶性的BovIFN-γ蛋白,可与BovIFN-γ单抗发生反应,纯化的重组蛋白具有良好的反应原性。
- 刘巧荣孙明乔明明杨璐申屠芬琴马永缨曹振田克恭陈西钊
- 关键词：原核表达抗原性大肠杆菌
- 规模化养殖场猪伪狂犬病的诊断
- 2014年
- 猪伪狂犬病常引起妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊胎以及新生仔猪的呼吸道损伤和神经症状。仔猪的发病率最高可达100％，给我国养猪业造成了巨大的损失。
- 冯向辉乔明明贺纪云孙明陈西钊
- 关键词：猪伪狂犬病规模化养殖场新生仔猪母猪流产神经症状木乃伊
- 犬病毒病分子生物学诊断技术与临床应用
- 本文介绍了聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)技术，目前已广泛应用到分子生物学研究的各个领域,在犬病毒病诊断中也得到广泛应用。
- 田克恭乔明明
- 关键词：犬病毒病分子生物学聚合酶链反应
- 文献传递
- 用于检测禽流感病毒N9亚型的RT-PCR引物对、试剂盒及检测方法
- 本发明提供一种用于检测禽流感病毒N9亚型的RT-PCR引物对、试剂盒及检测方法，属于病毒检测领域，本发明引物对由两条引物组成，其中一条引物AIV-N9-F3包含如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，另一条引物AIV-...
- 孙明陈西钊乔明明冯向辉王传彬才学鹏
- 文献传递
- 北京地区猪圆环病毒3型感染的检测及基因组遗传变异分析被引量：10
- 2018年
- 旨在了解北京地区猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)的流行现状、分子生物学特征和遗传变异规律,为PCV3的防控提供参考依据。采集北京地区规模化养殖场73份临床表现为繁殖障碍和呼吸系统疾病的组织样品,对其中的PCV3进行检测和测序。根据PCV3全基因组序列设计3对特异性引物,从患PDNS的断奶仔猪内脏组织中扩增PCV3全基因序列片段,克隆到pMD19-T载体中,经测序、拼接获得PCV3全长cDNA序列,利用DNAStar和DNAMAN生物软件对全基因组进行遗传变异分析。结果:北京地区PCV3感染率为30.1%(22/73),PCV3全基因组长2 000bp,GenBank序列登录号为MG546667,将该病毒命名为PCV3/CN/BJ-YH2016。其基因组有3个开放阅读框(ORF),其中两个ORF编码的蛋白与圆环病毒的复制相关蛋白(replication-associated protein,Rep)和衣壳蛋白(capsid protein,Cap)同源。PCV3/CN/BJ-YH2016与NCBI上30株PCV3基因组序列相似性为98.6%~99.3%,Rep蛋白氨基酸序列与美国毒株PCV3-US/MO2015(KX778720)的相似性最高(为100%),与中国毒株PCV3/CN/Guangdong-SG1/2016(MF589105)相似性最低(为95%),有16个氨基酸变异,全部集中在5-23位氨基酸。Cap蛋白氨基酸序列与美国毒株2164(KX458235)的相似性为100%,与其他毒株均有1~4个氨基酸发生变异,其中与PCV3-US/MO2015毒株相比变异位点分别位于24、26、56、100aa。以上试验结果表明,成功从患断奶仔猪多系统衰竭综合征仔猪体内克隆了PCV3全基因,并完成了序列分析,这些数据将为研究这种新型病毒——PCV3的遗传变异和流行病学特征提供分子生物学依据。
- 孙明马君乔明明刘巧荣田新生杨欣艳孙胜永陈西钊
- 关键词：全基因
- 大熊猫源犬瘟热病毒基因组遗传特征分析被引量：13
- 2015年
- 【目的】对首次暴发的大熊猫源性犬瘟热病毒(panda derived-canine distemper virus,P-CDV)全基因组进行克隆测序,以了解大熊猫源CDV的全基因组遗传变异情况,进一步追踪感染源,为大熊猫犬瘟热防控提供理论依据。【方法】根据Gen Bank公布的CDV全基因组序列设计17对特异性引物,利用RT-PCR技术,从感染犬瘟热病毒的大熊猫肺渗出液中分片段扩增CDV全基因序列,并克隆到p MD19-T载体中;经测序、拼接,获得第一个P-CDV全长c DNA序列;利用DNAman生物学分析软件分别对全基因组序列、H蛋白基因序列、F蛋白基因序列、P蛋白基因序列、M蛋白基因序列等进行遗传变异分析,构建系统进化树。【结果】经序列测序和拼接,大熊猫源犬瘟热病毒全基因组长15 690 nt,Gen Bank登录号为KP677502,主要编码6种蛋白,分别是N蛋白、P蛋白、M蛋白、F蛋白、H蛋白和L蛋白,在各个基因及间隔区中未发现碱基插入和缺失。遗传进化分析显示,P-CDV全基因组与20株代表性CDV全基因组序列同源性为91.5%—98.7%,P-CDV与强毒株MKY-KM08(HM852904)、PS、HLJ1-06(JX681125)、Hebei(KC427278)以及AC96I-H358(AB753776)在一个大的分支上,与PS株(JN896331)亲缘关系最近,同源性为98.7%,与标准野毒株Strain A75-17(AF164967)同源性为95.7%,与疫苗株CDV3(EU726268)亲缘关系较远,同源性为91.5%。H蛋白氨基酸序列分析和系统进化树表明,大熊猫源犬瘟热病毒属于强毒株,基因型为Asia-I型。P-CDV各蛋白基因与20株代表性的毒株相比有9处氨基酸发生了变异,与Gen Bank上现有的CDV序列相比,其中3处是独有的,分别是:F蛋白基因的208位由N(Asn,天冬酰胺,强毒株多为N)或K(Lys,赖氨酸,弱毒株多为K)变成了S(Ser,丝氨酸),第215位由S变成了A(Ala,丙氨酸),P蛋白基因的58位由Q(Gln,谷氨酰胺)变成K(Lys,赖氨酸)。【结论】成功克隆了大熊猫源犬瘟热病毒的全基因,并完成了序列分析,发现了在F、P基因�
- 金艺鹏刘巧荣孙明乔雁超乔明明刘伯华林德贵陈西钊
- 关键词：犬瘟热病毒大熊猫全基因组测序
- 感染CDV的犬病料N、H、F基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2011年
- 目的了解病料中犬瘟热病毒(CDV)的变异情况,为犬瘟热的预防与治疗提供理论依据。方法采用RT-PCR方法对犬病料中CDV的血凝素蛋白(H)、融合蛋白(F)和核衣壳蛋白(N)基因进行扩增,将扩增产物克隆到pGEM-T-easy载体中测序,并进行序列分析。结果测定一株CDV的H、F和N基因大小分别为1863 bp、1653 bp和2235 bp。同源性分析表明,未发现碱基的插入和缺失。该病毒的H、F和N基因分别与国内强毒株BJ080127株的H基因、GN株的F基因和HL株的N基因亲缘关系最近,氨基酸同源性分别为97.3%、97.7%和99.3%。与国外标准野毒株A75-17在核苷酸水平上同源性依次为94.4%、93.8%和97.2%,与疫苗株CDV3在核苷酸水平上同源性分别为88.5%、88.8%和93.9%。系统进化树表明该病毒与国内强毒株在同一谱系。糖基化分析显示,该病毒在F基因3～5位氨基酸处多出1个糖基化位点。结论本研究从犬病料中成功克隆了犬瘟热病毒血凝素蛋白、融合蛋白和核衣壳蛋白,在F基因中新增了一个糖基化位点,为犬瘟热的遗传变异和流行学研究提供了分子生物学依据。
- 刘巧荣包新奇孙明王芳乔明明李佳陈曦秦亚嫚陈西钊
- 关键词：犬瘟热融合蛋白基因核衣壳蛋白基因
