任琦
- 作品数：11 被引量：16H指数：2
- 供职机构：长春生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金吉林省科技厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 霍乱毒素B亚单位植物细胞表达载体的构建及其在人参细胞中的表达
- 2009年
- 目的构建霍乱毒素B亚单位(CTB)植物细胞表达载体,并在人参细胞中进行表达。方法根据人参偏爱密码子,采用引物延伸PCR法合成CTB基因,连入pBI121质粒,构建植物细胞表达载体,转化人参细胞后,采用PCR、RT-PCR和Western blot进行鉴定。结果测序结果表明,PCR法合成的目的基因序列与设计完全一致,构建的植物细胞表达载体经双酶切鉴定显示,所含基因片段大小与预期相符。提取转基因人参细胞基因组DNA和mRNA,分别进行PCR和RT-PCR鉴定,均可见约400 bp的特异性片段。Western blot分析可见相对分子质量约12 000的特异性条带。结论已成功构建了含霍乱毒素B亚单位的植物细胞表达载体,并在人参细胞中获得表达。
- 任琦宋之明刘丹孙洋于海鹏李娟富锐丽刘英盛军
- 关键词：转基因
- 表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株的建立被引量：1
- 2009年
- 目的建立表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株。方法采用PCR方法分别扩增HBsAg及rhIFNα2b基因,以GS linker连接后,克隆入表达质粒pBI121,构建植物细胞表达质粒pBISI,转化农杆菌LBA4404,感染人参愈伤组织细胞。经G418筛选抗性细胞株,提取细胞基因组DNA,进行PCR检测;应用ELISA法检测HBsAg及rhIFNα2b的表达;通过Western blot分析表达蛋白的反应原性。结果重组表达质粒pBISI经酶切鉴定,表明构建正确。筛选得到3株正常生长的人参细胞株,基因组DNA扩增得到约1200bp的融合基因片段;经ELISA检测,其中1株能够表达HBsAg及rhIFNα2b;表达的蛋白与鼠抗HBsAg血清在相对分子质量35000处出现特异条带。结论已获得了表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株。
- 于海鹏刘丹薛雁任琦李娟富锐丽李铮姚为民盛军
- 关键词：HBSAG重组人干扰素Α2B融合蛋白
- 甲型H1N1流感病毒裂解疫苗在动物体内诱导中和抗体水平及其过敏原性被引量：1
- 2014年
- 目的评价甲型H1N1流感病毒裂解疫苗在动物体内诱导的中和抗体水平及其过敏原性。方法将昆明小鼠随机分为7组,分别经腹腔注射3批甲型H1N1流感病毒裂解疫苗(剂量分别为15、30、45μg/0.5 ml)、3批季节性H1N1流感病毒裂解疫苗(剂量分别为15、30、45μg/0.5 ml)和PBS(阴性对照),每只0.5 ml,间隔21 d加强免疫1次,分别于免疫前、初次免疫后21 d及加强免疫后14 d采血,分离血清,采用固定病毒-稀释血清法检测小鼠血清中和抗体滴度。将豚鼠随机分为4组,分别经腹腔注射上述3批甲型H1N1流感病毒裂解疫苗和PBS(阴性对照)各0.5 ml,隔日注射1次,共3次,第1次注射后第14和21 d,分别经静脉注射同一批号的疫苗1.0 ml攻击,观察豚鼠的过敏反应。结果初次免疫后21 d,甲型H1N1流感病毒裂解疫苗15、30、45μg剂量组免疫小鼠血清中和抗体滴度分别为免疫前和阴性对照组的47.9、113.5和319.9倍,且呈剂量依赖性;加强免疫后14 d,甲型H1N1流感病毒裂解疫苗各剂量组中和抗体滴度比初次免疫后21 d均明显升高,也呈剂量依赖性,且均高于与相应剂量的季节性H1N1流感病毒裂解疫苗。甲型H1N1流感病毒裂解疫苗各剂量组豚鼠均无过敏反应发生。结论甲型H1N1流感病毒裂解疫苗在昆明小鼠体内可诱导产生保护性中和抗体,对豚鼠无过敏反应。
- 赵大鹏李晓波郭雪任琦王亚军支百惠李晓辕吴业红曹宇商凤云张雪梅
- 关键词：甲型H1N1流感病毒裂解疫苗中和抗体
- 人参愈伤组织细胞表达CTB-hIFN-α2b融合蛋白的研究
- 人干扰素α2b(hIFN-α2b)具有多种生物学功能,包括广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞增殖和免疫调节的作用,在临床上主要用于治疗病毒性肝炎及肿瘤性疾病。目前,临床应用的干扰素制剂主要是从大肠杆菌表达系统获得的基因工程重组蛋白...
- 任琦
- 关键词：霍乱毒素B亚单位融合蛋白转基因
- 文献传递
- 组织工程化人工皮肤的研究进程
- 组织工程化人工皮肤是指应用组织工程技术将体外培养的上皮细胞和成纤维细胞扩增后,接种于一种具有良好生物相容性的材料上,经体外培养形成的皮肤。将其移植于皮肤创面处,可以实现创伤的修复和重建。组织工程化人工皮肤的研究是近年来组...
- 任琦
- 文献传递
- 甲型流感病毒DNA疫苗的小鼠免疫效果
- 2009年
- 目的观察甲型流感病毒M2基因与GM-CSF基因DNA疫苗的小鼠免疫效果。方法提取甲型流感病毒DNA疫苗质粒。将BALB/c小鼠随机分成流感裂解疫苗对照组、空载体pVAXI对照组、pVAX/GM-CSF对照组、pVAX/M2实验组、pMIG实验组,按0、2、4程序免疫BALB/c小鼠,第一针免疫后1周,定期对小鼠眼眶采血。用血凝抑制(HI)试验检测特异性抗体,流式细胞术双标法检测脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子数量,ELISA方法检测细胞因子IL-4和IFN-γ的含量,并进行保护性试验。结果流感裂解疫苗对照组HI平均值均>40,产生了特异性血凝素抗体,其余各组均未检测到抗体;流感裂解疫苗组具有较强的刺激淋巴细胞增殖的作用,各组间T淋巴细胞表面CD4+及CD4+/CD8+的水平比较,差异有统计学意义;DNA疫苗组可刺激机体产生较高水平的细胞因子,且保护率较流感裂解疫苗对照组提高了一倍。结论甲型流感病毒DNA疫苗可诱导小鼠的免疫应答,且细胞免疫水平显著高于流感裂解疫苗。
- 孙洋张雪梅赵大鹏汪春义戚凤春赵虹刘岩松任琦辛暨华徐建国
- 关键词：甲型流感病毒DNA疫苗免疫效果
- 大流行流感病毒疫苗(甲型H1N1流感疫苗)的研究
- 郭立君戚凤春张雪梅赵大鹏李晓波张玉辉范宇红惠琦任琦庄茂欣毕业刘岩松张赐强
- 大流行流感病毒疫苗(甲型H1N1流感疫苗简称甲流)研究项目是2009年“甲流”在中国境内大肆流行时吉林省科技厅启动的应急项目。长春所接到任务后，在短短3个月时间内，完成了各项研究工作，改进了流感疫苗的生产工艺，提高了疫苗...
- 关键词：
- 关键词：流感病毒疫苗生产工艺
- 人干扰素基因植物表达载体的构建及其在人参愈伤组织细胞中的表达被引量：9
- 2006年
- 目的:利用组织培养人参愈伤组织细胞表达人干扰素,探讨用植物细胞表达人类基因的可行性。方法:用PCR从pBV889扩增人干扰素α2b(hIFN-α2b)编码基因,将其克隆于pMD18-T载体和pBI121,进而构建植物细胞表达载体pBIFN。用冻融法将pBIFN导入根瘤农杆菌LBA4404,经卡那霉素和利福霉素筛选后利用农杆菌介导的转化法将hIFN-α2基因导入人参愈伤组织细胞。经G418筛选,形成阳性细胞。用PCR、RT-PCR、Western blot和WISH/VSV系统检测转基因组织。结果:经PCR检测表明hIFN-α2b基因已成功整合到人参愈伤组织细胞基因组中。RT-PCR证明存在hIFN-α2b基因的转录产物。Western blot分析表明转基因人参愈伤组织细胞能有效表达hIFN-α2b蛋白。WISH/VSV系统检测分析表明表达的hIFN-α2b具有生物学活性。结论:本研究利用转基因人参愈伤组织细胞成功地表达了人干扰素,为进一步提高口服干扰素的疗效打下基础。
- 任琦盛军任志霞
- 关键词：转基因
- 转基因同种异体组织工程软骨修复兔膝关节全层缺损被引量：2
- 2006年
- 目的:观察转人胰岛素样生长因子I基因同种异体组织工程软骨对兔膝关节软骨全层缺损的修复作用。方法:实验于2004-08/2005-08在军事兽医研究所病毒室及长春生物制品研究所实验室完成。①取出生28d新西兰白兔的关节软骨,采用机械分离及Ⅱ型胶原酶消化法获得分离的兔软骨细胞,用单层培养扩增。②用脂质体法使胰岛素样生长因子I基因转染兔关节软骨细胞。③以经过转染的兔关节软骨细胞作为种子细胞,牛Ⅰ型胶原作为支架,体外构建转基因同种异体组织工程软骨。④5个月龄的新西兰白兔80只制备关节软骨缺损模型,分别移植入不同组别的移植物:空白对照组、单纯支架组、单纯软骨细胞附和支架组、经过转染的软骨细胞附和支架组、自体软骨移植组,分别于术后4,8,16,24周处死各组动物4只取材,观察兔膝关节软骨全层缺损的修复情况。结果:①G418培养液筛选结果:通过G418对于兔关节软骨细胞的最小致死剂量的测定得出,G418对软骨细胞的最小致死剂量为0.4g/L。转染后软骨细胞经0.4g/LG418筛选,2周后得到抗G418的阳性细胞克隆,而未转染细胞在含G418的培养液中逐渐全部死亡,初步证明人胰岛素样生长因子I基因的转染成功。②原位杂交检测结果:转染软骨细胞胞浆中有氯化镍紫蓝色颗粒阳性杂交信号说明有人胰岛素样生长因子ImRNA的表达;未转染细胞则未见阳性信号。③免疫组织化学检测结果:在转染的软骨细胞胞浆中有棕黄色颗粒样阳性信号,说明有Ⅱ型胶原蛋白表达,证明稳定表达人胰岛素样生长因子I的转染软骨细胞保持Ⅱ型胶原的表达。④软骨缺损修复后的组织学评价结果:在试验所观察的24周内,软骨基本稳定,而且转胰岛素样生长因子I基因组织工程软骨显示出强烈的软骨基质分泌能力。转胰岛素样生长因子I基因的同种异体组织工程软骨对软骨缺损�
- 宋之明张绍坤刘一任琦付长峰
- 关键词：软骨细胞软骨
- 逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I在软骨细胞中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的探讨逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I(human insulin-like growth factor-I,hIGF-I)体外转染兔软骨细胞后软骨细胞hIGF-I的表达情况及其生物学行为变化。方法将构建的含有目的基因的逆转录病毒载体pLNC-IGF-GFP体外转染兔关节软骨细胞,经G418筛选阳性克隆,采用RT-PCR及免疫化学染色检测转染软骨细胞中hIGF-I的表达情况,并在荧光显微镜下观察标记基因GFP的表达情况。采用MTT法、流式细胞仪、免疫细胞化学染色、二甲基亚甲蓝法及ELISA法对转染hIGF-I后的软骨细胞的增殖能力及表型进行检测。结果 G418筛选后获得的软骨细胞阳性克隆,经RT-PCR和免疫细胞化学检测表明hIGF-1基因在mRNA和蛋白质水平得到稳定表达,荧光显微镜下观察转染的软骨细胞可激发出绿色荧光,证明转染成功。转染软骨细胞株的增殖能力、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的分泌水平,在转染后6 w内均高于同时间点未转染的软骨细胞,差异具有显著性(P<0.05)。结论逆转录病毒载体能有效地将hIGF-I基因转染至兔软骨细胞并获得稳定表达,同时转染后的软骨细胞增生活跃,能够在较长时间维持软骨细胞表型,为进一步研究软骨缺损的组织工程修复和基因治疗打下基础。
- 宋之明张绍昆孙洋任琦
- 关键词：逆转录病毒载体软骨细胞基因转移
