任继鸿
- 作品数：9 被引量：16H指数：2
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金全军“十五”指令性课题国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 双启动子调控的条件复制腺病毒制备及其体外抑瘤作用被引量：1
- 2010年
- 目的:构建并制备survivin及hTERT双启动子调控的条件复制腺病毒,探讨其特异性溶瘤作用。方法:PCR方法分别扩增肿瘤特异性survivin及hTERT启动子,分别克隆入腺病毒载体pXC1的两个复制必需基因E1A和E1B序列上游启动子区,构建出双肿瘤特异性启动子调控的条件复制腺病毒载体pXC1-SP-TP;脂质体法与pBHGE3骨架质粒共转染293E细胞进行重组腺病毒包装,稀释法测定腺病毒滴度;应用MTT、活细胞计数等方法观察其对肝癌细胞HepG2的特异性溶瘤作用并以正常人的血管内皮细胞ECV304作为对照。结果:测序及双酶切鉴定结果证实,成功构建了双肿瘤特异性启动子调控复制腺病毒载体;在293E细胞中获得了重组腺病毒Ad-SP-TP,滴度测定显示病毒滴度达到3.9×1010TCID50/ml;MTT结果显示,Ad-SP-TP可有效抑制肝癌细胞增殖而对正常细胞无增殖抑制作用;活细胞计数及细胞形态观察结果显示,重组腺病毒在肝癌细胞中选择性复制并发挥溶细胞作用。结论:双启动子调控的腺病毒具有显著的溶瘤作用但对正常人血管内皮细胞不发挥溶细胞作用,实验结果为肝癌靶向治疗提供了更为良好的条件复制型病毒载体及新的治疗策略。
- 任继鸿龙敏温志远刘昕阳陈曦成诗银张惠中
- 关键词：SURVIVIN启动子HTERT启动子肝癌
- miR-140—3p在人肺腺癌A549细胞顺铂化疗敏感性中的作用研究被引量：1
- 2013年
- 目的 探讨miR-140-3p与人肺腺癌A549细胞顺铂药物敏感性的关系.方法 化学合成miR-140-3p mimics及inhibitor,脂质体2000介导其转染入人肺腺癌A549细胞,利用荧光定量PCR方法观察转染细胞中miR-140-3p表达水平的变化;噻唑蓝（MTT）法检测A549细胞对顺铂作用的敏感性.结果 转染miR-140-3p mimics/inhibitor可分别升高（约30%）或降低（约30%）人肺腺癌A549细胞中miR-140-3p表达;同时,与对照组相比,转染miR-140-3p inhibitor的人肺腺癌A549细胞对顺铂药物作用的敏感度显著增加,细胞增殖速率降低33%（P〈0.05）;而转染miR-140-3p mimics的A549细胞对顺铂药物作用的敏感度显著降低,细胞增殖速率升高32%（P〈0.05）.结论 miR-140-3p的表达水平与人肺腺癌A549细胞对顺铂药物的敏感度呈负相关,提示miR-140-3p可能在A549细胞顺铂耐药过程中发挥重要作用.
- 欧阳永日朱保义王希林芳陈曦任继鸿张惠中卫军霞董轲
- 关键词：A549顺铂
- 肿瘤特异复制腺病毒治疗宫颈癌的体外实验研究
- 目的.构建并制备survivin启动子调控的条件复制腺病毒,探讨其特异性溶瘤作用.方法： PCR方法分别扩增肿瘤特异性survivin启动子,代替腺病毒载体pDC315载体的CMV启动子,调控腺病毒复制必需基因E1A的表...
- 任继鸿陈曦张惠中
- 关键词：SURVIVIN启动子宫颈癌
- 大鼠补体调节因子DAF功能区的表达纯化及功能鉴定
- 2006年
- 目的:重组表达促衰变因子(DAF)功能区的4个短的保守重复序列(SCR1-4)。方法:通过克隆大鼠DAF的SCR1-4并插入到原核表达载体pET32a(+),IPTG诱导共表达,根据表达结果选择纯化方式。结果:诱导后表达产物为不溶蛋白,通过纯化包涵体并复性,得到了具有抑制致敏绵羊红细胞发生溶血的可溶性蛋白成分。结论:原核表达SCR1-4易于形成包涵体,稀释复性法适用于DAFSCR1-4包涵体的复性。
- 徐江张惠中林芳刘丽王燕任继鸿李柱一
- 关键词：DAF包涵体蛋白复性
- hTERT基因启动子调控HSV-tk/GCV系统对HeLa细胞杀伤作用被引量：4
- 2006年
- 目的:研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的人单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦(HSV-tk/GCV)系统对宫颈癌细胞的体外杀伤作用.方法:构建hTERT基因启动子调控的tk基因真核表达载体pCI-neo/hTERT-tk,分别用脂质体法转染宫颈癌细胞(HeLa)和正常血管内皮细胞(ECV304),新霉素(G418)筛选阳性克隆扩增.用RT-PCR法比较两种细胞tk基因的表达情况;给予前药更昔洛韦(GCV),用流式细胞术检测hTERT调控的HSV-tk/GCV系统对两种细胞的杀伤作用.结果:hTERT启动子调控下的HSV-tk/GCV系统对宫颈癌HeLa细胞有明显的杀伤作用,使36.7%的细胞凋亡;而对正常细胞ECV304作用则不明显.结论:hTERT启动子调控的tk基因治疗是一种具有肿瘤特异性的治疗方法,有望解决肿瘤基因治疗中的特异性杀伤及降低毒副作用等问题.
- 卞卡张惠中任继鸿赵辉成诗银
- 关键词：末端转移酶TK基因
- Notch 3沉默对人急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨Notch 3受体特异性沉默对急性T淋巴细胞白血病的影响。方法:运用survivin启动子介导的RNA干涉方法特异性地封闭急性T淋巴细胞白血病细胞SupT1中Notch 3基因的表达。结果:survivin启动子介导的RNA干涉系统能特异而高效封闭肿瘤细胞内源Notch 3基因的表达,Notch 3基因表达的下调能够使肿瘤细胞的增殖活性降低,凋亡明显增加。结论:Notch 3基因沉默可有效抑制白血病细胞的增殖,并促进其凋亡,为急性T淋巴细胞白血病相关基因功能研究及靶向性治疗探索了一种新策略。
- 项捷欧阳永日崔颖林芳任继鸿龙敏陈曦卫军霞张惠中
- 关键词：NOTCH3SURVIVIN启动子急性T淋巴细胞白血病
- survivin启动子的克隆及在HeLa细胞中的特异生物活性被引量：7
- 2005年
- 目的:构建带有survivin启动子的pGL3Basic真核表达载体,探讨survivin启动子在HeLa细胞中的特异表达活性。方法:采用PCR技术扩增survivin启动子,插入pGL3Basic载体,构建携带survivin启动子的pGL3Basic真核表达载体(pGL3Basic/Surp)。纯化pGL3Basic/Surp质粒,用脂质体法转染HeLa细胞和正常血管内皮细胞ECV304,48h后收集转染细胞与荧光素酶底物反应,检测荧光素酶活性。结果:成功克隆1kbsurvivin基因启动子,并构建了携带有survivin基因启动子的pGL3Basic真核表达载体,转染后的Hela细胞荧光素酶活性为2074.2±78.5,而ECV304荧光素酶活性为9.7±1.1。结论:成功克隆的survivin启动子在HeLa细胞中表现出较高的肿瘤特异性活性,为进一步开发肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础。
- 吴冰王燕任继鸿赵辉张利潮张惠中
- 关键词：SURVIVIN基因启动子基因治疗HELA细胞
- 丙型肝炎病毒HLA-A2限制性复合多表位基因重组腺病毒的包装、筛选及鉴定
- 2011年
- 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)HLA-A2限制性复合多表位基因的重组转移质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,转染HEK293细胞,包装重组腺病毒rAd-Ub-Mep。方法复合表位Ub-Mep基因克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒,得到重组的穿梭质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,将穿梭质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep和腺病毒骨架质粒pAdEasy1共转染HEK293细胞,产生重组腺病毒rAd-Ub-Mep,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达和PCR扩增目的基因的方法鉴定重组腺病毒,并测定重组腺病毒滴度。结果经酶切鉴定、PCR鉴定和荧光分析,均证实得到重组的腺病毒。测定病毒滴度为1.2×1011cfu/L。结论成功包装出重组腺病毒rAd-Ub-Mep,构建了HCV HLA-A2限制性多表位基因的重组腺病毒疫苗,为进一步研究HLA-A2限制性复合多表位基因诱导的细胞免疫应答奠定了基础。
- 韦三华任继鸿刘丽贾战生董轲林芳王希张利军刘昕阳张惠中
- 关键词：肝炎病毒属表位腺病毒
- survivin启动子调控siRNA真核表达载体的构建及对HeLa细胞中stathmin基因的干涉作用被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体对HeLa细胞中stathmin基因表达的肿瘤特异性封闭作用。方法:合成针对人stathmin基因的siRNA cDNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHI和HindIII双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体。PCR扩增suvivin基因启动子并测序,用EcoRI和BamHI分别双酶切,连接至经相同内切酶消化的载体,获得survivin启动子调控的siRNA真核表达载体,酶切及测序鉴定。脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,G418筛选。RT-PCR扩增stathmin基因,检测其对stathmin基因表达的干涉效果;流式细胞仪分析转染后HeLa细胞增殖周期的改变。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建重组质粒;RT-PCR结果显示所构建的干涉载体可有效封闭stathmin基因表达;流式细胞仪分析结果显示,Hale细胞在stathmin siRNA作用下G2/M期细胞的比例明显增加。结论:survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体可有效地封闭HeLa细胞中stathmin基因表达并使HeLa细胞阻断于G2/M期,为以stathmin基因为靶点的恶性肿瘤生物治疗奠定了理论基础。
- 王燕吴冰苏海川高萍林芳刘丽任继鸿赵辉张惠中
- 关键词：SURVIVIN启动子STATHMINHELA细胞
