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HIV-1B`/C、A／E重组亚型pol基因DNA疫苗的构建及其免疫原性研究被引量：1: 2012年; 目的构建表达中国BYC和A／E重组亚型HIV-1pol基因的DNA疫苗，并比较其免疫原性。方法按哺乳动物密码子使用频率对HIV-1CN54（BYC重组亚型）与AE2f（A／E重组亚型）的pol基因进行序列优化，构建DNA疫苗，通过Westernblotting验证其体外表达效率。通过肌肉注射途径免疫小鼠，然后无菌分离小鼠脾淋巴细胞并分别在ConsensusBPol和HIV-1AE2f Pol肽库刺激下，采用酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测抗原特异性IFN-γ的分泌情况，观察比较两个DNA疫苗免疫原性特征。结果DNA测序结果表明两个pol基因重组质粒构建正确，且两个DNA疫苗均能在体外有效表达。ConsensusBPol肽库刺激后，pSVAE—Pol活化的总T细胞免疫反应为（636±178）个斑点形成细胞数／10。个脾淋巴细胞，pSVCN—Pol活化的总T细胞免疫反应为（468±265）个斑点形成细胞数／10^6个脾淋巴细胞（P=0．412）；HIV-1 AE2fPol肽库刺激后，pSVAE—Pol活化的总T细胞免疫反应为（1378±611）个斑点形成细胞数／10^6个脾淋巴细胞，pSVCN—Pol活化的总T细胞免疫反应为（713±61）个斑点形成细胞数／10^6个脾淋巴细胞（P=0．134）。将总T细胞反应按肽池分解后发现，pSVAE—Pol活化的特异性T细胞反应主要集中于Pol 1肽池；而pSVCN—Pol除了能够活化针对Pol1的T细胞反应之外，也可以较好地活化针对ConsensusBPol2肽池的T细胞反应。结论两个亚型PolDNA疫苗中以AE-Pol的免疫原性更强，但其所活化的T细胞表位识别谱不及CN—Pol广泛。HIV-1疫苗可能需将两者结合在一起。; 万延民任艳琴王婧任晓楠胡志东仇超徐建青; 关键词：HIV T淋巴细胞

融合表达小鼠IgG2b-Fc可增强人类免疫缺陷病毒1型Gag DNA疫苗的免疫原性: 2016年; 为阐明小鼠IgG2b-Fc对DNA疫苗免疫原性的增强作用,首先构建表达人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)CN54Gag基因的DNA疫苗及表达Gag与小鼠IgG2b-Fc融合基因的DNA疫苗,限制性酶切和DNA测序结果表明这两个疫苗均构建成功,蛋白免疫印迹结果也显示其正确表达。然后,利用上述DNA疫苗接种C57BL/6小鼠,比较两个DNA疫苗所诱导的特异性体液免疫反应和特异性细胞免疫反应。结果显示,融合表达小鼠IgG2b-Fc对特异性细胞免疫和体液免疫反应均有增强作用,但只有对特异性体液免疫反应的增强作用有统计学意义。; 陈沁韵万延民丁相卿任艳琴肖健徐建青; 关键词：人类免疫缺陷病毒1型 GAG

表位竞争可削弱针对非优势表位的T细胞应答: 2013年; 目的阐明表位竞争对特异性T细胞应答强度和功能特征的影响。方法利用pSV—gag92和pSV-env203两个单表位DNA疫苗和pSV-gag／env融合基因疫苗免疫C57BL／6小鼠。免疫结束后，通过细胞内细胞因子染色的方法检测Gag92和Env203特异性T细胞反应，并比较其差异。结果pSV—gag92所活化的Gag92特异性IFN—γ＋CD8T细胞占总CD8T细胞比例[（0．41500±0．04588）％]显著高于pSV—gag／env[（0．05867±0．01964）％]。同时，我们发现pSV—gag／onv所活化的Gag92特异性TNF-α-—IFN-^γ’CD8T细胞平均荧光强度（296．70±14．08）显著低于Env203特异性TNF-（It—IFN-^γ＋CD8T细胞的平均荧光强度（818．00±49．34）。结论表位竞争能够显著降低针对非优势表位的T细胞反应频率和平均强度。; 任晓楠任艳琴王婧胡志东万延民徐建青; 关键词：T细胞反应

急性感染期内恒河猴外周血中人/猴嵌合免疫缺陷病毒包膜蛋白的N糖基化位点分析: 2016年; 目的：分析人/猴嵌合免疫缺陷病毒（SHIVSF162P3）包膜蛋白N糖基化位点的数量和分布及病毒传播能力。方法两只雌性成年（4周岁）中国恒河猴，编号Rh1和Rh2，体重分别为4和5 kg。通过静脉攻毒的方式向Rh1和Rh2接种SHIVSF162P3，每只剂量为300半数组织培养感染剂量，在攻毒后第3、7、10、14、17、21、24、28、35、42、49、56、63、70和77天采集血液样本。对样本进行病毒RNA抽提和cDNA合成，采用实时荧光定量PCR测定病毒RNA水平。对攻毒后第7、14、28和77天的血浆样本进行单基因组扩增，使用Bio-edit中的Clustal W软件进行包膜蛋白全长多序列比对，用MEGA6.06软件计算配对差异距离，采用HIV Databases中的软件计算包膜蛋白N糖基化位点和可变区氨基酸数目，比较序列多样性、N糖基化位点数量的差异。结果从接种的病毒中共扩增得到55条包膜蛋白全长序列，其核苷酸序列平均配对差异距离为（0.1666±0.0963）%。病毒载量在攻毒后第10天达到峰值，lg转换值分别为7.68和7.49拷贝/ml；在攻毒后第42天，病毒载量达到调定点，lg转换值分别为4.27和4.81拷贝/ml。攻毒后第7天，Rh1和Rh2血样中包含25个N糖基化位点的病毒包膜蛋白序列的比例分别达到83%（20/24）和94%（29/31），高于接种病毒中的比例[49%（27/55）]。随着感染时间的延长，Rh1和Rh2血浆中SHIVSF162P3病毒包膜序列的多样性逐渐增大，包含25个N糖基化位点的包膜蛋白序列比例逐渐降低，包含27个N糖基化位点病毒所占比例逐渐升高；在第28天Rh1体内包含27个N糖基化位点的序列比例达到29%（6/21），Rh2在第77天达到35%（13/37）。V1~V5区糖基化位点分析发现，N糖基化位点数目的变化主要来自于V4区。与包含27个糖基化位点的包膜蛋白序列相比，包含25个糖基化位点的病毒包膜蛋白序列在V4区缺失7个氨基酸（TWNNTIG），导致V4区在392位和39; 石银万延民陈健王婧任艳琴魏强从喆徐建青; 关键词：猴免疫缺陷病毒病毒包膜蛋白质类糖基化

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任艳琴

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