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人源化Fab段噬菌体抗体库的构建及初步鉴定被引量：2: 2010年; 目的:构建人天然Fab段噬菌体抗体库,为人源抗体的制备建立技术平台。方法:从正常健康人的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人抗体轻链和重链Fd段基因,构建噬菌体抗体库,酶切鉴定有无插入片段并测序分析,用IL-2和地高辛进行富集筛选。结果:最终构建的抗体库库容约为8.4×107,酶切鉴定显示有插入片段,抗体库重组率是70%,DNA测序分析证实抗体重链属IgG亚类,轻链为λ链。用IL-2和地高辛进行三轮筛选,抗体库均得到了不同程度的富集。结论:成功构建了一个天然的人源化噬菌体抗体库,可用于下一步胰淀素人源化抗体的筛选、纯化和表达。; 公倩李常颖畅继武朱铁虹; 关键词：噬菌体抗体库抗体FAB段人源化抗体

人源Fab段噬菌体抗体库的构建及抗IL-4抗体的初步筛选被引量：1: 2011年; 目的:构建大容量人源Fab段噬菌体抗体库,从中筛选抗白细胞介素(IL)-4的抗体元件,为人源抗体的制备建立平台。方法:采集18例健康成人外周血,分离淋巴细胞,从中提取总RNA,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增Fab段抗体基因,插入噬菌粒pComb3XSS载体内,构建噬菌体抗体元件库,用内切酶鉴定基因片段的插入。以抗原IL-4对抗体库进行富集筛选。筛选后,随机抽取菌株通过噬菌体-酶联免疫吸附法(Phage-ELISA)进行检测,并且对阳性克隆DNA的序列进行测定。结果:构建的人源Fab段噬菌体抗体库库容为2.4×108,酶切鉴定插入基因片段大小正确,从中筛选到与IL-4有结合活性的克隆。ELISA特异鉴定阳性,测序结果证实为人免疫球蛋白可变区基因片段。结论:成功构建了大容量人源化噬菌体抗体元件库,并初步获得人源性抗IL-4-Fab抗体。; 胡占东公倩朱铁虹畅继武; 关键词：细菌噬菌体白细胞介素4 逆转录聚合酶链反应

人源Fab噬菌体抗体库的构建及Amylin抗体的筛选与鉴定: 背景和目的:胰淀素是胰岛β细胞分泌的一种激素，与胰岛素共同贮存于胰岛β细胞的分泌囊泡中，二者在葡萄糖及非糖激素刺激下以一定比例相伴释放到胰岛β细胞外。现已发现它是一个多效激素，以多重角色参与了机体的物质及能量代谢过程。目...; 公倩; 关键词：胰淀素 FAB噬菌体抗体库人源抗体

人源性噬菌体抗体库的构建及抗amylin抗体的初步筛选被引量：1: 2012年; 目的:构建人源性噬菌体抗体库,从中筛选胰淀素(amylin)单克隆抗体(mAb),测定其特异性及抗原结合活性。方法:从正常健康人的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人免疫球蛋白Fd段和轻链基因,构建噬菌体抗体库。酶切和PCR鉴定后,阳性克隆进行DNA测序分析。用人amylin抗原对抗体库进行筛选富集,将得到的阳性克隆进行Phage-ELISA鉴定,结果进行统计学分析。结果:最终构建的抗体库库容约为0.8×108,酶切鉴定显示有插入片段,抗体库重组率为70%。阳性克隆进行DNA测序证实所获基因为人免疫球蛋白可变区基因。以amylin抗原进行3轮筛选,抗体库得到特异性富集。阳性克隆进行Phage-ELISA检测证实有良好的抗胰淀素抗原的特异性。结论:成功构建了一个人源性噬菌体抗体库,为从中获得人源抗amylin的mAb奠定了实验基础。; 公倩李常颖畅继武朱铁虹; 关键词：噬菌体抗体库胰淀素人源性单克隆抗体

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公倩