刘宝全
- 作品数：61 被引量：325H指数：11
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 猪传染性胃肠炎病毒国内分离株S基因克隆及与国外分离株的同源性比较被引量：5
- 2002年
- 用猪睾丸细胞增殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)国内分离株TH 98,根据基因库中已发表的TGEVS基因cDNA序列 ,利用Oligo软件设计并合成 2对引物 ,进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,扩增出 2 .3kb和 2 .1kb2个片段 ,即Sa与Sb。将Sa与Sb先后插入到pUC18质粒载体上的EcoRⅠ和PstⅠ多克隆位点上 ,构建了重组质粒pUC S。根据TGEVS基因位点和 pUC18的物理图谱 ,用相应的限制性内切酶进行酶切及套式PCR方法鉴定、分析 ,证明克隆的pUC S为TGEVS基因。同时对pUC S进行序列测定分析 ,并与来自美国、英国和日本的 5个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较 。
- 任晓峰李一经贾永清王君伟刘宝全
- 关键词：分离株传染性胃肠炎病毒S基因同源性
- 猪轮状病毒国内分离株JL94 VP7基因克隆与真核表达质粒的构建被引量：3
- 2002年
- 用MA10 4细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株JL94。利用一对根据Genebank中已发表的轮状病毒VP7基因cDNA序列而设计并合成的引物 ,通过逆转录—聚合酶链反应 (RT_PCR)从JL94毒株扩增出VP7基因全长cDNA。将其插入pMD18_T载体中 ,构建了重组质粒pMD18_T_JL94 /VP7,并对其进行了HindⅢ ,HindⅢ和BamHⅠ的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定 ,证明pMD18_T_JL94 /VP7中的插入基因为轮状病毒的VP7基因。重新设计一个带有Kozak序列的上游引物 ,通过PCR扩增出带有Kozak序列的vp7基因并将其插入pMD18_T载体中构建了重组质粒pMD18_T_VP7,酶切鉴定其大小和方向后 ,与真核表达载体pcDNA 3.1(+)分别用HindⅢ和BamHⅠ双酶切 ,胶回收纯化后连接。经酶切和核苷酸序列检测鉴定 。
- 师东方李一经范锡龙贾永清王君伟刘宝全陈淑红
- 关键词：猪轮状病毒国内分离株基因克隆真核表达质粒VP7基因RT-PCR
- 临床健康牛外周血淋巴细胞亚类分布的研究被引量：2
- 2001年
- 以流式细胞术研究了临床健康牛外周血中CD3、CD4、CD8和γδT淋巴细胞的分布情况。结果表明 ,牛外周血淋巴细胞中各T淋巴细胞亚类分布差异较大。其中CD3平均值为 5 3.88± 8.71% ,CD4为 17.13± 3.2 2 % ,CD8为 15 .10± 5 .81% ,γδT为 18.77± 8.0 7%。同时检测了广泛存在于各种淋巴细胞表面的白细胞介素_2α受体 (IL_2Rα) ,发现IL_2Rα百分率与γδT细胞百分率具有正相关关系 ,即γδT细胞百分率高时 ,IL_2Rα也高 ,反之亦然。跟踪 3头牛外周血各淋巴细胞亚类分布百分率的实验结果 ,证明牛外周血中各淋巴细胞亚类分布的差异 ,与牛的生物节律有着密切关系。
- 金红宋晓华李媛孟庆文吴东来王幼明崔尚金马文军于康震刘宝全井田幸助
- 关键词：健康牛外周血
- 鸡传染性支气管炎病毒国内分离株D971 mRNA_3和mRNA_4 cDNA的分子特征被引量：6
- 2004年
- 参照已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (infectious bronchitis virus,IBV)基因序列 ,设计合成了 1对引物 ,经 RT-PCR扩增得到了 IBV国内分离株 D971约 1.3kb的片段 ,其中包含 3a、3b、E及 M蛋白基因的完整 ORF,并将该片段进行了克隆和序列测定。与国内外部分 IBV毒株序列比较表明 :D9713a基因与 CU- T2、D14 6 6、DE0 72、M4 1、GA/99和 UK/6 6的 3a基因核苷酸序列同源性在 83%～ 89%之间 ,氨基酸序列同源性为 77%～ 91% ,其中与 CU- T2毒株的同源性最低 (分别为 83%和 77% ) ;3b基因与上述毒株的对应核苷酸序列同源性在 85 %～ 95 %之间 ,氨基酸序列同源性为 72 %～ 96 % ,与 CU- T2的同源性最高 (分别为 95 %和 96 % ) ;E蛋白基因与 CU- T2、D14 6 6、DE0 72、M4 1、Ark99、H5 2、Gray、GA/99和 UK/6 6的核苷酸序列同源性在 81%～ 86 %之间 ,氨基酸序列同源性为 74 %～ 80 %。不同毒株推导的 E蛋白 C末端表现不同特征 ,其中 D971E蛋白 C末端比 CU- T2的对应区多 9个氨基酸残基 ,而比本试验选用的其他参考毒株的相应区域短 5～ 7个氨基酸残基。M基因与 CU - T2、DE0 72、Gray、M4 1、H12 0、H5 2、SD/97/0 2、L X4及D4 1的 M基因核苷酸序列同源性在 86 %～ 91%之间 ,氨基酸序列同源性为 85 %～ 95 % ,其?
- 刘玉芬刘胜旺荣骏弓孔宪刚刘宝全
- 关键词：传染性支气管炎病毒国内分离株MRNACDNA分子特征
- 聚乙二醇硫酸铵沉淀法对不同亚类单克隆抗体活性的影响被引量：8
- 1998年
- 比较了以聚乙二醇和硫酸铵两种沉淀方法分离纯化腹水中单克隆抗体后，对不同亚类单克隆抗体活性的影响。结果表明，经３３％的硫酸铵沉淀腹水ＩｇＧ时，对其活性没有明显影响；沉淀ＩｇＭ时其活性明显降低。以聚乙二醇进行沉淀，对腹水单克隆抗体ＩｇＧ和ＩｇＭ活性均无明显影响，但依不同亚类的单克隆抗体，所选用的聚乙二醇浓度不同，对于ＩｇＧ，以１５％聚乙二醇沉淀较为合适，而沉淀ＩｇＭ时，则以６％聚乙二醇较为合适。
- 李一经李海滨贾永清杨庆霞刘宝全
- 关键词：聚乙二醇硫酸铵腹水
- 昆明鼠对猪轮状病毒核酸免疫的抗体应答被引量：2
- 2004年
- 将昆明鼠随机分为A、B两组,分别肌肉注射含有猪轮状病毒(RV)JL94株VP7基因的重组真核表达质粒pcDNA-VP7和真核表达载体pcDNA3.1(+),每只鼠100μg·(100μL)-1,共免疫3次,每次间隔2周。首次免疫第0,14,21,28,35,39,47,54天采血分离血清用ELISA法检测抗体动态变化。A组小鼠血清在首免后第14天即可检出阳性抗体(P/N≥2.0)。
- 师东方贾永清李一经王君伟马波刘宝全
- 关键词：轮状病毒VP7基因核酸免疫抗体
- 新城疫La Sota与V4疫苗株免疫鸡特异性抗体动态变化规律比较
- 2000年
- 鸡新城疫自１９３６年暴发以来，一直是禽病预防的第一类传染病。虽然我国每年在新城疫疫苗方面的投入远远超过其它疫苗，但仍不能有效的预防鸡新城疫的发生，严重制约着养禽业的发展，归根结缔是对新城疫免疫机理研究的不够透彻。新城疫 Ｌａ Ｓｏｔａ和 Ｖ４疫苗是目前世界范围内应用最广泛的疫苗。现在应用中出现了两种现象，一是在高抗体水平（ＨＩ）鸡中仍有ＮＤ发生，一是Ｖ４免疫鸡群的抗体水平（ＨＩ）不是很高却仍能有效的保护鸡体抵抗ＮＤＶ感染。以我们目前对ＮＤ免疫的认识尚无法解释该现象，说明抗ＮＤＶ免疫的机理是系统的、复杂的、多方面的，仍有许多问题有待我们去探索。为了全面系统阐明ＮＤ免疫机理，我们首先对两种疫苗鸡体液免疫、粘膜免疫激活规律的异同进行比较，以期能较全面地揭示两种疫苗的抗体变化规律及异同，为从根本上控制ＮＤ提供试验和理论依据。 本试验应用ＨＩ试验和所建立的检测ＮＤＶ特异性的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ间接ＥＬＩＳＡ方法分别对ＮＤＶ Ｌａ Ｓｏｔａ、Ｖ４免疫雏鸡（滴鼻、点眼）和免疫攻毒鸡（接种新城疫Ｆ４８Ｅ９）血清中的ＨＩ抗体价、ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体及泪液、哈德氏腺（ＨＧ）中ｓＩｇＡ的动态变化进行了监测和比较，首次全面系统的研究了新?
- 孙建宏曹殿军刘培欣闫丽辉陈杰刘宝全
- 关键词：SOTAV4IGMIGA
- 1日龄雏鸡接种超抗原SEB和MDV后脾与胸腺淋巴细胞IFN-γ的体外诱生
- 2001年
- 为研究超抗原 (SAg)在禽类诱导的免疫机理和进一步揭示MDV(马立克氏病病毒 )感染的免疫学规律 ,采用NO-释放法 ,设计用雏鸡骨髓巨噬细胞为靶细胞检测 1日龄雏鸡接种超抗原SEB和MDV后脾与胸腺淋巴细胞IFN -γ体外诱生的动态变化。结果发现 ,超抗原SEB(SAG -SEB)可提高脾与胸腺淋巴细胞IFN -γ体外诱生水平 ,其中 ,高剂量(1ng/只 )引起短时加强后下降 ,而低剂量 (0 .0 1ng)则出现缓升缓降现象 ;而MDV接种则抑制脾与胸腺淋巴细胞IFN-γ体外诱生 ;SAg -SEB能增强雏鸡细胞免疫 ,主要表现于接种初期 (1- 10dPI) ,而MDV却在接种后 1- 2 5d间降低细胞免疫 ;说明超抗原SEB和MDV虽然均可引起鸡T细胞增殖 ,但对鸡免疫细胞IFN -γ的体外诱生作用不同。
- 魏萍刘宝全
- 关键词：超抗原SEBMDV胸腺淋巴细胞体外诱生1日龄雏鸡
- Ge-132诱导鸡体产生外源性IFN的研究被引量：3
- 2000年
- 以Ge - 1 32为诱生剂诱生鸡体产生外源性干扰素。将鸡胚成纤维细胞 -水泡性口炎病毒作为鸡干扰素 (IFN)的检测系统 ,对不同种细胞、不同的细胞浓度、不同的IFN诱生剂等诸因素对IFN产生的影响进行了比较。试验结果表明 :(1 )在Ge- 1 32、鸡新城疫病毒 (NDV -F)、植物血凝素 (PHA)、聚肌胞 (polyI:C)四种诱生剂中 ,诱生能力差异极显著(P <0 .0 1 ) ,且以Ge- 1 32诱生IFN的能力为最强 ,其他依次为NDV -F、PolyI :C、PHA ;(2 )鸡脾细胞和鸡白细胞产生的IFN效价高于鸡胚成纤维细胞 ;(3)IFN诱生剂最佳诱生剂量 :鸡NDV -F为 1 2 8HAU/mL ;Ge - 1 32为 70 μg/mL ;PolyI:C为 5 0 μg/mL ;PHA为 40
- 张桂红李文赫杨庆霞李昌仁刘宝全
- 关键词：GE-132外源性干扰素
- 鸡传染性支气管炎病毒国内分离D971株5a、5b及核蛋白基因的分子特征被引量：16
- 2003年
- 本研究参照已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (Infectiousbronchitisvirus ,IBV)基因序列 ,设计合成了一对引物 ,经反转录_聚合酶链式反应 (ReverseTranscription_PolymeraseChainReaction ,RT_PCR)技术扩增得到了IBV国内分离株D971的 5a、5b与核蛋白 (Nucleocapsid ,N)基因 ,片段长约 1.7kb ,并将该基因进行了克隆和序列测定。与国内外部分已发表毒株比较表明 :D9715a基因与Beau、CU_T2、D14 6 6、DE0 72及SD/97/0 2毒株的 5a基因核苷酸序列同源性在 85 .9%～ 93.9%之间 ,氨基酸序列同源性为 78.5 %～ 93.8% ;D9715b基因与上述毒株的 5b基因核苷酸序列同源性在 91.6 %～ 96 .8%之间 ,氨基酸序列同源性为 87.8%～ 93.9% ,比 5a基因保守 ;N基因与Beau、CU_T2、Ark99、M4 1、H5 2、VicS、SD/97/0 2、X、HB、DB及ZJ971毒株的核苷酸序列同源性为 87.0 %～ 91.5 % ,氨基酸序列同源性为 89.7%～ 93.6 %。对文献报道的N基因三个保守位置同源性比较发现 ,D971N基因第 198～ 2 6 4位核苷酸及其推导的氨基酸与上述 11株毒株的相应区域同源性分别为 86 .6 %～ 92 .5 %和 90 .5 %～ 10 0 % ;第 5 4 3～ 70 2位核苷酸及其对应的氨基酸序列同源性分别为 79.4 %～ 90 .6 %和 83.3%～ 96 .3% ;第 993～ 112
- 刘玉芬荣骏弓刘胜旺孔宪刚刘丽玲刘宝全
- 关键词：传染性支气管炎病毒分子特征
