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刘春菊: 作品数：66 被引量：571H指数：12; 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>; 发文基金：公益性行业(农业)科研专项引进国际先进农业科技计划国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>

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鉴别小反刍兽疫病毒野生毒株与疫苗株的引物组及其应用: 本发明公开了一种小反刍兽疫病毒野毒株与疫苗株鉴别诊断试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒，包括两对引物，即与小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1疫苗株基因组（GenBank Accession Number X74443...; 包静月王志亮刘春菊王清华; 文献传递

免疫层析试纸条(ICS)检测口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的研究: 以纯化的口蹄疫(FMD)非结构蛋白3ABC作为捕捉抗原,金标口蹄疫抗原作为金标试剂,建立检测口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的胶体金免疫层析试纸条(ICS)。同时,应用FMD ICS试验和UBI FMD非结构蛋白酶联免疫吸附...; 张喜悦徐天刚刘春菊赵永刚赵云玲王志亮; 关键词：非结构蛋白抗体; 文献传递

小反刍兽疫病毒Tibet 07株F蛋白在昆虫细胞中的表达及其抗原性鉴定: 2014年; 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)西藏分离株Tibet07的融合蛋白,并对其抗原性进行鉴定。扩增PPRV Tibet 07株融合蛋白基因,克隆至pFastBac/CT-TOPO载体中,构建重组穿梭质粒pFastBacCT-PPRV-F,构建重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F,转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。通过SDS-PAGE鉴定F蛋白的表达,利用Western blotting和间接免疫荧光鉴定F蛋白的抗原性。表达的F蛋白在分子质量约59ku处可见特异蛋白条带。重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F感染的sf9细胞可与抗PPRV阳性血清发生特异性反应。使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了PPRV西藏分离株Tibet 07的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能及研制小反刍兽疫的亚单位疫苗奠定了基础。; 赵文年王清华刘春菊王淑娟雷程红包静月王志亮; 关键词：小反刍兽疫 F蛋白杆状病毒表达系统

免疫层析试纸条(ICS)检测禽流感抗体: 2006年; 以纯化的禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)核蛋白作为捕捉抗原,金标兔抗鸡抗体作为金标二抗,建立检测禽流感血清抗体的胶体金免疫层析试纸条(immunochromatographic strip,ICS)。对标准阳性血清不同滴度进行检测,ICS试验的敏感性高于琼脂扩散试验(AGP)。特异性试验证实,禽流感的ICS试验与新城疫(ND)、传染性支气管炎(IBV)、鸡传染性法氏囊病(IBD)及减蛋综合症(EDS-76)均无交叉反应。同时,用ICS试验和HI试验检测105份鸡血清,两者具有较好的符合性。结果认为:禽流感ICS具有快速简便、特异、灵敏等优点。; 张喜悦陈义平冯娟刘春菊吴晓东王志亮; 关键词：禽流感抗体

一种检测裂谷热病毒的引物和探针: 本发明的目的是提供一种应用RPA技术检测裂谷热病毒的引物及探针，其正向引物的序列为SEQ？ID？NO：1，反向引物序列为SEQ？ID？NO：2所示，探针序列为SEQ？ID？NO：3所示。本发明根据裂谷热病毒基因组序列设计...; 李林吴晓东刘春菊邹艳丽王华王清华王志亮; 文献传递

2013-2017年中国小反刍兽疫病毒P基因遗传演化特征被引量：4: 2020年; 【目的】探究中国小反刍兽疫病毒(PPRV)田间流行毒株P基因的分子进化特征。【方法】对2013-2017年中国21省份37个疫点的小反刍兽疫病毒流行毒株进行磷蛋白基因(P基因)序列比较和分子进化分析。【结果】37个毒株P基因核苷酸序列间的遗传距离为0~0.009 2,变异分布在47个位点;P蛋白氨基酸序列间的遗传距离为0~0.007 9,变异分布在26个位点。与15株代表毒株的序列比对发现:2013-2017年中国37株PPRV流行毒株P基因的10个位点发生了核苷酸序列突变,其中3个导致了氨基酸序列的改变。以最大似然法构建分子进化树,发现2013-2017年中国流行的37个毒株构成基因Ⅳ系中1个独立的进化分支,与2007年传入西藏的毒株处于不同的进化分支。【结论】2013-2017年中国小反刍兽疫病毒P基因变异较大;随毒株流行时间增长,P基因的突变位点增多,但不同毒株突变位点不同,表现为相对随机的突变。; 盛琰翔刘春菊王清华迟田英马洪超王志亮吴晓东包静月; 关键词：小反刍兽疫病毒 P基因

非洲猪瘟病毒p54蛋白的高效表达及在ELISA中的应用被引量：11: 2013年; 本研究旨在高效原核表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白,并进一步将其用于ELISA试验研究。参考非洲猪瘟病毒Con09/Bzz020株P54基因(E183L)的核苷酸序列,通过序列优化后合成P54基因,克隆至表达载体pET-30c(+),构建重组质粒pET-30c(+)-p54。结果显示,pET-30c(+)-p54有完整的阅读框架,可高效表达分子量约20.7ku的p54蛋白,该蛋白表达稳定,具有可溶性,易于纯化,纯度高达900μg·mL-1,所表达的p54蛋白的氨基酸序列与Con09/Bzz020株p54蛋白氨基酸序列相同;Western blot试验显示,表达的p54蛋白能与ASFV阳性血清发生特异性反应;ELISA试验显示,p54蛋白针对ASFV阳性血清和阴性血清的P/N值为4.67。研究结果证实p54蛋白表达产量高,易于纯化,具有较好的抗原性,可用于非洲猪瘟ELISA诊断。; 龚振华王丽萍臧京帅张康刘春菊吴晓东张启迪秦晓冰陈琳琳单虎王树双王志亮; 关键词：非洲猪瘟病毒 ELISA

内蒙古和西藏自治区野生反刍动物小反刍兽疫监测被引量：3: 2016年; 为了解小反刍兽疫疫情在野生反刍动物中的流行情况,在风险较高且野生动物集中分布的内蒙古自治区赤峰市、呼伦贝尔市和兴安盟以及西藏自治区日喀则地区、山南地区、阿里地区和那曲地区,平行采集棉拭子样品和血清样品各78份。通过RT-PCR检测小反刍兽疫病毒核酸,同时用竞争ELISA检测反刍野生动物血清中的小反刍兽疫病毒特异性抗体。结果检测样品中未发现阳性样品。说明该批次样品中没有发现野生动物感染小反刍兽疫病毒。研究结果可为小反刍兽疫防控工作提供依据。; 王华包静月吴晓东刘春菊王淑娟王志亮; 关键词：小反刍兽疫酶联免疫吸附试验反转录-聚合酶链反应

中国西藏小反刍兽疫病毒野生株China/Tib/Gej/07-30基质蛋白基因和融合蛋白基因的分子特征分析被引量：5: 2010年; 对我国西藏小反刍兽疫病毒野生株China/Tib/Gej/07-30进行基质蛋白(M)和融合蛋白(F)基因序列测定,并进行分子生物学特征分析。首先应用逆转录聚合酶链式反应扩增出M和F基因片段,对聚合酶链式反应产物进行直接测序,然后对测定的核苷酸和推测的氨基酸序列进行比较分析。China/Tib/Gej/07-30的M基因由1483个核苷酸组成,编码335个氨基酸,与其他分离株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92.4%～97.7%和97.0%～98.2%。F基因由2411个核苷酸组成,编码546个氨基酸,与其他分离株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为85.5%～96.1%和94.3%～98.2%。China/Tib/Gej/07-30的F蛋白含有信号肽序列和跨膜结构域,序列高度变异。F蛋白第104～108位和第109～133位氨基酸位点分别是高度保守的裂解位点和融合肽结构域。F蛋白还含有序列高度保守的三个七肽重复区。China/Tib/Gej/07-30的M基因3′端的非编码区(UTR)长度为443个核苷酸,GC含量高达68.4%,与其他PPRV毒株的同源性为82.4%～93.5%。China/Tib/Gej/07-30的F基因5′UTR区长度为634个核苷酸,GC含量高达70.0%,与其他PPRV毒株序列相似性为76.2%～91.7%。; 包静月赵文姬王志亮李林吴国珍吴晓东刘春菊王君玮刘雨田李金明王英丽; 关键词：小反刍兽疫病毒野生株基质蛋白非编码区

新城疫病毒DF-1细胞蚀斑纯化方法的建立被引量：7: 2014年; 本研究对DF-1细胞的培养条件及新城疫病毒(NDV)DF-1细胞的蚀斑纯化方法进行了优化摸索,结果显示相较于DMEM培养基,DF-1细胞更适宜在含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基中生长,DF-1细胞以3×105/孔的剂量覆盖6孔板能获得最佳的铺板效果,吸附病毒后1.5h覆盖第1层琼脂,48h后覆盖第2层琼脂能获得最佳的蚀斑形成效果。通过对蚀斑纯化株F和HN基因测序分析,结果表明蚀斑纯化后无任何变异。通过此方法可在1个星期之内获得稳定的纯化毒株,方法简单、可重复性强、纯化效率高。; 赵明戈胜强王静静赵云玲郑东霞左媛媛于松梅王晓真刘春菊王英丽刘华雷包静月吴晓东单虎王志亮; 关键词：新城疫病毒

刘春菊

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