吕岩
- 作品数：7 被引量：24H指数：3
- 供职机构：第二军医大学药学院生化药学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 分泌mMIP-1α趋化因子的小鼠肝癌细胞株的建立及其体内致瘤性被引量：3
- 2001年
- 目的 :建立分泌 m MIP- 1α的小鼠肝癌细胞株 ,并观察其体内致瘤性。 方法 :m MIP- 1α c DN A被克隆入 p Babe puro逆转录病毒载体 ,构建的重组逆转录病毒载体 p Babe puro- m MIP- 1α转染包装细胞 ,嘌呤酶素抗性细胞培养上清感染小鼠肝癌细胞系 Hepa1- 6 ,RT- PCR和免疫组化分别检测 Hepa1- 6、Hepa1- 6 - m MIP- 1α的 m MIP- 1α m RNA和 m MIP- 1α蛋白的表达。绘制 Hepa1- 6 - m MIP- 1α与 Hepa1- 6的生长曲线观察细胞的生长。琼脂糖凝胶打孔法体外观察 Hepa1- 6 - m MIP- 1α分泌蛋白对小鼠脾细胞的趋化作用。观察 Hepa1- 6 - m MIP- 1α体内致瘤性。结果 :构建了重组逆转录病毒载体 p Babe puro- m MIP- 1α,Hep-a1- 6不表达 m MIP- 1α m RNA及蛋白 ,Hepa1- 6 - m MIP- 1α表达 m MIP- 1α m RNA和蛋白。 Hepa1- 6 - m MIP- 1α与 Hepa1- 6的生长曲线基本一样。 Hepa1- 6 - m MIP- 1α分泌了对小鼠脾细胞有趋化作用的分子。 Hepa1- 6 - m MIP- 1α体内致瘤性降低。 结论 :Hepa1- 6 - m MIP- 1α能产生 m MIP- 1α,m MIP- 1α不改变细胞体外生长状况 ,Hepa1- 6 - m MIP- 1α产生的 m MIP- 1α有趋化活性 ,m MIP- 1α能使 Hepa1- 6 - m MIP- 1α致瘤性降低。
- 覃林花卫立辛杨庆吕岩吴孟超郭亚军
- 关键词：趋化因子
- E1B55kDa缺陷型腺病毒对人肝癌细胞的杀伤研究被引量：5
- 2001年
- 目的 探讨E1B5 5kDa缺陷型腺病毒dl15 2 0对肝癌细胞的体内外杀伤作用。方法 用dl15 2 0分别感染p5 3基因型不同的人肝癌细胞 ,感染后第 4天用染色的方法检测存活细胞。用RT PCR检测细胞内p5 3和p2 1Waf 1基因表达的改变 ,通过检测腺病毒衣壳蛋白hexon基因的表达证实腺病毒的感染。在SCID裸鼠瘤体内注射dl15 2 0 ,观察dl15 2 0对肝癌细胞的体内杀伤作用。结果 p5 3基因缺失的肝癌细胞Hep3B对dl15 2 0诱导的细胞毒性作用最敏感 ,超过 6 0 %的细胞被杀伤 ,而不足2 0 %的PLC/PRF/ 5 (p5 3基因突变型 )和HepG2 (p5 3基因野生型 )肝癌细胞被杀伤。腺病毒感染后 ,HepG2细胞内p5 3和p2 1Waf 1基因表达水平均明显升高。瘤体内注射dl15 2 0 ,可显著抑制Hep3B裸鼠移植瘤的生长 ,而对PLC/PRF/ 5和HepG2的裸鼠移植瘤则无明显的生长抑制作用。结论 E1B5 5kDa缺失的腺病毒可以选择性地杀伤p5 3基因缺失的肝癌细胞 ,是一种潜在的肿瘤治疗手段。
- 赵健吕岩郭亚军
- 关键词：腺病毒肝细胞癌P53基因基因缺失
- 分泌mRANTES趋化因子的小鼠肝癌细胞的建立及其体内致瘤性的初步研究被引量：5
- 2002年
- 目的:建立分泌mRANTES的小鼠肝癌细胞,并观察其体内致瘤性。方法:mRANTEScDNA被克隆入pBabepuro逆转录病毒载体,构建的重组逆转录病毒载体pBabepuromRANTES转染包装细胞,嘌呤酶素抗性细胞培养上清感染小鼠肝癌细胞系Hepa1-6,免疫组化检测Hepa1-6、Hepa1-6mRANTES的mRANTES蛋白的表达。绘制Hepa1-6mRANTES与Hepa1-6的生长曲线观察细胞的生长。琼脂糖凝胶打孔法体外观察Hepa1-6mRANTES分泌蛋白对小鼠脾细胞的趋化作用。观察Hepa1-6mRANTES体内致瘤性。结果:构建了重组逆转录病毒载体pBabepuromRANTES,Hepa1-6不表达mRANTES,Hepa1-6mRANTES表达mRANTES蛋白。Hepa1-6mRANTES与Hepa1-6的生长曲线基本一样。Hepa1-6mRANTES分泌了对小鼠脾细胞有趋化作用的分子。Hepa1-6mRANTES体内致瘤性降低。结论:Hepa1-6mRANTES能产生mRANTES,mRANTES不改变细胞体外生长状况,Hepa1-6mRANTES产生的mRANTES有趋化活性,mRANTES能使Hepa1-6mRANTES致瘤性降低。
- 覃林花卫立辛杨庆吕岩吴孟超郭亚军
- 关键词：趋化因子肝癌基因治疗免疫疗法
- Smac对骨肉瘤细胞系Saos-2生长及耐药性的影响被引量：1
- 2003年
- 目的:观察Smac表达对骨肉瘤细胞Saos-2生长和耐药性的影响。方法:构建smac和反义smac表达载体pcDNA-smac 和pcDNA-anti-smac,G418筛选出分别稳定转染pcDNA-smac和pcDNA-anti-smac的骨肉瘤细胞Saos-2。利用流式细胞仪检测各转染细胞的细胞周期分布;绘制各细胞在6 d内的生长曲线以观察各细胞生长情况的变化。同时采用MTT法检测各转染Saos-2细胞对依托泊苷的敏感性。结果:与转染空载体pcDNA3.0的Saos-2细胞相比,转染反义smac的Saos-2细胞G1/G0期比例升高,细胞生长自第4天起明显加快。转染smac的Saos-2细胞的细胞周期及生长曲线无明显差别;依托泊苷作用细胞后,与转染空载体pcDNA3.0的Saos-2细胞相比,转染反义smac的Saos-2细胞的存活率增高;而转染smac的Saos-2细胞的存活率降低。结论:抑制Smac在细胞中表达,可使Saos-2细胞生长加快,增强对依托泊苷的耐受性,Smac在细胞中的过表达可提高Saos-2对依托泊苷的敏感性。
- 金军赵健张霞张瑞萍石梅李晓东吕岩郭亚军
- 关键词：SMAC骨肉瘤细胞系SAOS-2细胞细胞生长耐药性
- Ad.smac腺病毒的构建及其体外抗肿瘤效应的初步研究被引量：3
- 2003年
- 目的 通过细菌内同源重组 ,制备表达全长smac基因的腺病毒 ,初步观察其体外对肿瘤细胞的杀伤作用。方法 构建含smac基因的腺病毒穿梭载体pAdTrack smac ,与骨架载体 pAdEasy1在细菌内重组为pAd .smac,经 2 93细胞包装为增殖缺陷性腺病毒。体外感染各种肿瘤细胞 ,用苔盼蓝拒染法观察其对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 利用AdEasyTM 系统成功构建了Ad .smac及对照腺病毒Ad .GFP ,多种肿瘤细胞感染Ad .smac后均出现细胞凋亡现象 ,对肿瘤细胞的杀伤率达 30 %以上。结论 利用细菌内质粒同源重组法可快速简捷地制备表达外源基因的腺病毒 ,Ad .smac在体外通过诱导细胞凋亡而有效地杀伤肿瘤细胞 ,为Smac在肿瘤治疗的应用提供了一定的试验参考依据。
- 金军赵健张霞张瑞萍石梅李晓东吕岩郭亚军
- 关键词：腺病毒体外抗肿瘤效应细胞凋亡
- 人胸腺素α原cDNA序列多态性分析被引量：1
- 2008年
- 目的：通过对人胸腺素α原（prothymosin-α，ProTa）cDNA测序来分析人胸腺素a原的序列多态性。方法：应用RT—PCR技术从健康人外周血及健康新生儿脐带血中扩增胸腺素α原cDNA，纯化后与克隆载体pMDl8-T连接，进行克隆测序，并与标准序列比对，分析其多态性。结果：序列分析结果表明，克隆的ProTa基因的核苷酸序列并不一致。与已报道的胸腺素Q原基因（NM-002823）进行比较，发现存在2种变异：I类变异包括107位单核苷酸突变（A→G）、110～121位和191～205位的核苷酸片段缺失；Ⅱ类变异为306位单核苷酸（G）缺失，多见于年龄60-80岁者。结论：本研究中Pro Tα cDNA序列存在2种变异，但并未影响其N-端前28个氨基酸。
- 弓雪莲郭葆玉郭满盈吕岩
- 关键词：胸腺素Α原CDNA
- 人胸腺素原α的克隆、表达和活性初步研究被引量：7
- 2005年
- 目的:克隆人胸腺素原αcDNA并在大肠杆菌系统内表达。方法:利用RT- PCR技术从健康男性外周血PBMC中扩增胸腺素原αcDNA,纯化后用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切PCR 产物,然后将该基因插入经同样双酶切的原核表达载体PBV220中,在PLPR 启动子控制下,热诱导天然表达胸腺素原α,表达产物部分纯化后利用淋巴细胞玫瑰花结实验进行了初步的活性测定。结果:凝胶电泳显示PCR扩增产物的长度为300 bp左右,重组质粒测序结果表明,插入片段与人胸腺素原α的序列完全一致,DE3重组菌在热诱导下高效表达相对分子质量为12 000 的蛋白,该蛋白能提高淋巴细胞玫瑰花结形成率,表明具有一定活性。结论:成功克隆人胸腺素原α基因并在大肠杆菌中得到表达。
- 王栋郭满盈邱磊吕岩郭葆玉
- 关键词：原核表达基因克隆
