夏小兵
- 作品数：34 被引量：300H指数：16
- 供职机构：解放军第302医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 杜氏利什曼原虫蛋白磷酸酶-2C的基因克隆化与序列分析被引量：6
- 2001年
- 目的 克隆杜氏利什曼原虫 (Leishmaniadonovani,Ld) 1S株蛋白磷酸酶 2C(PP2C)的编码基因 ,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗研究奠定基础。方法 体外培养杜氏利什曼原虫 1S株无鞭毛体 ,常规方法从虫体提取制备基因组DNA。以夏科氏利什曼原虫 (Leishmaniachagasi,Lc)的PP2C基因序列为参照 ,设计并合成利什曼原虫PP2C基因序列特异性的引物。结果 以杜氏利什曼原虫的基因组为模板 ,利用多聚酶链反应 (PCR)技术 ,扩增获得了杜氏利什曼原虫PP2C的全长编码基因。基因序列测定结果表明 ,杜氏利什曼原虫 1S株PP2C基因序列长度为 1317bp ,开放读码框架由 12 2 1bp组成 ,编码产物为 40 6个氨基酸残基。获得的杜氏利什曼原虫 1S株的PP2C基因与来源于夏科氏利什曼原虫的PP2C氨基酸残基序列的同源性为 95 % (387/ 40 6 )。结论 本研究克隆了杜氏利什曼原虫的PP2C基因 。
- 成军夏小兵王刚刘妍钟彦伟王琳杨继珍
- 关键词：杜氏利什曼原虫蛋白磷酸酶2C基因疫苗T细胞抗原基因克隆化
- 慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒准种特点的初步研究被引量：19
- 2002年
- 探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在慢性患者中存在状态． 以 ＨＢＶ基因序列为依据，设计特异性多聚酶链反应（ＰＣＲ）引物．自２例慢性患者体内扩增ＨＢＶ全Ｓ基因片段，克隆入Ｔ载体．限制片段长度多态性（ＲＦＬＰ）法确定ＨＢＶ的变异现象，ＤＮＡ测序确定病毒的变异程度。质粒ＥｃｏＲＩ酶切ＲＦＬＰ结果提示自２例患者血清中克隆出的２９和２８个阳性克隆中各有５种不同的长度带型，ＰＣＲ产物ＸｈｏＩ酶切ＲＦＬＰ结果则表现为高度保守，测序结果发现ＨＢＶ体内毒株碱基序高度一致，同一患者两株全Ｓ区序列测序结果表明ＤＮＡ序列的同源性大于９７％。本结果提示ＨＢＶ慢性患者体内有ＨＢＶ准种共存，且呈现出一定的优势克隆现象。
- 董菁成军王勤环刘友昭王刚施双双夏小兵邵清斯崇文
- 关键词：乙型肝炎病毒准种慢性乙型肝炎病毒变异
- 抗HEVORF2单链可变区抗体的筛选和鉴定
- 2000年
- 目的 :筛选和鉴定抗戊型肝炎病毒 (HEV)开放读码框架 2 (ORF2 )的人源化噬菌体单链可变区抗体。方法 :以大肠杆菌表达的重组 HEV ORF2多肽做为固相包被抗原 ,从半合成的人源化噬菌体抗体库中经过 4轮“吸附 -洗脱 -扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验 (EL ISA )、DNA序列分析鉴定 ,获得抗原结合活性较强的抗 -HEV ORF2单链可变区抗体 ,并以间接酶标法用该抗体对戊型肝炎患者石蜡包埋肝组织中的 HEV ORF2抗原进行免疫组织化学鉴定。结果 :筛选到的抗 - HEV ORF2的单链可变区抗体基因。酶切和序列分析表明 ,该抗体基因由 795 bp组成 :EL ISA和免疫组织化学结果显示 ,抗 - HEV ORF2人源化噬菌体单链可变区抗体能与重组 HEVORF2抗原特异性结合 ,并能够特异性识别戊型肝炎患者肝组织中的 HEV抗原。结论 :此法筛选的噬菌体单链可变区抗体亲和性较好 ,特异性强 ,较单克隆抗体制备方法简便 ,周期短 ,为进一步研究应用奠定了基础。
- 倪勤成军钟彦伟王松山施双双董菁夏小兵张耀新翟琦
- 关键词：戊型肝炎病毒单链可变区抗体噬菌体
- HBsAg人源噬菌体单链抗体的筛选及其在临床诊断中的应用被引量：18
- 2002年
- 目的 筛选乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)的人源噬菌体单链抗体 ,并探讨其在临床治疗和诊断中的应用价值。方法 以HBsAg阳性血清超速离心纯化的HBsAg为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得特异性较强的HBsAg人源单链可变区抗体 (ScFv) ;用该抗体对 10例石蜡包埋的乙型肝炎患者肝组织进行免疫组化鉴定。结果 酶联免疫吸附法 (ELISA)结果表明 ,制备的HBV人源单链抗体能与HBsAg抗原特异性结合 ;免疫组化结果表明 ,该抗体能够特异性识别乙型肝炎患者肝组织中的HBsAg抗原 ,与正常肝组织及丙型肝炎病毒 (HCV)的抗原均无交叉反应。结论 此法制备的单链抗体亲和性好 ,特异性强 ,且制备方法简便 ,周期短 ,为HBV病原的检测提供了新的有效试剂 ,为今后HBsAg人源抗体的研究和应用奠定了基础。
- 钟彦伟成军施双双赵景民王刚夏小兵田小军李莉张玲霞
- 关键词：HBSAG免疫组织化学乙型肝炎病毒表面抗原
- 抗HBsAg人源单链可变区抗体的筛选与可溶性抗体的表达被引量：12
- 2001年
- 采用噬菌体表面展示技术 ,以从乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)阳性血清超速离心纯化的HBsAg为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得特异性较强的HBsAg人源单链可变区抗体 (ScFv)克隆并提取质粒 ,经SfiⅠ /NotⅠ酶切鉴定后 ,亚克隆到 pCANTAB5E表达载体中 ,转化大肠杆菌XL1 Blue。经IPTG诱导后 ,表达的可溶性HBsAg特异性ScFv以 5 0 %硫酸胺沉淀 ,经SDS PAGE电泳表明 ,XL1 Blue中表达的HBsAg可溶性ScFv的分子量约 2 8kD。免疫活性检测结果表明 ,该单链抗体具有较强的抗原结合活性和特异性。HBsAg人源单链抗体的筛选和表达成功 ,为今后HBsAg人源抗体的研究和应用奠定了基础。
- 钟彦伟成军施双双夏小兵李克董菁刘妍杨继珍
- 关键词：HBSAG噬菌体单链抗体HBV
- 外周血中乙型肝炎病毒截短型囊膜蛋白基因的克隆化与序列分析被引量：36
- 2001年
- 目的研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在慢性感染者体内存在的特殊状态。方法采用特异性引物设计，以多聚酶链反应（ＰＣＲ）自患者血清中扩增全Ｓ基因片段，测序以明确变异的部位，并与既往已发表的ＨＢＶ ａｄｒ亚型进行序列比较。结果经测序发现慢性ＨＢＶ感染者体内存有变异病毒株编码的截短型表面抗原中蛋白基因，并存有ＨＢｓＡｓ和多聚酶区缺陷型病毒基因。结论在外周血中存在ＨＢＶ截短型囊膜蛋白编码基因，可能与患者不良预后有关。
- 董菁成军王勤环王刚施双双刘妍夏小兵斯崇文
- 关键词：乙型肝炎病毒聚合酶链反应突变准种克隆
- 乙型肝炎病毒表面抗原人源单链可变区抗体基因的克隆与鉴定被引量：16
- 2000年
- 目的 筛选、鉴定抗乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)蛋白的人源单链可变区抗体 (ScFv)的编码基因 ,为细胞内表达小分子单链抗体的研究及抗HBV的基因治疗研究奠定基础。方法 采用噬菌体表面展示技术 ,以氯化铯超速离心法纯化的HBsAg蛋白为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区抗体半合成库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”淘洗过程 ,获得抗原结合活性较强的HBsAg人源单链可变区抗体阳性克隆 ,并对其进行免疫检测及序列测定。 结果 筛选得到的ScFv片段编码基因为 789nt,编码的产物由 2 62个氨基酸残基组成 ,具有典型的轻链和重链可变区结构特点以及与HBsAg结合的特异性。结论 利用噬菌体抗体库技术 ,成功地获得了HBsAg人源单链可变区抗体的编码基因 。
- 成军钟彦伟施双双倪勤夏小兵董菁王刚刘友昭王琳刘妍杨继珍陈菊梅
- 关键词：乙型肝炎HBSAGSCFV编码基因噬菌体抗体
- 巴西利什曼原虫激活蛋白激酶C受体的基因克隆化与序列分析被引量：4
- 2001年
- 体外培养巴西利什曼原虫 (Lb ,Leishmaniabraziliensis)株无鞭毛体 ,常规方法提取制备基因组DNA。以公开发表的婴儿利什曼原虫 (Li,Leishmaniainfantum)的激活蛋白激酶C受体RACK (receptorforactivatedproteinCkinase)基因核苷酸序列为参照 ,设计并合成利什曼原虫RACK基因序列特异性的引物。以巴西利什曼原虫的基因组DNA为模板 ,利用多聚酶链反应 (PCR)技术 ,扩增获得巴西利什曼原虫RACK的全长编码基因。基因序列测定结果表明 ,巴西利什曼原虫RACK基因序列长度为 10 2 5bp ,开放读码框架由 939bp组成 ,编码产物为 312个氨基酸残基。获得的巴西利什曼原虫的RACK基因与报导的婴儿利什曼原虫的RACK基因编码产物的序列同源性达 99% (310 312 )。本研究克隆了巴西利什曼原虫的RACK基因 ,为应用诱导T细胞免疫应答抗原的编码基因进行巴西利什曼原虫的基因疫苗研究奠定了基础。
- 成军夏小兵王刚刘妍钟彦伟
- 关键词：利什曼原虫基因克隆化T细胞免疫激酶激活蛋白基因组DNA
- 肝移植术后败血症患者粪肠球菌PBP4基因的克隆化与分析
- 目的:研究肝移植术后并发败血症患者血中粪肠球菌青霉素结合蛋白(PBP)基因的存在情况.方法:设计合成特异性引物,用PCR法扩增自血液中分离的粪肠球菌PBP基因,测序并分析.结果:克隆获得2094bp长的基因片段,其中包含...
- 倪勤成军李莉夏光明王红旗夏小兵李克王刚洪源
- 文献传递
- 肝移植术后败血症患者粪肠球菌PBP4基因的克隆化与分析被引量：1
- 2001年
- 倪勤成军李莉夏光明王红旗夏小兵李克王刚洪源
- 关键词：肝移植术后粪肠球菌败血症败血病基因
