夏文龙
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗人和肽素单克隆抗体的研制
- 2014年
- 目的制备抗人和肽素单克隆抗体并完成鉴定。方法合成人和肽素C端及N端氨基酸片段并耦联钥孔戚血蓝蛋白(KLH)作为抗原,分别免疫BALB/c小鼠,利用经典杂交瘤技术筛选出分泌抗人和肽素抗体的单克隆细胞株,动物体内诱生法收集腹水,葡萄球菌蛋白A亲和层析柱纯化腹水中的单克隆抗体(单抗),完成抗体亚类鉴定,用间接ELISA鉴定其活性,初步应用于免疫细胞化学检测。结果获得了3株特异性抗人和肽素单抗2h7、5b10及5e7,均属于IgG1亚类,2h7针对的抗原表位在和肽素C端,而5b10及5e7针对的抗原表位在和肽素N端。间接ELISA检测证实3株单抗均特异性识别人和肽素,其中2h7和5b10可应用于免疫细胞化学分析。结论成功制备出抗人和肽素单抗,能特异识别和肽素C端和N端,可应用于细胞免疫化学检测,为人和肽素的进一步研究提供依据。
- 夏文龙卞智萍徐晋妉顾春荣吴恒芳陈相健杨笛
- 关键词：和肽素单克隆抗体杂交瘤细胞
- OX40/OX40L逆向信号对小鼠主动脉内皮细胞MMP-9表达及机制的研究被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨OX40配体(OX40 ligand,OX40L)逆向通路激活对培养的小鼠主动脉内皮细胞基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)表达及活性的作用。方法:分离与培养8～10周龄C57BL/6J小鼠主动脉内皮细胞,传代至第2代,用可溶性OX40(sOX40)、OX40L单克隆抗体(anti-OX40L)和钙离子螯合剂bapta-AM刺激内皮细胞,RT-PCR和Western blot方法检测内皮细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达水平,明胶酶谱法检测内皮细胞培养上清MMP-9活性,应用钙离子成像方法观察内皮细胞胞浆游离钙离子浓度([Ca2+]i)的改变。结果:与对照组相比,可溶性OX40(0.1 mg/L)刺激后内皮细胞MMP-9的mRNA及蛋白表达水平均显著增高,内皮细胞培养上清MMP-9活性明显增高,内皮细胞胞浆[Ca2+]i也明显增高。分别应用可溶性OX40L单克隆抗体(0.1 mg/L)和Bapta-AM(20μmol/L)预处理培养内皮细胞后,由可溶性OX40引起的内皮细胞基因和蛋白表达水平明显降低,内皮细胞培养上清MMP-9活性明显下降。结论:内皮细胞OX40L逆向信号的激活可以通过调节胞内的游离钙离子水平参与内皮细胞中MMP-9表达的调控,这可能是OX40/OX40L逆向信号通路参与动脉粥样硬化的发生、发展的机制之一。
- 张丹丹夏文龙刘强张大伟徐晋妉吴恒芳陈相健杨笛
- 关键词：OX40配体基质金属蛋白酶-9内皮细胞
