崔湘琳
- 作品数：22 被引量：175H指数：9
- 供职机构：北京大学基础医学院生理学与病理生理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重大项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RhoC基因表达与前列腺癌细胞系侵袭行为相关性的体外研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究RhoC基因在不同转移潜能前列腺癌细胞系中的表达及其与前列腺癌侵袭行为的相关性。方法利用逆转录聚合酶链反应、Western印记方法检测前列腺癌不转移亚系（PC-3M-2B4）和高转移亚系（PC-3M—1E8）细胞中RhoC mRNA和蛋白表达水平；构建RhoC基因真核表达载体转染前列腺癌不转移亚系PC-3M-2B4；利用Matrigel胶穿膜侵袭实验检测转染后细胞的体外侵袭能力、划痕修复实验检测运动迁移能力、组织化学染色检测微丝骨架结构的变化、明胶酶谱分析基质金属蛋白酶（MMP）活性变化，并利用Western印记检测Akt信号传导通路磷酸化水平变化。结果RhoC在两种不同转移能力前列腺癌细胞系中不同程度表达，在高转移亚系中高表达，不转移亚系中低表达，差异具有统计学意义（P〈0．01）。基因转染过表达RhoC后前列腺癌细胞的体外侵袭能力明显增强，正义转染组（125．21±10．43）与其相应空载体组（53．77±8．56）、反义组（46．22±8．12）和未转染对照组（57．68±7．25）相比，穿膜细胞数明显增多（P〈0．01）；运动迁移能力明显增强，正义转染组16h划痕修复率（62．38±2．36）明显高于转染空载体组（32．23±2．43）、反义组（29．47±1．86）和未转染对照组（31．88±2．67）（P〈0．01）；组织化学染色显示正义转染组细胞内肌动蛋白多聚体减少，微丝骨架杂乱、模糊；此外，RhoC基因正义转染组细胞MMP-2活性上调，p-Akt水平升高。结论RhoC基因过表达促进前列腺癌细胞的体外侵袭能力，并与前列腺癌细胞系转移潜能正相关，有望成为阻断前列腺癌转移的治疗新靶点。
- 袁峥苏静由江峰王洁良崔湘琳郑杰
- 关键词：前列腺肿瘤肿瘤浸润RHOC基因
- 反义VEGF基因及内皮抑素基因转染对人巨细胞肺癌生物学行为的影响被引量：6
- 2001年
- 目的 探讨反义VEGF基因和内皮抑素基因联合转染在抑制肿瘤血管生成和肿瘤生长转移中的作用。方法 反义VEGF12 1cDNA脂质体法转染人肺巨细胞癌细胞 (PG AS VEGF) ,先行转基因细胞裸鼠异种移植 ,之后电脉冲介导PsectagA 内皮抑素基因转染 ,观察反义VEGF基因和内皮抑素转染对肿瘤血管生成和肿瘤生长转移的调节作用。结果 肿瘤内微血管密度在PG AS VEGF、转染空载体组分别为 40 .6 7± 9.35和5 8.34± 10 .5 2 (P <0 .0 5 ) ;裸鼠体内接种PG AS VEGF细胞后 18天 ,PG AS VEGF、转染空载体组肿瘤体积分别为 (0 .9779± 0 .2 42 1)和 (1.5 2 10± 0 .415 0 )cm3(P <0 .0 5 ) ;PG AS VEGF、转染空载体组淋巴结转移率分别为16 .7% (2 /12 )和 5 0 % (6 /12 ) (P <0 .0 5 )。在肿瘤局部行PsectagA 内皮抑素基因转染的PG AS VEGF瘤 ,当肿瘤生长到 2 1天时 ,肿瘤生长受到明显抑制 ,PsectagA 内皮抑素基因转染组与PsectagA空载体转染组肿瘤体积分别为 (1.5 889± 1.1396 )和 (3 .398± 2 .6 42 )cm3(P <0 .0 5 ) ;两者肿瘤淋巴结转移率分别为 12 .5 % (1/8)和 75 %(6 /8) (P <0 .0 5 )。结论 内皮抑素基因转染对反义VEGF基因转染的PG细胞裸鼠体内生长和淋巴结自发性转移有协同抑制作用。
- 吴晓郑杰朱建健付坚马春树由江峰崔湘琳王洁良方伟岗周爱儒汤健吴秉铨
- 关键词：肺肿瘤血管内皮生长因子内皮抑素基因转染
- 应用差异显示技术从高低转移癌系克隆出肿瘤转移相关基因G3BP被引量：1
- 2001年
- 目的 克隆肿瘤转移相关基因。方法 应用倍比稀释法对人肺巨细胞癌PG进行单细胞克隆 ,并应用裸鼠异种接种及自发性转移体内实验对各亚系的转移潜能进行鉴定。以具有不同转移潜能的癌细胞亚系为研究对象 ,应用mRNA差异显示技术克隆差异片段 ,sanger双脱氧末端终止法测序及自动双向测序获得其碱基序列 ,与GenBank数据库进行同源性比较。在两组具有不同转移潜能的癌细胞亚系 (人肺癌 ,前列腺癌 )中Northern杂交验证表达差异。结果 两个具有不同转移潜能的亚系BE1和LH7,在完全相同的遗传背景下 ,亚系BE1在裸鼠体内 10 0 %成瘤 ,10 0 %转移 ;亚系LH7在裸鼠体内 10 0 %成瘤 ,无一例转移。二者转移表型的显著差异必然反映了转移相关基因表达与调控的差异。因此该系统是mRNA差异显示的良好模型。应用mRNA差异显示技术克隆差异片段 ,一个84 9bp片段在高转移亚系BE1中低表达 ,而在不转移亚系LH7高表达 ,二者差异显著 ,在重复实验中得到了验证。成功的回收该片段 ,连接入pGEM T载体 ,经sanger双脱氧末端终止法测序及自动双向测序获得其碱基序列 ,经GenBankBlastn检索 ,与G3BP(U32 519)同源性高达 99%。Northern杂交显示G3BP在LH7高表达 (约 3 3kb) ,而在BE1中低表达 ,验证了差异显示的结果 。
- 刘宇欣郑杰方伟岗由江峰王洁良崔湘琳吴秉铨
- 关键词：肿瘤转移G3BPGAP
- 鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白基因的筛选及其对转移性前列腺癌细胞生物学行为的影响被引量：2
- 2010年
- 目的筛选肿瘤转移相关新基因，探讨鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白基因（PAG1）转染对人前列腺癌细胞系PC-3M的高转移亚系PC-3M-1E8体外生物学行为的影响。方法利用PC-3M高转移亚系PC-3M-1E8、低转移亚系PC-3M-284，人肺巨细胞癌细胞系（PG）高转移亚系PG—BE1和低转移亚系PG—LH7cDNA制作4张基因芯片，筛选出PC-3M和PG高、低转移亚系共同差异表达基因。对在两个转移亚系共同表达下调的PAG1基因做进一步研究，采用即时定量PCR及Westernblot验证PAG1在PC-3M细胞系中的表达。构建pcDNA3．0-PAG1真核表达载体，稳定转染PC-3M-1E8细胞。MTT比色实验及软琼脂集落形成实验检测肿瘤细胞体外增殖能力；流式细胞术检测肿瘤细胞周期及凋亡；Matrigel穿膜实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果基因芯片初步筛选出PC-3M高、低转移亚系差异表达基因共327个，上调基因123个，下调基因204个。PG高、低转移亚系差异表达基因共281个，上调基因167个，下调基因114个。PC-3M与PG高转移亚系共同表达下调基因9个、上调基因8个。即时定量PCR及Westernblot证实PAG1在PC-3M高转移亚系中表达低于低转移亚系。MTT比色及软琼脂集落形成实验显示转染pcDNA3．0-PAG1组细胞增殖速度明显低于转染空载体组和未转染组（均P〈0．05）。细胞周期检测转染pcDNA3．0-PAG1组比转染空载体组和未转染组处于G0～G，期的细胞百分数明显增加（P〈0．05）。转染pcDNA3．0-PAG1组与转染空载体组和未转染组相比凋亡细胞百分率无显著差异（P〉0．05）。体外穿膜侵袭实验结果表明转染pcDNA3．0-PAG1组比转染空载体组和未转染组穿膜细胞数目明显减少，分别为（35．1±4．9）、（127．6±6．6）和（135．0±5．0）个（P〈0．05）。结论利用同一母系来源的高、低转移亚系制作基因芯片可以摒除转移无关基因的干扰，筛选出差异表
- 于文娟王曰伟谢志刚由江峰王洁良崔湘琳裴斐郑杰
- 关键词：肿瘤标记生物学寡核苷酸序列分析
- 血管内皮生长因子反义基因转染对高转移人巨细胞肺癌细胞系生物学行为的影响被引量：14
- 2000年
- 目的 探讨反义血管内皮生长因子 (VEGF)基因转染在抑制恶性肿瘤生长和转移的抗肿瘤血管基因治疗中的意义。方法 利用基因重组技术构建正义和反义VEGF12 1cDNA真核表达载体 ,用脂质体法转染高转移性人巨细胞肺癌细胞 (PG) ,经Northern杂交和Western印迹免疫化学检测VEGFmRNA和蛋白质的表达水平 ,并对转染前后细胞进行体外生长和裸鼠体内生长转移等多项生物学行为实验。结果 转染反义VEGF基因的细胞 3.3kbVEGFmRNA和相对分子质量为 45 0 0 0、410 0 0和 32 0 0 0蛋白质的表达水平降低 ,与对照组比较 ,裸鼠体内成瘤时间延长 ,肿瘤生长速度减慢 ,肿瘤在体内生长第 18d时 ,体积差异有显著性意义 (P <0 0 5 ) ;转移能力降低 ,淋巴结转移率差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。
- 吴晓郑杰付坚由江蜂崔湘琳王洁良方伟岗周爱儒吴秉铨
- 关键词：肺癌基因转染CDNA
- TIMP－1基因转染对人肺巨细胞癌细胞系生物学行为的影响被引量：17
- 1994年
- 利用基因重组技术构建了一个含有全长人ＴＩＭＰ－１ｃＤＮＡ的真核表达重组体。重组质粒通过脂质体法导入高转移入肺巨细胞癌细胞系（ＰＧ细胞）。随机挑选５个Ｇ４１８抗性克隆，并对其中的两个克隆ＰＧ－Ｔ２和ＰＧＴ４进行了深入的研究。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹表明，这两个克隆具有较高的ＴＩＭＰ－１ＲＮＡ表达，其表达水平明显高于ＰＧ细胞和空载体转染对照细胞ＰＧ－ＭＶ。ＰＧ－Ｔ２和ＰＧ－Ｔ４克隆细胞显示出很高的ＴＩＭＰ－１蛋白活性，相同条件下ＰＧ和ＰＧ－ＭＶ未能显示出具有ＴＩＭＰ－１蛋白活性。此外，与其母系ＰＧ细胞及空载体转染对照细胞ＰＧ－ＭＶ相比，ＴＩＭＰ－１转染细胞的增殖速度和侵袭能力明显下降，其在软琼脂上形成克隆和在裸鼠体内成瘤的能力丧失。提示ＰＧ细胞中ＴＩＭＰ－１基因的特异性上调不仅能抑制其侵袭能力，而且对其增殖和成瘤产生抑制作用。
- 周可祥吴秉铨郑杰王洁良由江峰崔湘琳
- 关键词：肺肿瘤肿瘤转移TIMP-1
- 肿瘤转移相关基因TMSG-1编码蛋白的定位被引量：10
- 2002年
- 目的 明确肿瘤转移相关基因TMSG 1编码蛋白在细胞内的定位。方法 计算机分析TMSG 1的跨膜区 ,构建GFP与TMSG 1融合蛋白表达载体pEGFP C1 TMSG 1,以LipofectAMINE介导转染人前列腺癌细胞PC 3M 1E8,荧光显微镜与共聚焦显微镜下观察。结果 计算机分析表明所示 ,TMSG 1有四个跨膜区 (aa33～ 4 8,aa6 4～ 79,aa114～ 130 ,aa15 8～ 174 ) ,推测其为跨膜蛋白。PSORTⅡ软件分析TMSG 1蛋白定位于胞浆 (可靠性 94 .1% ) ,具体位置为内质网 6 6 .7%、线粒体 11.1%、质膜 11.1%、高尔基体 11.1%。显微镜下观察TMSG 1 GFP融合蛋白表达于胞浆 ,呈不均匀的颗粒状、环状分布 ;而对照的GFP蛋白则在胞核和胞浆呈弥漫性分布。结论 TMSG 1蛋白定位于细胞内膜系统 ;利用GFP进行的亚细胞定位具有精确、快速、可重复等优点 ,是研究基因与蛋白定位的有效方法。
- 马春树由江峰郑杰王洁良崔湘琳吴秉铨
- 关键词：肿瘤转移绿色荧光蛋白
- 具有不同转移潜能的肺癌细胞亚系的分离鉴定被引量：30
- 1995年
- 自人肺巨细胞癌系分离了多个单细胞克隆，经体外侵袭实验和裸鼠体内接种相结合进行了初步鉴定后，挑选其中３个克隆化细胞亚系（ＰＧＢＥ＿１、ＰＧＣＬ＿３和ＰＧＬＨ＿７）进行形态、染色体众数、体外生长和侵袭，以及棵鼠体内成瘤率和自发性转移率检测。结果显示ＰＧＢＥ＿１、ＰＧＣＬ＿３和ＰＧＬＨ＿７在裸鼠体内的成瘤率均为１００％，淋巴结转移率分别为９４％、９４％和５０％，肺转移率则分别为８８％、６７％和４４％。表明人肺巨细胞癌母系为一异质性的细胞群体。
- 朱伟勇郑杰方伟岗王洁良由江峰崔湘琳吴秉铨
- 关键词：肺肿瘤肿瘤转移癌细胞
- 应用RNA干扰技术研究激素非依赖性高转移潜能前列腺癌细胞中survivin的表达及意义被引量：3
- 2006年
- 目的研究 survivin 在激素非依赖性高转移潜能前列腺癌中的表达及其与前列腺癌的生物学行为及侵袭和转移潜能的相关性。方法应用 RNA 干扰技术构建 survivin 真核表达载体,转染人激素非依赖性前列腺癌高转移亚系 PC-3M-1E8细胞系。通过细胞生长曲线、肿瘤细胞裸鼠异种接种、软琼脂集落形成实验检测体内、体外细胞生长能力;流式细胞术检测 survivin RNA 干扰质粒对细胞周期及细胞凋亡的影响,Western blot 检测 caspase3活性片段,观察 survivin 抑制细胞凋亡的情况;Matrigel 穿膜实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果稳定转染 survivin RNA 干扰质粒的 PC-3M-1E8细胞中 survivin 的 mRNA 及蛋白水平明显降低,蛋白水平与阴性对照组相比,约下降78%～80%,差异有统计学意义(P<0.01);体外培养细胞生长速度及裸鼠体内肿瘤生长速度均明显减慢,锚着不依赖性生长的能力(软琼脂克隆形成数:14.33±3.51)与阴性对照组(52.33±6.81)及空白对照组(54.00±6.00)相比明显降低(P<0.01);凋亡细胞比例明显增加,空白对照组、阴性对照组及干扰阳性组的凋亡比例分别为5.88±0.99、6.97±1.60、16.40±1.95,干扰阳性组的凋亡比例显著高于对照组(P<0.01),并伴有 caspase3活性片段的表达增加;细胞阻滞在 G_0/G_1期(干扰阳性组、阴性对照组及空白对照组的细胞 G_0/G_1期的比例分别为52.71±1.10、43.59±1.83及43.65±3.44,P<0.05),并在细胞形态学上出现多核巨细胞现象;细胞体外侵袭能力明显降低,干扰阳性组的细胞(38.67±6.59)与阴性对照组(46.07±9.97)及空白对照组(47.87±9.58)相比穿膜细胞数明显减少(P<0.05)。结论 survivin 在激素非依赖性高转移潜能前列腺癌中高表达,并与细胞凋亡、细胞生长及肿瘤侵袭有关。抑制 survivin 的表达可能成为临床治疗激素非依赖性前列腺癌的方法之一。
- 朱翔宁钧宇由江峰王洁良崔湘琳方伟岗郑杰
- 关键词：前列腺肿瘤肿瘤侵润
- TMSG-1基因功能的初步研究被引量：2
- 2003年
- TMSG-1是用mRNA差异显示技术克隆的转移相关基因,它在高转移肿瘤细胞系和有转移的肿瘤组织中表达下降。以高转移的前列腺癌细胞系PC-3M-1E8为受体细胞,通过基因转染技术观察了TMSG-1基因表达对细胞V-ATPase活性、细胞内pH值和细胞凋亡情况的影响,同时利用GFP对TMSG-1细胞内定位进行了分析。结果表明,V-ATPase在PC-3M-1E8细胞系,转染空载体和转染反义TMSG-1细胞系的活性无明显差异。在转染正义TMSG-1的细胞系中,V-ATPase的活性比PC-3M-1E8细胞系,转染空载体和转染反义TMSG-1细胞系均有明显增高(P
- 马春树宁钧宇由江峰柳林郑杰方伟刚王洁良崔湘琳吴秉铨
- 关键词：前列腺癌MRNA差异显示基因转染基因表达PH值
