康振
- 作品数：52 被引量：148H指数：7
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划江苏省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程文化科学更多>>
- 3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸的高效合成及其应用被引量：1
- 2019年
- 硫酸化化合物广泛存在于胞浆、细胞表面及胞外基质中,在机体细胞发育、分化、免疫、解毒和信号传递等生命活动过程中起着不可替代的作用。3'-磷酸腺苷-5'-磷酸硫酸(3?-phosphoadenosine-5'-phosphosulfate,PAPS)是化合物硫酸化过程中最常用的硫酸基供体,但目前合成PAPS并最终实现其工业化应用还困难重重。文中主要综述过去10年内关于PAPS的生物合成及应用的研究进展,以期为PAPS的合成及其在芥子油苷、肝素、硫酸软骨素及羟胺硝喹等的生物合成中的应用提供参考。
- 周正雄堵国成康振
- 关键词：芥子油苷
- 优化前体供给与细胞膜通透性强化大肠杆菌合成麦角硫因被引量：2
- 2022年
- 麦角硫因(Ergothioneine,ERG)具有抗氧化、抗炎、辐射保护等多种生理功能,广泛应用于食品、医药和化妆品领域。微生物发酵生产麦角硫因具有极大潜力,然而,由于工程菌株前体供应不充足等因素,麦角硫因的发酵质量浓度以及生产强度低下。作者旨在探究麦角硫因生产不同阶段中的前体限制,并通过优化前体供应解除限制,进而提高大肠杆菌麦角硫因合成能力。在证明组氨酸是限制麦角硫因合成的关键因素基础上,通过优化组氨酸供给,麦角硫因在摇瓶水平的发酵质量浓度达到175.81 mg/L;通过正交试验组合优化了半胱氨酸、柠檬酸铁胺和维生素B6的添加量,发酵质量浓度提高至182.61 mg/L;通过优化甲基供体的添加(1.5 g/L甲硫氨酸与0.6 g/L甜菜碱)以及通过添加0.2 g/dL的CaCl_(2)提高细胞膜通透性,麦角硫因的发酵质量浓度最终提高至243.06 mg/L。采用分批补料发酵培养108 h后,麦角硫因在3 L发酵罐上的发酵水平达到2.01 g/L,生产强度为18.61 mg/(L·h),为麦角硫因的规模化工业生产奠定了基础。
- 陈佳敏王阳堵国成康振
- 关键词：大肠杆菌发酵优化
- 枯草芽孢杆菌产碱性果胶酶
- 本实验首先从六种不同信号肽amyX,bpr,vpr,yvgO,wapA和nprE中筛选出最适合碱性果胶酶胞外表达的信号肽bpr,胞外酶活达到313.7 U mL-1.在此基础上使用强启动子P43表达碱性果胶酶,将碱性果胶...
- 张俊娇康振堵国成陈坚
- 关键词：枯草芽孢杆菌碱性果胶酶信号肽BPRP43
- 产麦角硫因大肠杆菌工程菌株的构建与优化被引量：4
- 2022年
- 麦角硫因(ergothioneine,ERG)是一种天然的抗氧化剂,广泛应用于化妆品、食品以及医药领域。相比于传统植物提取和化学合成方法,微生物发酵合成麦角硫因具有周期短、成本低等优点,因而受到广泛关注。为构建高产麦角硫因的大肠杆菌工程菌株,本研究以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)为出发菌株,通过引入耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)来源的麦角硫因合成基因簇egtABCDE以及粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)来源的Egt1,构建了从头发酵合成麦角硫因的工程菌株E1-A1,麦角硫因发酵浓度为(95.58±3.20)mg/L。为进一步提高麦角硫因的产量,对前体氨基酸组氨酸、甲硫氨酸以及半胱氨酸合成路径中关键酶的表达进行了强化,结果表明,单一表达基因serA^(T410STOP)、thrA以及两者共表达时,麦角硫因发酵浓度分别提高至(134.83±4.22)mg/L、(130.26±3.34)mg/L以及(144.97±5.40)mg/L。最后,采用分批补料发酵策略,菌株E1-A1-thrA-serA^(*)在无机盐培养基和丰富培养基培养中的产量分别为548.75 mg/L和710.53 mg/L。
- 王丽王阳李江华堵国成堵国成
- 关键词：代谢工程大肠杆菌氨基酸分批补料发酵
- 乙肝表面抗原在酿酒酵母中的异源表达被引量：1
- 2015年
- 乙肝表面抗原HBs Ag是乙肝疫苗的主要组分。从转录水平、翻译水平以及翻译后水平对其进行优化,实现了HBs Ag在重组酿酒酵母中的高效异源表达。与组成型启动子TEF1、TDH3、HXT7、ADH1相比,诱导型启动子GAL1可大幅度提高HBs Ag的表达;与GCCACC和AAAAAA相比,kozak序列TACACA最有利于HBs Ag的翻译表达;而共表达二硫键异构酶pdi对HBs Ag的活性表达具有显著的促进作用。通过3种水平的优化,HBs Ag活性从最初的8.87 IU/g提高至151.08 IU/g;最终,利用Ni柱亲和层析成功获得纯化的HBs Ag,活性为3.32 IU/m L。
- 邱玲钱俊佳康振陈坚
- 关键词：酿酒酵母乙肝表面抗原启动子KOZAK序列共表达
- 代谢工程改造酿酒酵母合成葡萄糖二酸被引量：3
- 2017年
- 葡萄糖二酸是一种高附加值的有机酸,广泛用于食品、医药和化工领域。为获得生产葡萄糖二酸的微生物细胞工厂,通过共表达小鼠来源的肌醇加氧酶(MIOX)及恶臭假单胞菌来源的醛酸脱氢酶(Udh),在酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CEN.PK2-1C中构建了葡萄糖二酸合成途径,产量为(28.28±3.15)mg/L。在此基础上,通过调控前体肌醇的合成途径,发现肌醇-1-磷酸合成酶(INO1)是葡萄糖二酸合成途径的限速酶,过量表达INO1,葡萄糖二酸产量达到(107.51±10.87)mg/L,提高了2.8倍。进一步弱化竞争支路中磷酸果糖激酶(PFK1)的表达,最终葡萄糖二酸的产量达到(230.22±10.75)mg/L,为进一步获得高产葡萄糖二酸细胞工厂提供基础。
- 巩旭刘叶王毳李江华康振
- 关键词：酿酒酵母代谢工程
- 枯草芽孢杆菌P_(spovG)启动子改造与表征被引量：1
- 2022年
- 枯草芽孢杆菌是重要的工业生产菌株,广泛应用于外源蛋白质的表达。目前在枯草芽孢杆菌中常见组成型启动子中,P_(spovG)作为高强度组成型启动子在表达外源蛋白质时,具有表达量高、稳定性好和适用范围广等优势。作者首先对P_(spovG)上游序列截短,发现将启动子上游序列由原来的251个碱基缩短为26个,仍能保持启动子强度不降低,并确定了紧邻-35元件上游的3个碱基“AGC”为影响启动子强度的关键碱基。其次对启动子的上游A-T富含区以及spacer区域的G-C富含区进行随机突变,证明了上游激活序列中A-T碱基的排列对启动子强度有重要影响,并得到了强度提高的突变体。最后通过将不同表达时期启动子的关键调控序列分别插入突变体的上下游,得到了启动子强度为原始启动子135.1%的新型启动子SP_(spovG)-P_(lytR)。本研究为枯草芽孢杆菌表达系统开发新型强组成型启动子提供了重要的参考。
- 张琳刘平王阳堵国成康振
- 关键词：枯草芽孢杆菌
- 代谢工程改造谷氨酸棒杆菌合成透明质酸被引量：2
- 2020年
- 透明质酸是一种被广泛应用于医药、化妆品和食品等领域的糖胺聚糖。透明质酸的主要工业生产菌株为兽疫链球菌,由于该细菌具有致病性,因此迫切需要构建安全的透明质酸生产菌株。通过在食品级表达宿主谷氨酸棒杆菌中异源表达透明质酸合酶基因(pmHasA),实现了透明质酸的合成,摇瓶中产量达到0.35 g/L。通过强化代谢途径中尿苷二磷酸-葡萄糖脱氢酶基因(ugdA2)和磷酸氨基转移酶基因(glmS)的表达以及敲除乳酸脱氢酶基因(ldh),透明质酸产量提高至0.81 g/L。在此基础上优化诱导条件,确定异丙基-β-D硫代半乳糖苷浓度为0.8 mmol/L,诱导剂添加时间为2 h时,摇瓶中透明质酸产量最高达到1 g/L。经过3 L发酵罐分批补料发酵,透明质酸产量达到4.8 g/L。该文通过调控谷氨酸棒杆菌代谢途径实现了透明质酸安全、高效的合成,为食品级透明质酸的生产奠定了基础。
- 胡立涛王阳李佳莲周思延王道安尹国斌刘京京康振陈坚
- 关键词：糖胺聚糖透明质酸代谢工程重组菌株谷氨酸棒杆菌
- 重组蛋白微生物表达系统的研究进展被引量：13
- 2019年
- 重组蛋白被广泛应用于食品和医药领域,产生了巨大的经济价值与社会效益。目前有多种生产重组蛋白表达系统,其中微生物表达系统由于培养简单、易于操作而受到最为广泛的关注。为了实现重组蛋白的高效表达,对表达系统进行改造优化是当前研究的热点与重点。本文综述了三种常用微生物蛋白质表达宿主,大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和毕赤酵母在表达重组蛋白质方面的近期研究进展,并展望了未来重组蛋白表达系统的研究方向和焦点,优化组合不同的影响因素支架,结合动力学参数、细胞区室测量,各种组学后大数据,有望获得较优的蛋白表达菌株。
- 黄浩王阳堵国成康振
- 关键词：重组蛋白大肠杆菌枯草芽孢杆菌毕赤酵母
- 途径优化强化枯草芽胞杆菌合成肝素前体被引量：1
- 2017年
- 肝素前体是化学酶法合成肝素的起点,肝素前体的微生物高效合成具有重要意义。在已构建的产肝素前体的枯草芽胞杆菌((1.71±0.08)g/L)中,分析了UDP-葡萄糖醛酸(UDP-GlcUA)途径中关键酶基因(pgcA、gtaB、tuaD)以及UDP-乙酰氨基葡糖(UDP-GlcNAc)途径中关键酶基因(glmS、glmM、glmU)的过量表达对肝素前体产量及其分子量的影响。在此基础上,通过共表达tuaD、gtaB、glmU、glmM和glmS基因,摇瓶中肝素前体产量提高至(2.89±0.11)g/L,分子量为(75.90±1.18)kDa。通过在3 L发酵罐中进行补料分批发酵,肝素前体的产量最终积累到(7.25±0.36)g/L,分子量为(46.66±2.71)kDa,为工业化生产肝素奠定了基础。
- 张琳培王浩周正雄堵国成陈坚康振
- 关键词：枯草芽胞杆菌分子量
