张宏刚
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种细菌DNA提取方法的正交设计优化被引量：1
- 2010年
- 目的通过正交实验优化异硫氰酸胍-硅胶提取细菌DNA的方法,以缩短其提取时间,进而缩短细菌特别是炭疽芽孢杆菌等恐怖细菌的核酸分子检测时间。方法以基因芯片的杂交信号值为指标,以异硫氰酸胍-硅胶提取DNA过程中的煮沸时间、室温放置时间、乙醇洗涤次数为考察因素通过正交实验法优化异硫氰酸胍-硅胶提取细菌DNA的条件。结果优化后的因素水平为煮沸10 min,室温放置15 min,乙醇洗涤2次。结论实验证明,优化后的提取时间比原来缩短了25 min,且信号值比原方法更高。
- 张锦伟陈苏红刘琪琦张宏刚王升启姜华
- 关键词：正交实验实时荧光定量PCR寡核苷酸序列分析炭疽
- 金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌被引量：3
- 2011年
- 目的:建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌(土拉菌)的方法,评价其灵敏度、特异性、重复性及其应用。方法:以小鼠抗土拉菌脂多糖单克隆抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜、兔抗土拉菌多克隆抗体作为检测抗体标记胶体金,通过金标银染技术放大检测信号,建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌体系;评价该方法的灵敏度、特异性和重复性;以经荧光定量PCR定量的土拉弗朗西斯菌为检测对象,比较金标银染免疫渗滤法和免疫层析法。结果:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌的最小检出量为1.0×103 CFU/mL,灵敏度高于免疫层析法;检测大肠杆菌、炭疽芽孢杆菌、布鲁菌和鼠疫耶尔森菌的结果均为阴性;密封保存的检测卡80 d内重复性良好,100 d后反应强度略有降低。结论:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌敏感性高、特异性强、重复性好,且方便快捷,不需要仪器设备,可作为快速检测土拉弗朗西斯菌的首选方法。
- 张宏刚陈苏红张敏丽赵素莲王升启
- 关键词：土拉弗朗西斯菌
- 光纤生物传感器检测嗜肺军团菌方法的建立
- 2012年
- 目的建立光纤生物传感器检测嗜肺军团菌的方法,为嗜肺军团菌提供一种快速、现场的检测手段。方法先用抗原或抗体包被光纤,再加入待测物质孵育6-10 min,最后加入荧光探针反应6-10 min,根据理化换能元件可以将荧光信号转换成电信号的原理,实现对样品的定性或定量检测目的。同时探讨了光纤修饰方法,包被缓冲液以及离子强度等因素对实验结果的影响。结果光纤生物传感器法检测嗜肺军团菌时,最低可检测到3×104cfu/mL,检测响应时间为20 min;伤寒沙门菌、大肠杆菌、结核杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌、痢疾志贺菌的检测结果均为阴性,显示出良好的特异性。结论光纤生物传感器检测嗜肺军团菌时,表现出快速、灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,可作为嗜肺军团菌的一种初筛方法。
- 宋玲玲陈苏红张敏丽张宏刚肖瑞王升启
- 关键词：嗜肺军团菌光纤生物传感器
- 金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌的方法建立及应用
- 目的：将斑点金免疫渗滤技术检测的快速性与金标银染技术对检测信号级联放大的敏感性相结合，建立金标银染免疫渗滤技术;并研制土拉弗朗西斯菌金标银染免疫渗滤诊断试剂盒，为检测土拉弗朗西斯菌提供快速、敏感的方法。
方法： ...
- 张宏刚
- 关键词：土拉弗朗西斯菌
- 酪胺信号放大-量子点标记银染增强的基因芯片可视化检测方法的建立被引量：6
- 2012年
- 目的：建立一种酪胺信号放大-量子点标记银染增强的基因芯片可视化检测方法，提高基因芯片检测的灵敏度。方法：待测靶基因与固定在玻片上的探针杂交，依次加入链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶、生物素标记的酪胺及链霉亲和素标记的量子点，37℃孵育，然后加入银增强试剂显色，最后用可视化生物芯片扫描仪扫描并记录结果；以牛布鲁菌 210105 株为检测对象，以酪胺信号放大-荧光素 Cy3（TSA-Cy3）检测法为对照方法，测定酪胺信号放大-量子点标记银染增强（TSA-QDS）检测法的灵敏度。结果：确定了基因芯片量子点标记银染增强可视化检测方法的检测流程，优化了检测条件，并考察了检测灵敏度。优化的检测条件为：酪胺-生物素稀释比例为 1∶4000，链酶亲和素标记的量子点稀释比例为 1∶50，37℃孵育时间为 25~30 min，银染增强时间为 6~7 min。检测牛布鲁菌的灵敏度为 103 CFU/mL。结论：该方法实现了基因芯片高灵敏度可视化检测，其灵敏度与荧光法相当，并且有可视化的优势。
- 张春刘琪琦陈苏红张宏刚王升启
- 关键词：量子点基因芯片辣根过氧化物酶
- 斑点金免疫渗滤技术及其在检测中的应用被引量：2
- 2011年
- 斑点金免疫渗滤技术是胶体金免疫技术与固相膜相结合发展起来的一项快速检测新技术,由于其具有简便、快速、经济、结果直观等特点而得到广泛的发展和应用,且有广阔的商业前景。本文综述了斑点金免疫渗滤技术的原理、制备过程及其在快速诊断中的应用,并对该技术的优缺点及发展趋势进行了讨论。
- 张宏刚宋玲玲陈苏红
- 关键词：硝酸纤维素膜胶体金免疫测定免疫学试验
- 我国免疫规划病种病原体保护性抗原研究进展被引量：1
- 2011年
- 目前疫苗技术迅速发展,已有多种疫苗用于传染病的预防,对控制传染病的传播起到了重要作用。2008年2月,卫生部宣布国家免疫规划病种扩至15种,相应疫苗也纳入免疫规划。疫苗接种后产生的保护性免疫应答使机体免受相应病原体感染,因此,依托免疫应答检测技术,利用各病种病原微生物的保护性抗原对疫苗的接种效果、免疫后的抗体水平进行评价具有重要的现实意义。本文综述了我国15种免疫规划病种病原体保护性抗原的研究进展。
- 颜浩张宏刚陈苏红王升启
- 关键词：免疫规划疫苗保护性抗原抗体
