张小勤
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- RNAi靶向BACE1基因治疗阿尔茨海默病的实验研究
- 实验目的
本研究在前期对AD多年研究的基础之上，采用新的基因表达抑制工具——RNA干扰技术(RNAinterference，RNAi)技术，探讨RNAi技术在体外细胞特异性下调BACE1的效果，为利用RNAi技...
- 张小勤
- 关键词：阿尔茨海默病RNA干扰Β分泌酶基因治疗
- 文献传递
- 臂丛损伤后脊髓前角运动神经元超微结构改变被引量：2
- 2007年
- 目的探讨大鼠臂丛损伤导致脊髓前角运动神经元死亡的机制。方法成年雄性SD大鼠24只,其中对照组6只,损伤组18只。建立3种臂丛损伤模型:右C7前根撕脱(A组);右C7前根撕脱+同侧C5～T1后根离断(B组);右C7前根撕脱+右C5与C6之间脊髓半横断(C组)。术后14d取C7节段脊髓,采用尼氏染色方法和透射电镜技术,观察脊髓前角运动神经元的存活率及其超微结构改变。结果术后2周A组脊髓前角运动神经元的存活率最高,B组居中,C组最低。3个臂丛损伤组C7前角均可见凋亡特征性改变:运动神经元内核染色质聚集靠边,核固缩、碎裂、核膜皱褶并内陷,并有染色质团块形成的凋亡小体。细胞体积缩小,胞浆内细胞器密集,线粒体轻度肿胀,核周粗面内质网减少,游离核糖体增多,胞浆内可见较多的空泡。神经元胞体周围的有髓神经纤维和无髓神经纤维呈轻度肿胀,髓鞘的板层结构消失。结论臂丛损伤诱导脊髓运动神经元死亡途径中存在凋亡和坏死两种机制,运动神经元可形成凋亡小体。
- 陈龙菊张小勤谢瑶袁群芳李峰
- 关键词：臂丛运动神经元脊髓
- 小干扰RNA抑制neuro-2a细胞内源β位淀粉样前体蛋白裂解酶1基因的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:分析小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)抑制neuro-2a细胞内源β位淀粉样前体蛋白裂解酶1基因(Beta-site APP cleaving enzyme protein,BACE1)的表达情况。方法:实验于2004-12/2006-06在中山大学中山医学院和上海交通大学农业与生物学院完成。①用脂质体将EGFP基因表达载体pEGFP-C1 Vector和体外转录合成的针对EGFP基因的小干扰RNA(siEGFP)分别或同时转染neuro-2a细胞,在倒置荧光显微镜下计算EGFP在neuro-2a细胞中的表达率。②将体外转录合成的siBACE1-1,siBACE1-2,siBACE1-3转染neuro-2a细胞,干扰24,48,72h后分别用Real time RT-PCR定量分析siBACE1对内源BACE1基因表达的抑制率和干扰的时效性。结果:①外源EGFP基因转染neuro-2a细胞后,43%neuro-2a细胞高表达EGFP蛋白。通过转染siEGFP则可有效抑制EGFP基因表达。②3个干扰位点的siBACE1对BACE1基因表达有不同的抑制效率,siBACE1-3使BACE1m RNA表达水平下降60%,siBACE1-1为13%,siBACE1-2对BACE1 mRNA无明显的抑制作用。③siBACE1抑制内源BACE1基因的表达与干扰时间相关,siBACE1干扰24h、48h后BACE1 mRNA的表达与正常组无明显差异(P>0.05),但干扰72h后,siBACE1-3和siBACE1-1均使BACE1 mRNA表达量下降。结论:体外转录合成的siBACE1能有效抑制neuro-2a细胞内源BACE1基因表达,其抑制率与BACE1基因的干扰位点和干扰时间相关。
- 张小勤李峰赵艳彭映基潘玉春崔芳岩孟和
- 关键词：BACE1
- RNAi下调β分泌酶表达治疗阿尔茨海默病的前景展望
- 2006年
- β淀粉样蛋白沉积是多种因素导致阿尔茨海默病发病的共同通路。本文介绍了近年来在β淀粉样蛋白及其相关的β分泌酶在阿尔茨海默病发病机制作用研究中所取得的进展,并对利用RNA干扰技术下调β分泌酶表达治疗阿尔茨海默病的进展及前景作一综述,以期为治疗阿尔茨海默病的药物研发提供思路。
- 张小勤李峰
- 关键词：RNA干扰阿尔茨海默病Β分泌酶
- siRNA抑制外源绿色荧光蛋白在neuro-2a细胞株中的表达
- 2007年
- 目的:用RNAi技术抑制哺乳动物神经元中外源报告基因的表达,并探讨该过程中RNAi的时间及剂量效应,为利用RNAi技术研究神经元基因功能提供参考。方法:采用神经细胞来源的细胞系neuro-2a小鼠神经瘤细胞为模型,将外源绿色荧光蛋白(GFP)基因转染到neuro-2a细胞内,利用体外转录法合成siRNA,分为3个剂量组对其进行干扰。结果:Neuro-2a细胞可以被有效地转染,而且siRNA在neuro-2a细胞内可以有效发挥干扰作用。这种干扰作用呈现出一定的剂量效应。结论:RNAi技术可以成功用于neuro-2a细胞抑制基因的表达,这种对GFP表达规律及RNAi剂量效应的研究为利用RNAi技术研究神经元基因功能提供了一定的理论参考和依据。
- 张小勤李峰赵艳彭映基潘玉春孟和崔芳岩
- 关键词：RNA干扰绿色荧光蛋白神经元
