张晨
- 作品数：16 被引量：8H指数：2
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 睾酮诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究被引量：4
- 2015年
- 试验旨在探讨睾酮对鸡胚胎干细胞(ESCs)向雄性生殖细胞分化过程中的诱导作用效果。首先对睾酮的适宜诱导浓度进行筛选,再联合支持细胞和维甲酸(RA)对传至2代的ESCs进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。结果表明:单独使用睾酮诱导,未出现精原干细胞(SSCs)样细胞;睾酮与支持细胞联合诱导时,在第6天有少许类胚体出现,至第12天,有少量SSCs样细胞;睾酮联合支持细胞和RA诱导过程中,诱导第2天出现类胚体,诱导第12天后出现类SSCs样细胞。实时荧光定量PCR结果显示,睾酮+支持细胞组中,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下调趋势,Dazl、integrinβ1、Stra8表达量持续上调;睾酮+支持细胞+RA共同诱导组中,各标记基因与ESCs向生殖细胞分化过程中各基因表达的趋势一致,并且Dazl的表达量明显高于对照组。睾酮单独诱导不能使ESCs向雄性生殖细胞分化,但有促进支持细胞和RA诱导效果的作用,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。
- 张晨蒋一秀王颖洁赵瑞丰王曼张文慧靳锴汪怡临张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞分化睾酮
- 鸡胚成纤维细胞单克隆细胞系的建立
- 目的：本研究旨在建立一套原代鸡胚成纤维细胞(primary stage chicken embryonic fibroblast,pCEF)的单克隆建系方法,以期获得具有高均一度的单克隆细胞系从而解决原代细胞均一度低和培...
- 赵瑞丰靳锴张晨金晶王颖洁左其生张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚成纤维细胞
- 鸡WDR5基因真核表达载体构建及对PGCs形成相关基因表达的影响
- 2021年
- 【目的】对鸡色氨酸天冬氨酸重复域5(WD repeat domain 5,WDR5)进行生物信息学分析,构建真核表达载体,并检测其对原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)形成相关基因表达的影响,探索WDR5在鸡PGCs形成中的调控作用。【方法】利用ProtParam、NCBI保守结构域分析、Uniport、TMHMM Server v.2.0和SignalP在线网站,分析WDR5的氨基酸序列、保守结构域、亲疏水性、跨膜结构域和信号肽表达。利用SWISS-MODEL进行同源建模预测其三级结构,借助String网站进行互作蛋白的预测。构建重组载体pcDNA3.1-WDR5-GST,进行双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1-WDR5-GST转染PGCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检验WDR5重组蛋白在PGC中的表达情况;用RT-qPCR检测过表达WDR5对PGCs形成相关基因(DDX4、C-KIT、BLIMP1、LIN28B和PRDM14)表达水平的影响。【结果】WDR5蛋白含有1个高度保守的WD40结构域,内含7个典型的WD40重复序列;其亲水性高、不含跨膜结构域、无信号肽表达,可用于构建重组真核表达载体。同源建模和互作蛋白预测显示WDR5高度保守,互作蛋白为类ASH2蛋白(ASH2 Like,ASH2L)、RB结合蛋白5(RB Binding Protein 5,RBBP5)、DPY30和KAT8调控因子NSL复合物亚基3(KAT8 Regulatory NSL Complex Subunit 3,KANSL3)。双酶切和测序结果表明,重组载体pcDNA3.1-WDR5-GST构建成功。RT-qPCR结果显示PGC中重组载体可使WDR5过量表达;Western blot结果表明,PGC中可表达重组蛋白。WDR5过表达可使PGCs形成相关基因的表达水平升高。【结论】构建的WDR5重组载体在鸡PGCs中能够表达;WDR5基因表达上调后,PGCs形成相关基因表达水平升高,推测其可调控鸡PGCs的形成。
- 张晨左其生邹艺琛赵娟娟张亚妮李碧春
- 鸡胚胎干细胞向精原干细胞分化过程中关键lncRNA的筛选
- 本文旨在探索鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向精原干细胞(Spermatogonia stem cell,SSC)分化过程中关键lncRNA 及靶基因,并探究其作用机制,为ESC 体外向SS...
- 李东纪艳芹王颖洁王飞路镇宇何娜娜靳锴汪怡临程少泽王曼张文慧张晨赵瑞丰张亚妮李碧春
- 关键词：胚胎干细胞原始生殖细胞精原干细胞靶基因
- 扬州大学试水高学历人才“订单培养”
- 2010年
- 7月11日起，扬州大学动物科学与技术学院大一学生唐琦又多了一个身份，作为首届“立华菁英班”的学员，他今后将成为校企双方共同培养的对象，“订单培养”可帮助他就业或者继续深造。
- 桑东平张晨
- 关键词：订单学历试水动物
- HSD3B2通过甾类激素合成通路调控鸡ESCs 向雄性生殖细胞分化
- 精原干细胞可以替代胚胎干细胞进行基因治疗和遗传操作而不涉及伦理道德,目前被广泛的应用和研究,但是对精原干细胞形成过程中具体的调控方式却少有研究.
目的：本研究旨在探索甾类激素合成通路在鸡雄性生殖细胞分化过程中的...
- 张晨王曼何娜娜汪怡临赵瑞丰余昕健金晶左其生张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞细胞分化甾类激素
- 如皋黄鸡功能未知基因C1EIP表达载体的构建及其抗小鼠血清制备被引量：1
- 2017年
- 为了深入研究鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)向雄性生殖细胞分化过程,基于RNA-Seq基础,筛选出功能未知且差异极其显著的关键基因C1EIP,PCR克隆得到其编码区全长序列409bp,构建其真核表达载体pcDNA3.0-C1EIP和pEGFP-C1EIP,实现C1EIP在真核细胞内的定位表达,并以PEI包裹pcDNA3.0-C1EIP后免疫小鼠制备抗血清。间接免疫荧光检测抗血清效价为1∶10,RT-PCR和Western blot证实C1EIP真核表达载体成功表达且抗血清效果良好,为C1EIP基因在ESCs向雄性生殖细胞分化过程中的功能研究奠定了基础。
- 李东王飞纪艳芹汪怡临王曼张晨王颖洁何娜娜靳锴路镇宇程少泽张亚妮李碧春
- 关键词：如皋黄鸡真核表达抗血清
- HSD3B2通过甾类激素合成通路调控ESCs向雄性生殖细胞分化
- 本研究旨在探索睾酮所在的甾类激素合成通路在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用机制,为构建鸡雄性生殖细胞分化调控网络提供理论依据.本实验利用睾酮对鸡胚胎干细胞(ESCs)进行诱导实验;再通过对睾酮所在甾类激素合成信号通路中关键...
- 张晨王曼何娜娜汪怡临赵瑞丰余昕健金晶左其生张亚妮李碧春
- 关键词：胚胎干细胞雄性生殖细胞细胞分化
- 鸡Rbbp5基因的生物信息学分析及过表达载体构建
- 2021年
- 研究旨在利用生物信息学技术分析Rbbp5基因的生物学特征,构建过表达载体,为研究其在鸡生殖干细胞中的调控模式提供试验材料,以探讨其作为组蛋白甲基化修饰酶发挥作用的具体机制。试验利用多种在线工具分析RBBP5的氨基酸序列、保守结构域、亲疏水性、跨膜结构域和信号肽表达,预测其二级、三级结构,进行互作蛋白的预测;采用双酶切和测序鉴定重组载体pcDNA3.1-Rbbp5-Gst;qRT-PCR验证重组载体在PGCs中的表达。结果显示:RBBP5蛋白含有高度保守的结构域——WD40,内含7段典型的WD40重复序列,其亲水性高、不含跨膜结构域、无信号肽表达,可用以构建过表达载体;同源建模和互作蛋白预测显示RBBP5高度保守,互作蛋白为ASH2L、WDR5、DPY30和MLL2等;双酶切和测序结果表明,Rbbp5成功插入pcDNA3.1载体,未出现移码和突变;qRT-PCR结果显示PGCs中重组载体可使Rbbp5过量表达。结果为探明Rbbp5在鸡原始生殖细胞形成中的功能和机制研究提供了试验素材和理论依据。
- 王生存张晨张晨左其生赵娟娟张亚妮张亚妮
- HSD3B2通过甾类激素合成通路调控鸡雄性生殖细胞形成
- 1引言精原干细胞可以替代胚胎干细胞进行基因治疗和遗传操作而不涉及伦理道德，目前被广泛的应用和研究，但是对精原干细胞形成过程中具体的调控方式却少有研究。本研究旨在探索甾类激素合成通路在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用，为构建...
- 张晨王曼何娜娜汪怡临赵瑞丰余昕健金晶左其生张亚妮李碧春
- 关键词：雄性生殖细胞分化
