张海鹏
- 作品数：111 被引量：496H指数：12
- 供职机构：中国医科大学基础医学院病理生理教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学文化科学更多>>
- 高压氧对急性移植物抗宿主病小鼠细胞因子表达的影响被引量：2
- 2005年
- 目的:观察高压氧(HBO)对骨髓移植时急性移植物抗宿主病(aGVHD)小鼠脾组织中细胞因子表达的影响,探讨HBO抗aGVHD的作用机制。方法:应用直线加速器排空C57BL/6小鼠骨髓后,注入BALB/C小鼠骨髓与脾淋巴细胞的混合液,复制aGVHD模型。应用RT-PCR技术检测经HBO、环孢素A(CsA)、氨甲喋呤(MTX)处理后,小鼠脾组织中白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)及白细胞介素10(IL-10)mRNA水平的变化。结果:HBO组小鼠11d的生存率明显高于异基因移植组及CsA+MTX组;HBO组小鼠脾组织中TNF-α和IL-2mRNA相对含量显著低于异基因移植组(P<0.05)、显著高于CsA+MTX组;HBO组小鼠脾组织中IL-4和IL-10mRNA相对含量显著高于异基因移植组及CsA+MTX组(P<0.05)。结论:HBO可能通过调节促炎/抑炎细胞因子的分泌而发挥其明显的抗aGVHD作用。
- 孙鲁宁段忠辉张海鹏
- 关键词：高压氧急性移植物抗宿主病细胞因子
- 高压氧预处理对小鼠皮肤移植术后脾淋巴细胞及其黏附分子的影响(英文)被引量：4
- 2010年
- 本研究探讨高压氧预处理对同种异体小鼠皮肤移植排斥反应的影响及其分子机制。BALB/c供鼠与C57BL/6受鼠,各自或共同接受高压氧预处理;受鼠在皮肤移植术后,腹腔注射常规免疫抑制剂环孢素A。采用免疫荧光染色技术和流式细胞术,观察不同处理方案对小鼠脾淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+细胞百分率及淋巴细胞表面黏附因子LFA-1(CD11a/CD18)表达的影响。结果表明,与对照组相比,HBO预处理组小鼠脾淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+及其表面黏附分子CD4+CD11a+、CD4+CD18+、CD8+CD11a+、CD8+CD18+的表达均下降,以供鼠和受鼠都接受HBO预处理同时与环孢素A联合应用组下降最明显(p<0.05);HBO预处理与环孢素A联合应用组小鼠一般状态好于单独应用HBO预处理或环孢素A组。结论:高压氧预处理与环孢素A联合应用较单独应用高压氧预处理和环孢素A可更好地降低皮肤移植术后的免疫排斥反应,其保护作用的分子机制与调节淋巴细胞的活性并抑制其表面黏附因子的表达作用相关。
- 宋晓宇孙鲁宁郑宁宁张海鹏
- 关键词：高压氧预处理黏附分子免疫排斥
- RNA干扰对小鼠脾淋巴细胞TNF-α表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的:触发哺乳动物细胞内RNA干扰,研究肿瘤坏死因子(TNF-α)特异性小片断双链RNA对活化的小鼠淋巴细胞TNF-α表达的影响。方法:原代培养小鼠脾淋巴细胞并用脂多糖激活,确立细胞分泌TNF-α的峰值,将针对TNF-α靶序列的干扰片断经PCR扩增后转染入细胞,ELISA法检测TNF-α浓度,RT-PCR法检测TNF-αmRNA的表达。结果:终止刺激后48h淋巴细胞分泌TNF-α达高峰,TNF-α特异RNA干扰组与阴性对照组比较TNF-α浓度降低近30%,TNF-αmRNA表达抑制率达54.5%。结论:TNF-α小片断双链RNA可特异性抑制哺乳动物淋巴细胞TNF-α的表达;RNA干扰具有严格的序列特异性,只特异的沉默靶基因而不影响其他基因的表达。
- 宋晓宇郑宁宁孙杰张海鹏赵昕
- 关键词：RNA干扰肿瘤坏死因子Α脾淋巴细胞
- 我国粘多糖贮积症IH型患者α-L艾杜糖苷酶基因的一种同义突变被引量：1
- 2002年
- 目的 :探讨我国粘多糖贮积症IH型 (MPS -IH)患者α -L艾杜糖苷酶 (IDUA)基因的突变类型。方法 :采用荧光分光光度计检测临床疑似MPS患者及其家属白细胞中IDUA活性 ;对IDUA活性为零的患者及其家属扩增其IDUA基因外显子VII并对其进行单链构象多态 (SSCP)分析 ;根据SSCP结果进行基因序列分析。结果 :酶学检查发现 10例MPS -IH型患者 ,其白细胞中IDUA活性均为 0 ;SSCP分析发现在这 10个MPS -IH家系中有 7个家系出现同一种泳动变位 ;基因序列分析结果显示这 7个MPS -IH家系均出现一种同义突变 ,该突变在正常人群中未检测到。结论 :我国MPS -IH型患者IDUA基因外显子VII出现一种高发的同义突变。
- 孙鲁宁徐岩董贵章张海鹏
- 关键词：突变遗传性疾病染色体病
- 高压氧环境对小鼠脾淋巴细胞Thy-1及IL-2R(α)的影响
- 1997年
- C_(57)BL/6小鼠在0.25MPa下吸99.2％氧作用1.5h,其脾淋巴细胞Thy-1及IL-2R(α)的阳性细胞百分率明显低于正常组小鼠;而去肾上腺组和去肾上腺髓质组明显高于高压氧组与假手术组。结果提示:高压氧环境可使细胞免疫功能降低。在这一机制中,肾上腺起着重要作用。
- 赵红田伟王亚杰张海鹏
- 关键词：高压氧T淋巴细胞肾上腺IL-2R小鼠
- 人类红细胞膜二氧化碳转运相关蛋白AQP-1和RhAG的研究
- 2011年
- 目的探讨人类红细胞膜上二氧化碳膜转运相关蛋白-水通道蛋白1(aquaporin-1,AQP-1)和RhAG蛋白(Rh-associated glycoprotein,RhAG)在不同二氧化碳浓度下表达量的变化。方法采集新鲜人血抗凝,离心制备红细胞悬液,采用免疫组织化学、流式细胞仪及Western blot法检测在二氧化碳浓度为5%、10%、15%、20%及25%时人类红细胞膜上AQP-1和RhAG的表达情况。结果 AQP-1和Rh蛋白随不同浓度二氧化碳表达量发生了很大变化,其中,AQP-1在二氧化碳浓度为20%时达到高峰,二氧化碳浓度为10%、15%、20%、25%与5%的AQP-1的表达量相比明显增强(P<0.05)。10%、15%、25%浓度之间AQP-1的表达量无显著性差异(P>0.05)。RhAG的表达量在二氧化碳浓度为10%时达到高峰,且10%、15%、20%、25%与5%的二氧化碳浓度下RhAG的表达量相比显著增强(P<0.05)。二氧化碳浓度为10%、15%、20%、25%RhAG之间浓度相比无显著性差异(P>0.05)。结论 AQP-1和RhAG表达量随不同二氧化碳浓度的变化而变化,表明两者在二氧化碳跨膜转运过程中,可能在不同二氧化碳浓度下发挥转运蛋白质的功能。
- 赵红张倩茹袁伟覃虹张海鹏
- 关键词：二氧化碳水通道蛋白-1
- 高压氧对缺血再灌注小鼠脑组织MMP-9、MMP-2mRNA的表达及血脑屏障通透性的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨高压氧（HBO）对缺血再灌注小鼠脑组织中基质金属蛋白酶（MMPs）MMP-9、MMP-2mRNA的表达及血脑屏障通透性的影响。方法复制清醒小鼠脑缺血再灌注模型，并于再灌注期间行0．25MPaHBO治疗5次，在处死动物前1h经尾静脉注射2％伊文蓝（EB），采用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）方法及比色法分别检测脑组织中MMP-9、MMP-2mRNA的表达及EB的含量。结果脑缺血再灌注组MMP-9、MMP-2mRNA的表达及EB的含量明显高于假手术组，差异有统计学意义（P〈0．01），高压氧组与假手术组比较，脑组织中MMP-9、MMP-2mRNA的表达及EB的含量相近（P〉0．05），HBO＋脑缺血再灌注组脑组织中基质金属蛋白酶MMP-9、MMP-2mRNA的表达及EB的含量明显低于脑缺血再灌注组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论高压氧可明显减少脑缺血再灌注脑组织中基质金属白蛋酶MMP-9、MMP-2的表达，具有降低血脑屏障通透性的作用。
- 赵红朱丽娜武剑华张海鹏陈学新
- 关键词：高压氧血脑屏障缺血再灌注
- 靶向TNF-α基因shRNA干扰片段的筛选和重组体的构建
- 2009年
- 本研究利用RNA干扰技术,筛选出可以高效、特异性抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的小发夹状RNA(shRNA)片段,设计并构建重组质粒,进行序列分析,为探索TNF-α相关疾病的基因治疗提供新途径。取原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,置于15%DMEM中,调细胞浓度为2×107/L,接种于6孔板,3ml/well;细胞用脂多糖(LPS)激活,ELISA法测不同时间培养上清中TNF-α的浓度;将针对TNF-α基因的5段shRNA干扰片段的表达框经PCR扩增、纯化后,与转染试剂混合转染入巨噬细胞,细胞用LPS激活24小时后用ELISA法测培养上清中TNF-α的浓度,RT-PCR法测细胞TNF-αmRNA的表达;将最有效抑制TNF-α表达的干扰片段插入质粒载体,转化E.coliDH5α感受态菌株,提取质粒,进行测序分析。结果表明:LPS刺激巨噬细胞24小时后,细胞分泌TNF-α达高峰;转染了干扰序列1的细胞培养上清中TNF-α浓度与对照组相比下降最明显(p<0.05),达59.46%,TNF-αmRNA的表达被抑制了61.2%;将干扰序列1DNA序列克隆到载体上,经测序鉴定确实为所需序列。结论:成功筛选出靶向TNF-α基因的shRNA干扰片段并构建重组质粒,可进一步利用克隆所得到的shRNA干扰TNF-αmRNA的表达,为TNF-α相关疾病的基因治疗提供新手段。
- 宋晓宇郑宁宁孙鲁宁张海鹏
- 关键词：肿瘤坏死因子-ΑRNA干扰
- 高压氧与甲基强的松龙对不同种系皮片移植小鼠脾T淋巴细胞及其粘附分子表达的影响被引量：1
- 2000年
- 目的 探讨高压氧 (HBO)与甲基强的松龙对皮肤移植小鼠脾淋巴细胞 CD3、CD4、CD8及CD4、CD8阳性细胞粘附分子 CD1 1 a、CD1 8表达的影响。方法 不同系小鼠移植皮片后 ,分别在 99.2 %O2 0 .2 5 MPa的 HBO舱内每天暴露 1.5 h和 (或 )腹腔内每天注射甲基强的松龙 0 .3ml,14d后用流式细胞仪检测脾淋巴细胞 CD3、CD4、CD8阳性细胞百分率以及 CD4、CD8阳性细胞上粘附分子 CD1 1 a、CD1 8的表达情况。结果 1.HBO组、甲基强的松龙组、HBO+甲基强的松龙组 CD3、CD4、CD8阳性细胞百分率均较正常对照组明显下降 (P<0 .0 1) ;CD4、CD8阳性细胞上粘附分子 CD1 1 a、CD1 8阳性细胞百分率较正常对照组明显下降 (P<0 .0 1)。 2 .HBO组 CD+ 3、CD+ 4 、CD+ 8、CD+ 4 / CD+ 1 1 a、CD+ 4 / CD+ 1 8、CD+ 8/ CD+ 1 1 a和 CD+ 8/CD+ 1 8细胞百分率较甲基强的松龙组明显降低 (P<0 .0 5 )。3.HBO+甲基强的松龙组 CD3、CD4、CD8阳性细胞百分率及其 CD4、CD8阳性细胞上粘附分子 CD1 1 a、CD1 8的表达较 HBO组和甲基强的松龙组明显降低 (P<0 .0 1～ 0 .0 5 )。结论 HBO与甲基强的松龙均可明显抑制 T细胞亚群及其粘附分子的表达 ,且两者具有协同作用。
- 赵红王海波王常慧张海鹏韩然起郝鸣政
- 关键词：高压氧T淋巴细胞粘附分子
- 低氧培养小鼠肝细胞膜蛋白的蛋白质组学研究被引量：2
- 2011年
- 目的:采用蛋白质组学方法研究低氧条件下培养小鼠肝细胞膜蛋白表达的变化情况并探讨其病理生理学意义。方法:直接消化法分离C57BL/6小鼠肝细胞,于低氧条件下(5%CO2,4.5 mg/L O2)培养8 h后提取膜蛋白,然后采用双向电泳法分离差异表达的蛋白,凝胶银染后切取差异蛋白点进行MALDI-TOF质谱检测,对获取的数据采用Mascot软件在NCBInr数据库内检索,并采用Western blottng方法验证差异蛋白的表达。结果:发现低氧组小鼠肝细胞膜蛋白图谱中有28个蛋白点表达量与对照组有显著差异(P<0.05),根据数据库检索结果,鉴定了低氧时低表达的膜蛋白9个和低氧时高表达的膜蛋白7个。Western blotting验证结果与蛋白质组学分析一致。结论:低氧时,抑素、细胞色素b-c1复合体亚单位1和血红素结合蛋白p22HBP可能在细胞感受外界环境的氧变化及随后的细胞内低氧信号传递的过程中起到了非常重要的作用。
- 孙鲁宁张静萍孙娇张海鹏
- 关键词：低氧膜蛋白质蛋白质组
