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致肾盂肾炎大肠杆菌132菌株消减文库的构建及筛选: 目的：构建国内分离的致肾盂肾炎大肠杆菌(uropathogenic E.coli,UPEC)132基因组DNA消减文库，筛选其特异性片段，并对新发现的片段获取其完整的开放读码框(open reading fr...; 张玉梅; 关键词：肾盂肾炎抑制性消减杂交斑点杂交基因组步移; 文献传递

致肾盂肾炎大肠埃希菌新基因R049免疫保护作用的研究被引量：4: 2008年; 目的克隆和表达致肾盂肾炎大肠埃希菌（UPEC）132新基因R049，研究R049重组蛋白对小鼠的免疫保护作用。方法利用PCR定向克隆方法构建R049基因原核表达系统，表达后通过镍亲和层析纯化获得R049重组蛋白，制备鼠多克隆抗体。重组蛋白与UPEC132全菌蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析，继而R049重组蛋白免疫BALB／c小鼠，用同源菌对小鼠经尿道上行感染，比较免疫组与对照组小鼠尿液与肾脏细菌计数差异。结果成功构建重组株E．coli BL21（DE3）／pET32a-R049ORF，重组蛋白相对分子质量（MT）约为66．9×10^3，纯化后其纯度达到95％，制备多克隆抗体效价为≥1：102400。Western blot证实重组R049蛋白与UPEC132全菌蛋白均能与小鼠抗血清发生特异性反应。动物实验结果表明尿液和肾脏菌落计数在免疫组均明显低于对照组（P〈0．01，P〈0．05）。结论UPEC132的新基因R049具有一定的免疫保护作用，其机制有待进一步研究。; 葛新张玉梅陈锦英林旭赵凤玲; 关键词：克隆表达免疫保护动物实验

致肾盂肾炎大肠杆菌特异性片段R049聚集性分布的研究被引量：5: 2008年; 目的研究致肾盂肾炎大肠杆菌（UPEC）132特异性片段R049在UPEC菌株和正常人粪便分离的大肠杆菌菌株中的分布情况。方法对20株UPEC和40株粪便分离大肠杆菌采用PCR方法扩增R049片段，对R049阳性菌株检测编码5种毒力因子的基因（papC、fimH、hfy、aer、cnfl），并对其基因组DNA用XbaⅠ酶切，进行脉冲场凝胶电泳分析，继而用毛细管法将DNA片段转移至尼龙膜，利用地高辛标记的R049 ORF探针片段进行Southern杂交，分析杂交条带的分布特征。结果20株UPEC中有8株（40％）、40株粪便分离的大肠杆菌中有3株（7．5％）R049片段扩增阳性，两组差异有统计学意义（P〈0．01）。R049阳性菌株中，R049片段与5种UPEC毒力因子密切相关。Southern杂交结果表明3株粪便分离大肠杆菌R049阳性杂交带分别为150kb、15kb与240kb；8株UPEC中有6株阳性杂交带均为350kb，其余2株分别为280kb和25kb。结论UPEC132特异性片段R049在国内分离的UPEC菌株中具有共有性和聚集性分布的特征。; 葛新陈锦英张玉梅高英堂侯敏贺靖冬; 关键词：致肾盂肾炎大肠杆菌脉冲场凝胶电泳 SOUTHERN杂交

致肾盂肾炎大肠杆菌132特异性基因的筛选被引量：6: 2007年; 目的通过抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization，SSH）技术，比较致肾盂肾炎大肠杆菌132（UPEC132）与非致病性E．coliK-12MG1655之间基因组的差异，筛选UPEC132特有的基因片段。方法应用SSH技术构建UPEC132（tester）与非致病性E．coliK-12MG1655（driver）菌株差异DNA消减文库，经PCR和斑点印迹法筛选鉴定阳性克隆，并进行测序及生物信息学分析。结果获得约1600个重组菌的UPEC132消减文库，随机挑取其中的300个克隆，有37个含有UPEC132特异的DNA序列。特异性片段测序后进行生物信息学分析，发现与其相关的37个基因为UPEC132所特有，其中1个为新发现的DNA片段，9个为与致病相关基因，7个为与代谢和物质转运相关基因，2个为与外膜蛋白相关基因，3个为与调节相关基因，10个为未知功能蛋白的基因，其他5个为功能未分类的基因。结论 SSH技术是筛选病原菌特异基因的有效方法，已确定了37个UPEC132的特异基因，为进一步阐明其致病分子机制打下了基础。; 张玉梅陈锦英高英堂刘欣; 关键词：致肾盂肾炎大肠杆菌特异基因斑点印迹

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张玉梅