张荣光
- 作品数：70 被引量：258H指数：8
- 供职机构：新乡医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省医学科技创新人才工程项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 一种基于CRISPR的大肠杆菌O157:H7菌株检测试剂盒及检测方法
- 本发明公开了一种基于CRISPR的大肠杆菌O157:H7菌株检测试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。该检测试剂盒包含针对大肠杆菌O157:H7菌株的CRISPR1位点基因序列或其同源性达95％以上的同源序列设计的引...
- 段广才梁文娟张荣光杨海燕张卫东郗园林范清堂
- 文献传递
- 一种幽门螺杆菌蛋白及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种幽门螺杆菌蛋白及其制备方法与应用，其氨基酸序列与下列幽门螺杆菌蛋白氨基酸序列seq2相同或包含有与seq2同源性高于或等于60％的氨基酸序列片段。本发明的优点如下：成功地克隆到幽门螺杆菌蛋白的基因片段，说...
- 段广才张荣光
- 文献传递
- 幽门螺杆菌融合蛋白HspA-UreB在pMAL-C2x中的表达与免疫学活性研究被引量：1
- 2005年
- 目的:在pMAL-C2x中表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)融合蛋白HspA-UreB,探索其免疫学活性,为Hp基因工程疫苗的研究奠定基础。方法:从重组质粒pNHA27和pNUB27中纯化回收hspA和ureB基因片段,并以hspA-ureB的顺序连接后插入原核表达载体pMAL-C2x中,表达麦芽糖结合蛋白(MBP)与HspA-UreB的融合蛋白。采用亲和层析法纯化融合蛋白MBP-HspA-UreB,并辅以弗氏佐剂皮下免疫小鼠,蛋白印迹法对免疫小鼠血清进行检测。结果:特异PCR法和酶切鉴定证实融合基因hspA-ureB克隆入表达载体,并以融合蛋白形式MBP-HspA-UreB高效表达,相对分子量为119 000,约占细胞总蛋白的31%。通过大肠杆菌抗原吸收法纯化免疫小鼠血清后,与纯化的融合蛋白进行杂交,结果显示在119 000处出现特异杂交带。结论:融合蛋白HspA-UreB具有良好的免疫原性和免疫反应性。
- 代丽萍段广才范清堂张荣光
- 关键词：幽门螺杆菌免疫学
- 幽门螺杆菌HspA乳酸菌疫苗构建及免疫反应性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的探讨幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)在食品级乳酸乳球菌NZ3900菌株中的克隆表达及免疫反应性。方法利用基因重组技术构建乳酸乳球菌重组子NZ3900/pNZ8110-hspA;绘制生长曲线,观察hs-pA插入对乳酸乳球菌重组子生长影响及乳酸链球菌素(Nisin)对重组子生长影响;采用钠十二烷基硫酸盐-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测HspA在乳酸乳球菌中的表达;应用western-blot鉴定重组子表达HspA的免疫反应性。结果成功扩增出幽门螺杆菌河南分离株(MEL-Hp27)的hspA基因,构建了hspA基因的乳酸乳球菌原核表达系统(NICE);细菌生长曲线显示hspA的插入未对乳酸乳球菌重组子的生长产生影响,除10 ng/mL Nisin对重组子生长影响较小外,20～100 ng/mL nisin对重组子的生长均有明显抑制;SDS-PAGE和Tricine SDS-PAGE检测均未观察到HspA条带;western-blot鉴定结果显示乳酸乳球菌表达的HspA抗原蛋白具有良好免疫反应性。结论HspA在乳酸乳球菌中的少量表达影响重组菌生长。
- 张小娟王新彩段广才张荣光
- 幽门螺杆菌感染的昆明小鼠模型的建立被引量：15
- 2006年
- 张荣光段广才范清堂郗园林代丽萍
- 关键词：幽门螺杆菌感染昆明小鼠HP感染人群感染率革兰阴性HP疫苗
- 重症手足口病患儿实验室指标的判别分析被引量：55
- 2014年
- 目的探讨实验室指标在手足口病重症病例诊断中的意义,从检验医学角度分析重症手足口病的发病实质。方法选择50例重症手足口病患儿为病例组,另选同期50例轻症手足口病患儿为对照组,于入院次日晨采集空腹全血样本同时检测白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)、中性细胞比率(NEUT%)、淋巴细胞比率(LYMPH%)、单核细胞比率(MONO%)、C反应蛋白(CRP)、T细胞(CD3+)、Ts细胞(CD3+CD8+)、Th细胞(CD3+CD4+)、Th/Ts(CD4/CD8)、NK细胞(CD16+CD56+)、B细胞(CD19+)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、补体C3(C3)、补体C4(C4)、红细胞沉降率(ESR)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、降钙素原(PCT)、S100蛋白(S100)、高敏肌钙蛋白T检测(TNT-HS)、总血胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、腺苷脱氨酶(ADA)、前白蛋白(PA)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸(HBDH)、肌酸激酶(CK)及肌酸激酶同工酶(CK-MB),采用Fisher逐步判别分析法对证型与检验指标的相关性进行分析。结果①与轻症组相比,重症手足口病患儿WBC、CD19+、NSE、DBIL和ALB水平较高(P<0.05),而MONO%、CD3+细胞和CD3+CD4+细胞、LDH及HBDH水平较低(P<0.05);②对重症手足口病判别能力较强的7个指标依次为CD19+、NSE、NEUT%、MONO%、DBIL、LDH、ALB,其对判别函数的贡献达100.0%;③重症手足口病的判别方程为:Y1=-190.462-0.102×NEUT%+2.926×MONO%+1.212×NSE+0.622×CD19++8.845×DBIL+6.181×ALB+0.104×LDH。结论①重症手足口病患儿的免疫功能、神经功能及肝脏、心脏功能等均有所改变;②CD19+可能对手足口病重症的诊断具有一定的敏感性;③临床上有可能运用判别方程进行手足口病重症进展的初步判断。
- 隋美丽马晓梅段广才陈帅印张荣光申远方范清堂郗园林
- 关键词：重症手足口病免疫功能肝功淋巴细胞
- 幽门螺杆菌ureB在乳酸菌中的表达和抗原活性鉴定被引量：1
- 2010年
- 在幽门螺杆菌疫苗研究中，尿素酶（Ure）是研究最多、最理想的疫苗候选抗原。目前研究常以减毒沙门菌作为活菌载体，但活的减毒沙门菌在人体及动物体内仍有一定的毒性，而不能用于体质弱的群体如婴幼儿、年老者及免疫缺陷者。以乳酸乳球菌（Lactococcus lactis，L．lactis）作为活菌疫苗载体，可以避免上述问题。
- 陈帅印张荣光段广才范清堂
- 关键词：幽门螺杆菌疫苗疫苗候选抗原活性鉴定UREB乳酸菌免疫缺陷者
- 幽门螺杆菌lpp20基因的克隆与表达被引量：3
- 2003年
- 目的 克隆及表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)lpp20基因,为探索高效的防治幽门螺杆菌感染的疫苗抗原和诊断抗原奠定基础。方法 用PCR方法从幽门螺杆菌的染色体DNA上扩增出1pp20基因片段,将目的基因插入的表达载体pMAL-C2X中,用重组质粒转化大肠杆菌(E.coli TBI),并在E.coli TB1中进行表达。用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析。结果 用PCR方法扩增的lpp20基因长度约为540 bp;经酶切、PCR和测序分析,插入到载体的基因片段与文献报道的基因序列一致;SDS-PAGE的结果显示,目的基因表达产物的相对分子质量为18kDa,融合蛋白的表达量占全菌总蛋白的34%。结论 本研究中构建的pMAL-C2X与lpp20基因重组质粒在E.coli TB1中能够高效表达目的基因。该重组子的构建为幽门螺杆菌lpp20基因的研究建立了重要的基础。
- 张荣光段广才
- 关键词：幽门螺杆菌抗原染色体DNA上消化道疾病幽门螺杆菌感染
- 幽门螺杆菌脂蛋白基因的重组表达和免疫活性鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的制备幽门螺杆菌(Hp)Lpp20重组蛋白(rLpp20),鉴定其免疫活性,为Hp疫苗和免疫诊断研究提供候选抗原。方法采用基因克隆技术将Hplpp20基因克隆到表达载体pMAL-c2X中,用重组质粒转化E.coliTB1。采用IPTG诱导lpp20基因与麦芽糖结合蛋白(Maltose binding protein,MBP)基因融合表达,用多糖树脂亲和层析方法纯化表达的融合蛋白(MBP-rLpp20)。将MAP-rLpp20用蛋白因子FactorXa酶切,得到不带MBP的rLpp20。分别用MAP-rLpp20、rLpp20和Hp全菌抗原免疫小鼠,用Western blot检测MBP-rLpp20和rLpp20的抗原活性。结果表达的MBP-rLpp20的相对分子质量为60×103,表达量占菌体总蛋白的34.1%,占可溶性蛋白的14.2%。经酶切和纯化得到的rLpp20的相对分子质量为15×103。纯化制备的MBP-Lpp20和rLpp20的纯度分别为90.4%和91.2%,且与相应免疫小鼠血清及Hp全菌抗原免疫小鼠血清均能发生阳性反应。结论该研究成功制备了纯度较高的MAP-Lpp20和rLpp20蛋白;这两种重组蛋白均具有免疫活性,对Hp疫苗和免疫诊断研究具有应用价值。
- 张荣光段广才范清堂郗园林
- 关键词：幽门螺杆菌抗原疫苗蛋白
- 大肠杆菌肠毒素基因突变体在乳酸菌中的表达与免疫学鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的构建表达大肠杆菌肠毒素基因突变体mlt63的乳酸菌工程菌株,为黏膜免疫佐剂研究建立重要基础。方法从前期构建的质粒p BV-mlt63中经PCR扩增mlt63基因,经双酶切将mlt63与质粒载体p NZ8110连接。用连接产物转化大肠杆菌MC1061菌株,从重组菌株中提取p NZ8110-mlt63,用于电转化Lactococcus lactis NZ3900菌株;经质粒双酶切和测序,鉴定重组菌株L.lactis NZ3900/p NZ8110-mlt63。采用nisin诱导重组乳酸菌表达m LT63,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 mlt63 PCR扩增产物长度与预期相符;重组菌株鉴定结果显示L.lactis NZ3900/p NZ8110-mlt63构建正确;Western blot分析在重组菌株中检出2条mlt63表达的蛋白带,分子量分别为10 k D和40 k D。结论本研究首次将mlt63基因克隆至乳酸乳球菌中,并表达出具有抗原活性的蛋白,鉴于目前亟需安全有效的黏膜免疫佐剂,本研究发现将对该领域研究产生重要影响,对胃肠感染性疾病口服疫苗研究具有促进作用。
- 王琛尹光辉尹光辉李健李健张荣光
- 关键词：乳酸乳球菌肠毒素基因重组免疫佐剂
