施国民
- 作品数：4 被引量：34H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人EPO cDNA基因在CHO细胞中的稳定表达被引量：2
- 1999年
- 建立稳定表达人红细胞生成素（ＥＰＯ）的工程细胞株。方法：用 ＤＮＡ磷酸钙共转染法，将人ＥＰＯ ｃＤＮＡ的表达质粒 ｐＣＤＢ与标志质粒 ｐＳＶ－ｄｈｆｒ共转染到 ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞中。用 ＥＬＩＳＡ法检测到 ７０个克隆的细胞培养上清，筛选出５０个克隆细胞系。结果：经ＭＴＸ加压扩增，获得４系高效表达ＥＰＯ的细胞系（Ｂ４、Ｃ３、Ｆ１０、Ｇ７），表达量为 ２． ２～１０ μｇ／（１０６ ｃｅｌｌ· ２４ ｈ），ＥＰＯ的分泌量在上述细胞系扩增了 １１～３１倍。 Ｆ１０细胞系表达量为最高，并进一步亚克隆纯化。其中Ｆ１０－６亚克隆细胞株的平均表达水平为１０ ｕｇ／（１０６ｃｅｌｌ·２４ ｈ），细胞冻存后复苏传代１５次，ＥＰＯ的表达水平无明显改变。结论：以Ｆ１０－６亚克隆细胞株建立了工程细胞株。
- 胡云龙方君史江聂海洋施国民许祥裕
- 关键词：红细胞生成素CDNACHO细胞
- Cecropin B抗菌肽基因的定向诱变与表达被引量：24
- 1999年
- 采用寡核苷酸介导的定向点突变法，对天蚕抗菌肽Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ基因１３ 位甲硫氨酸（ Ｍｅｔ） 诱变为亮氨酸（Ｌｅｕ） 或缬氨酸（Ｖａｌ） ，保留１ 位上的Ｍｅｔ，诱变后的Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＢＤＮＡ序列分析证明产生了预期的点突变。将Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ 突变体基因与ｐＧＥＸ４Ｔ２ 融合表达载体中的谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ） 基因融合，在Ｅ．ｃｏｌｉ 中表达，当ＩＰＴＧ 诱导３０ｍｉｎ 后，工程菌的数量开始减少，然后逐渐恢复正常。说明Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ 突变体与ＧＳＴ 基因融合表达后仍然具有很强杀伤原核细胞的作用。
- 胡云龙胡泰山林世康苏剑施国民李伟赵学忠屈贤铭
- 关键词：抗菌肽基因表达CECROPIN
- 人白细胞介素29的cDNA克隆和序列分析被引量：2
- 2004年
- 目的 :克隆人白细胞介素 2 9的cDNA ,以进一步研究其结构与功能的关系。方法 :分离人的外周血单个核细胞 ,IMDM(含PHA和IL 2 )培养过夜后 ,Poly(I:C)诱导 2 4～ 48h ,收集细胞 ,Trizol法提取细胞总RNA ,RT PCR扩增出全长 60 3bp的IL 2 9cDNA ,将其与表达载体pPROEXTMHTa连接 ,转入大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,建立了hIL 2 9的cDNA克隆。结果 :测序表明克隆的cDNA与Genebank报道的人IL 2 9cDNA序列完全一致。结论在国内成功获得hIL 2
- 施国民张锦海李越希吴玉章
- 关键词：HIL-2人白细胞介素2CDNA克隆CDNA序列
- 动物细胞无血清培养基的应用及研究进展被引量：6
- 2000年
- 使用无血清培养基除了避免生产批间差异、不利于目的蛋白的分离纯化和产业化时难以建立SOP以外;优化的无血清培养基可通过 延长细胞的G_1期或迫使细胞处干G_0期而使较长时间地维持细胞高密度培养,高效地生产目的产物;还可以避免衰老死亡细胞释放的蛋白酶降解目的产物。应用CHO细胞无血清悬浮培养技术,使活细胞密度达到1×10~7cell/ml水平以上,与传统的批式培养相比产物浓度提高5—10倍,相对应的培养基成本明显下降。
- 林世康胡云龙施国民
- 关键词：动物细胞无血清培养基细胞培养
- 全文增补中
