李姗姗
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 沉默羊传染性脓疱皮炎病毒DNA聚合酶基因的RNAi载体的构建
- 2012年
- 为了构建用于沉默羊传染性脓疱皮炎病毒(Orf virus,ORFV)DNA聚合酶基因的2种载体,试验选择病毒复制所必需的DNA聚合酶基因作为干扰靶基因,并设计靶基因的扩增引物,经PCR扩增后测序;随后,与Check2载体分别经PmeⅠ和NotⅠ双酶切,酶切后连接产生Check2-靶基因(Check2-D)重组质粒;然后,利用公用网站按照RNAi序列设计的原则,设计RNAi靶点序列并合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XhoⅠ和HpaⅠ酶切后的pll3.7载体连接产生pll3.7-shRNA质粒;最后,利用磷酸钙法进行pll3.7-shRNA质粒和Check2-D质粒共转染293T细胞,利用双荧光检测系统试剂盒检测其RNA干扰效果。结果表明:成功构建了pll3.7-shRNA质粒和Check2-靶基因重组质粒,干扰效果最好,可达到91.0%。
- 李姗姗潘求真崔玉东连正兴
- 关键词：DNA聚合酶基因RNA干扰
- 山羊TLR2绿色荧光蛋白融合载体的构建
- 2012年
- 为了构建在哺乳动物细胞中表达的山羊TLR2绿色荧光蛋白融合载体,试验根据克隆到T载体上的山羊TLR2测序结果,设计1对不含终止子的引物,将山羊TLR2 PCR产物连接到pEGFP-N1载体上,用磷酸钙法转染293T细胞,并在荧光显微镜下观察。结果表明:重组质粒经酶切和测序鉴定正确,且在293T细胞中表达;融合蛋白发出绿色荧光,表明TLR2-EGFP主要分布在细胞膜上。说明试验成功地构建了pEGFP-TLR2-N1绿色荧光蛋白融合载体。
- 潘求真冯国兴李姗姗张弘韬崔玉东连正兴
- 关键词：山羊绿色荧光蛋白基因表达
- 利用RNAi技术建立抗羊传染性脓疱皮炎病毒的细胞株
- 羊传染性脓疱皮炎(contagious ecthyma)俗称“羊口疮”，是由羊传染性脓疱皮炎病毒(Orf virus,ORFV)引起的山羊、绵羊等中小反刍动物以及人的一种嗜上皮性、接触性传染病。本病传染性强、发病率高、呈...
- 李姗姗
- 关键词：RNA干扰
- 文献传递
- 山羊Toll样受体2基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2011年
- 为了研究山羊Toll样受体2(TLR2)基因,试验采用RT-PCR技术,根据已发表的牛、猪、绵羊TLR2基因序列的保守区设计1对引物,扩增山羊TLR2基因的cDNA,连接T载体,克隆测序得到长度为2 355 bp的序列,提交至GenBank(序列号为GU984768.1),分析TLR2基因的核酸和氨基酸序列并与其他物种的TLR2基因序列比对。结果表明:所得序列与绵羊、印度大蓝羚、牛等序列的同源性大于95%,所得序列的二级结构经预测分析符合Toll样受体家族的特征。
- 冯国兴潘求真李姗姗崔玉东连正兴
- 关键词：RT-PCR
