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多顺反子载体构建的策略及进展被引量：3: 2012年; 多顺反子载体在基因治疗中具有重要的应用价值。目前常用的构建策略有多启动子载体，融合蛋白，插入内切蛋白酶位点，内部核糖体插入位点IRES等，但是这些构建方法往往有载体容量有限．受细胞类型限制，不能表达多个蛋白等缺点。自裂解多肽2A可应用在多顺反子载体构建中，并且具有结构短小，上下游基因表达平衡性好，可用于共表达多个蛋白等优点，是一种构建多顺反子载体的有效工具。; 张俨李振海; 关键词：基因治疗 IRES

attB位点核心区定点突变对φC31整合酶效率的影响: 2013年; 目的考察attB位点核心区碱基突变对φC31整合酶存真核细胞中催化目的基网整合效率的影响。方法选取attB位点核心区中可能对中c31整合酶效率产生影响的碱基，设计含有相应位点突变的引物，采用大引物法两轮PCR扩增得到含突变碱基的attB片段，将其连人含报告基因的载体pEGFP。NI中得到pEGFP—NI—attB。以含野生型attB位点的报告基因载体pEGFP-N1-attB作为对照．将上述载体分别与中φC31整合酶表达质粒共转染HeLa细胞，经过药物筛选、染色、细胞克隆计数后，计算并比较整合效率。结果成功完成9个含有突变碱基attB位点及报告基因载体的构建。酶切及测序鉴定结果显示每个质粒含1或2个突变碱基。其中6个质粒为目标碱基突变，3个为PCR过程中随机产生的非预期突变。细胞实验结果表明，3个含有突变attB报告质粒的整合率与野生型attB相比无显著性差异，其余6个突变attB报告质粒的整合率与野生型attB相比显著降低（P〈0．05），尤其是其中两个attB位点中含有2个碱基突变的报告质粒，整合率降低极为显著（P〈0．001）。结论attB位点核心区碱基保守性较强，其中一些关键位点的突变使得整合酶效率降低。; 李振海谢飞马晴雯; 关键词：点突变

ФC31整合酶系统在基因治疗中的应用被引量：1: 2012年; 基因治疗是一种极具应用前景的疾病治疗方法。作为一种非病毒载体系统，ФC31整合酶系统凭借其高效性、位点特异性与低毒性的特点，在基因治疗的应用中具有无可比拟的优势。ФC31整合酶可以介导治疗基因整合到靶细胞基因组并稳定、长期表达，目前已经在多种组织和器官的体内、离体研究中取得成功。文章着重阐述ФC31整合酶的作用机制、应用实例及优缺点，并评估了其安全性。; 李振海马晴雯; 关键词：基因治疗安全性

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李振海