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李振海
作品数:
3
被引量:4
H指数:1
供职机构:
上海市儿童医院
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发文基金:
国家重点基础研究发展计划
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相关领域:
医药卫生
生物学
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合作作者
马晴雯
卫生部
张俨
上海市儿童医院
谢飞
上海市儿童医院
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安全性
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机构
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上海市儿童医...
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卫生部
作者
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李振海
2篇
马晴雯
1篇
谢飞
1篇
张俨
传媒
3篇
医学分子生物...
年份
1篇
2013
2篇
2012
共
3
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多顺反子载体构建的策略及进展
被引量:3
2012年
多顺反子载体在基因治疗中具有重要的应用价值。目前常用的构建策略有多启动子载体,融合蛋白,插入内切蛋白酶位点,内部核糖体插入位点IRES等,但是这些构建方法往往有载体容量有限.受细胞类型限制,不能表达多个蛋白等缺点。自裂解多肽2A可应用在多顺反子载体构建中,并且具有结构短小,上下游基因表达平衡性好,可用于共表达多个蛋白等优点,是一种构建多顺反子载体的有效工具。
张俨
李振海
关键词:
基因治疗
IRES
attB位点核心区定点突变对φC31整合酶效率的影响
2013年
目的考察attB位点核心区碱基突变对φC31整合酶存真核细胞中催化目的基网整合效率的影响。方法选取attB位点核心区中可能对中c31整合酶效率产生影响的碱基,设计含有相应位点突变的引物,采用大引物法两轮PCR扩增得到含突变碱基的attB片段,将其连人含报告基因的载体pEGFP。NI中得到pEGFP—NI—attB。以含野生型attB位点的报告基因载体pEGFP-N1-attB作为对照.将上述载体分别与中φC31整合酶表达质粒共转染HeLa细胞,经过药物筛选、染色、细胞克隆计数后,计算并比较整合效率。结果成功完成9个含有突变碱基attB位点及报告基因载体的构建。酶切及测序鉴定结果显示每个质粒含1或2个突变碱基。其中6个质粒为目标碱基突变,3个为PCR过程中随机产生的非预期突变。细胞实验结果表明,3个含有突变attB报告质粒的整合率与野生型attB相比无显著性差异,其余6个突变attB报告质粒的整合率与野生型attB相比显著降低(P〈0.05),尤其是其中两个attB位点中含有2个碱基突变的报告质粒,整合率降低极为显著(P〈0.001)。结论attB位点核心区碱基保守性较强,其中一些关键位点的突变使得整合酶效率降低。
李振海
谢飞
马晴雯
关键词:
点突变
ФC31整合酶系统在基因治疗中的应用
被引量:1
2012年
基因治疗是一种极具应用前景的疾病治疗方法。作为一种非病毒载体系统,ФC31整合酶系统凭借其高效性、位点特异性与低毒性的特点,在基因治疗的应用中具有无可比拟的优势。ФC31整合酶可以介导治疗基因整合到靶细胞基因组并稳定、长期表达,目前已经在多种组织和器官的体内、离体研究中取得成功。文章着重阐述ФC31整合酶的作用机制、应用实例及优缺点,并评估了其安全性。
李振海
马晴雯
关键词:
基因治疗
安全性
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