李秀兰
- 作品数：34 被引量：101H指数：7
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 淡色库蚊细胞色素P450基因研究被引量：8
- 2001年
- 采用一对昆虫细胞色素P45 0简并引物 ,以反转录 聚合酶链反应从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感品系和抗性品系成虫RNA扩增到约 485bp和 5 10bp两个片段 ,将这两个片段与PinPointTMXa 1T质粒重组 ,然后克隆至大肠杆菌JM 10 9菌株 ,筛选获得 6 8个阳性克隆 ;其中 2 4个阳性克隆测序后与GenBank资料对照 ,显示为细胞色素P45 0新序列 ;分子系统学研究显示 ,2 4个新基因 (等位基因 )分别属CYP4家族CYP4C、CYP4D、CYP4H和CYP4J等 4个亚家族 ,其已由细胞色素P45 0命名委员会命名和GenBank登录上网 ;其中CYP4C2 3可能是一个假基因 ,CYP4H13具有一段 5 8个碱基长度的内含子 ,CYP4J4V1在近 3′端具有一个终止密码子TAG .
- 朱昌亮李建民高晓红田海生李秀兰沈波吴观陵
- 关键词：淡色库蚊细胞色素P450反转录-聚合酶链反应基因克隆
- 人体寄生虫学教学改革的几点体会
- 2006年
- 随着寄生虫病在我国人群中分布和数量的改变,以及寄生虫学课时数的减少,网络及多媒体技术的应用,人体寄生虫学的教学内容和方法也必需进行相应的调整。本文介绍了近几年来我们在调整教学内容,改进教学方法方面所进行的一点尝试。
- 李秀兰
- 关键词：人体寄生虫学教学内容教学方法
- 蚊抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的建立抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗药性品系cD NA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的糜蛋白酶基因编码区;经T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到真核表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载体pIE13/chy,经酶切和PCR鉴定后,与带有筛选标记的pIE1neo质粒共转染蚊细胞C6/36,通过G418选择培养,建立转染细胞系;用RT PCR、Westernblotting鉴定糜蛋白酶基因的转录表达。结果成功构建了真核表达载体pIE13/chy,证明糜蛋白酶基因已转入C6/36细胞,建立了稳定转染细胞系,表达产物分子质量单位约30ku,与理论值相符。结论稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究糜蛋白酶基因与抗药性的关系奠定了基础。
- 顾燕公茂庆胡小邦孙艳马磊李秀兰朱昌亮
- 关键词：抗药性基因转染C6/36细胞
- 外源性双链RNA在蚊虫细胞中介导的基因沉默(英文)被引量：1
- 2004年
- 目的 近年来 ,双链RNA介导的基因沉默 (RNA干扰 )已在许多动植物中发现 ,并成为研究基因功能的强有力的工具。为确定蚊虫细胞中是否有RNA干扰现象 ,以期为利用RNAi效应消除蚊虫抗药性研究奠定基础。 方法 设计 5′端带T7启动子的绿色荧光蛋白 (GFP)及糜蛋白酶特异性引物 ,PCR扩增目的基因获得 5′端带有T7启动子DNA片段 ,体外转录成单链RNA ,退火后形成双链RNA。转染带有GFP基因的昆虫细胞表达载体 pAct .GFP和双链RNA进入C6/ 3 6蚊虫细胞 ,72h后收集细胞 ,用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达差异 ,用半定量RT PCR检测GFP的mRNA的表达水平。 结果 转染糜蛋白酶基因双链RNA和 pAct .GFP质粒的细胞及仅转染pAct .GFP的细胞的GFP表达水平没有明显差异 ;转染GFP基因的双链RNA和pAct .GFP质粒的细胞的GFP表达水平显著下降 ,达 40 %～ 5 0 % ,GFP的mRNA的表达水平也相应下降了 60 %。 结论在蚊虫细胞内 ,双链RNA能特异性的抑制相应的同源性基因的表达 ,引起基因沉默 。
- 公茂庆顾燕马磊李秀兰胡小邦孙艳孙立新孙静钱瑾朱昌亮
- 关键词：白纹伊蚊RNA干扰基因沉默C6/36细胞
- 淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性品系cDNA表达文库的构建和初步鉴定被引量：6
- 2001年
- 目的 构建淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性品系cDNA表达文库。方法 应用定向克隆技术将相应cDNA片段插入λExCell/NotⅠ /EcoRⅠ /CIP载体的NotⅠ和EcoRⅠ双酶切位点 ;并用PCR对插入片段大小进行分析。结果 获得含 4.72×10 5个重组子的cDNA表达文库 ,重组率为 10 0 % ,插入片段大小平均约 1.1kb。结论 所建文库容量及插入片段大小适合进一步研究。
- 田海生李秀兰马磊沈波朱昌亮
- 关键词：淡色库蚊抗药性CDNA表达文库
- 用抑制性差减杂交法和基因芯片鉴定蚊虫抗药性和敏感性相关基因被引量：6
- 2000年
- 田海生朱昌亮李秀兰马磊高晓红吴观陵
- 关键词：淡色库蚊抗药性基因克隆抑制性差减杂交
- 两个标准化cDNA差减文库的构建被引量：8
- 2001年
- 目的 构建 2个标准化 c DNA差减文库。方法 以淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性品系为Tester、敏感性品系为 Driver,进行正向抑制性差减杂交 ;以敏感品系为 Tester、抗性品系为 Driver,进行反向抑制性差减杂交。分别将获取的 2组抑制性差减杂交产物克隆入质粒表达载体 (Pin-Point TMXa- 1T- Vector) ,并以 PCR扩增鉴定插入片段。结果 获得 2个标准化 c DNA差减文库 ,其中抗性相关基因 (抗性品系高表达或特异表达 )文库含 5 2 3个重组子 ,敏感相关基因 (敏感品系高表达或特异表达 )文库含 2 86个重组子。插入片段大小平均约 36 0 bp。结论 所建的
- 田海生马磊李秀兰朱昌亮
- 关键词：淡色库蚊抑制性差减杂交
- 新的蚊抗药性基因研究
- 朱昌亮马磊孙艳张东辉沈波李秀兰公茂庆孙立新胡小邦杨庆贵
- 1992年以来，本项目在15项国家及部、省级项目资助下，在病媒昆虫（简称“媒介”）对杀虫剂（农药）的抗性基因克隆、鉴定与应用等方面取得了如下成果。 1. 高纯抗性品系模型的建立 率先选育、建立了淡色库蚊对溴氰菊酯高纯抗性...
- 关键词：
- 关键词：抗药性基因
- 淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性和敏感性相关基因克隆和序列分析被引量：16
- 2001年
- 目的 获取淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性和敏感性相关基因。 方法 通过正、反向抑制性差减杂交获取对溴氰菊酯抗药性和敏感性淡色库蚊的差异表达基因 ,并以基因芯片和逆 Northern对所获基因进行杂交鉴定。 结果 正、反向抑制性差减杂交各获得 5 2 3和 2 86个克隆 ,经芯片鉴定后在抗性品系高表达的基因分别有15 5个 (2～ 3倍 )和 42个 (3倍以上 ) ,在敏感品系中高表达的基因分别有 15个 (2～ 3倍 )和 9个 (3倍以上 )。对 3倍以上差异表达和特异表达基因进行单向测序 ,根据最高同源性比对结果 ,线粒体 r RNA基因、6 0 S核糖体蛋白基因、40 S核糖体蛋白 S4基因、胰蛋白酶前体基因、糜蛋白酶 A前体基因、视蛋白基因等在抗性品系中高表达 ;而 40 S核糖体蛋白 S2 9基因和肌球蛋白调控轻链 2在敏感品系中高表达 ;另外 ,1,4- α-葡聚糖分支酶和核糖体蛋白 46基因在抗性品系中特异表达。 结论 所获得的 13个差异表达基因和
- 田海生朱昌亮高晓红马磊沈波李秀兰吴观陵
- 关键词：淡色库蚊基因克隆抑制性差减杂交基因芯片
- 淡色库蚊细胞色素P450 CYP4E2r6基因的克隆、表达及鉴定被引量：7
- 2005年
- 目的克隆并表达鉴定淡色库蚊细胞色素P450(CYP4E2r6)基因。方法根据昆虫细胞色素P450氨基酸保守序列设计一对简并引物,采用RT-PCR,从淡色库蚊四龄幼虫mRNA中扩增出目的基因片段。产物经T-A克隆、测序、比对,在抗性品系高表达的CYP4E2r6亚克隆入原核表达载体pGEX-6P1,在大肠杆菌BL21中进行原核表达,将细菌总蛋白进行SDS-PAGE及Westernblot鉴定。结果14个阳性克隆中9个为CYP4新序列,由GenBank登录上网(GenBank/NCBICB074944-51、CB270837,2003年);经鉴定属CYP4家族CYP4H、CYP4E、CYP4J亚家族;CYP4E2r6基因已成功表达。结论获得的CYP4E2r6融合表达蛋白为进一步研究CYP4基因与抗药性之间的关系奠定基础。
- 李秀兰滕达孙艳马磊朱昌亮
- 关键词：淡色库蚊细胞色素P450原核表达
