李铁
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
- 供职机构：北京师范大学生命科学学院细胞生物学研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 内源性PS1在活体HEK293和HeLa细胞膜上的定位
- 2012年
- 目的检测内源性PS1在活体细胞膜上的定位及其表达。方法为防止细胞固定及通透使胞膜被破坏,在未经固定和通透的活体细胞上利用PS1抗体,通过间接免疫荧光法观察了内源性PS1在活细胞膜外表面的定位和表达;利用分子标签技术,构建GFP-PS1融合蛋白,瞬时转染细胞,检测到外源性PS1在细胞核膜的定位及在胞质中的少量分布;同时利用PS1抗体,将细胞固定及通透,用间接免疫荧光技术,检测到内源性PS1在细胞核膜中的定位及在细胞质中的少量不均匀分布。结果内源性PS1在定位于亚细胞结构的膜同时,也定位于细胞外膜。结论成功地在活体细胞外膜上检测到内源性PS1。
- 宁丽峰王慧萍李铁桑建利李佳慧
- 关键词：早老素1基因活体细胞
- 鼠PS1-GFP融合蛋白表达载体的构建研究
- 2005年
- Presenilin1(PS1)的突变是早发家族性老年痴呆发生的重要因素之一。目前对于PS1结构和功能的研究表明,PS1作为一种多次跨膜并具有γ-secretase活性的蛋白酶,很可能参与众多的细胞信号传导通路,影响细胞分化和调亡、组织及个体的发育等等。但对于PS1的精细结构和功能目前了解甚少,为探讨PS1的精细结构和功能,本研究构建了鼠PS1-GFP融合蛋白表达载体。方法:我们设计了扩增PS1的cDNA全长的引物,以C57BL/6小鼠9天胚的RNA为模板,利用RT-PCR的方法从C57BL/6小鼠9天胚中获得PS1的cDNA,经测序确认后,将其克隆到pMD18-TVector中。设计引物:上游5’-GCCGAATTCTATGACAGAGATACCTGCACC-3’;下游5’-GAAGGATCCGATATAAAACTGATGGAATGC-3’,上游含有EcoRI酶切位点,下游含有BamHI酶切位点。利用高保真DNA聚合酶通过PCR方法将pMD18-T-PS1质粒中的PS1基因亚克隆到pEGFP-C1载体中,获得pEGFP-C1-PS1融合蛋白表达载体,然后利用EcoRI和BamHI从pEGFP-C1-PS1融合蛋白中切下PS1基因,从pMD18-T-PS1质粒中切下载体部分,经过连接,获得中间载体,利用该重组载体中的EcoRI和SalI酶切位点,酶切连接入pEGFP-N2载体中,获得pEGFP-N2-PS1融合蛋白表达载体,经测序鉴定后备用。
- 李佳慧李铁桑建利
- 关键词：绿色荧光蛋白融合蛋白小鼠
- PS1/GFP融合蛋白对PS1的亚细胞定位的初步研究被引量：3
- 2006年
- PS1基因突变与早发家族性老年痴呆有密切联系。构建pEGFP-C1-PS1以及pEGFP-N2-PS1融合基因表达载体,于HEK293和CHO细胞系中表达PS1/GFP融合蛋白,以GFP绿色荧光作为PS1的亚细胞定位信号,通过SPOTII以及CONFOCAL显微镜进行观察,初步获得PS1全长蛋白在细胞中定位的部分信息,即PS1定位于细胞核膜,细胞质内有不均匀的分布,少量存在于细胞-细胞接触处的细胞膜上。
- 李铁李佳慧宁丽峰桑建利
- 关键词：GFP细胞定位阿尔茨海默氏病
- 鼠PS1—GFP融合蛋白表达载体的构建研究
- Presenilin 1（PS1）的突变是早发家族性老年痴呆发生的重要因素之一。目前对于PS1结构和功能的研究表明,PS1作为一种多次跨膜并具有γ-secretase活性的蛋白酶,很可能参与众多的细胞信号传导通路,影响细...
- 李佳慧李铁桑建利
- 关键词：绿色荧光蛋白融合蛋白小鼠
- 文献传递
- PS1基因真核表达载体的构建与鉴定
- 2011年
- 目的构建PS1基因真核表达载体,为PS1基因功能研究提供工具。方法从C57BL/6小鼠不同胚胎中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链反应扩增PS1基因编码区,将其克隆入pMD18-T载体中。通过聚合酶链反应,酶切和DNA测序鉴定。结果 PS1在9日龄小鼠胚胎的cDNA中高表达。测序显示融合基因GFP-PS1和PS1-GFP中PS1为全长PS1编码序列。Western blot检测显示融合蛋白GFP-PS1与PS1-GFP的相对分子质量均为77 kD左右。结论成功地构建了PS1基因真核表达载体。
- 宁丽峰王慧萍李铁桑建利李佳慧
- 关键词：早老素1基因小鼠胚胎基因克隆真核表达
