杜卫华
- 作品数：227 被引量：498H指数：11
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 一种同时进行牛囊胚差异染色和凋亡染色的方法被引量：2
- 2015年
- 旨在优化双重荧光染色方法的基础上,建立囊胚的三重免疫荧光染色方法,以期更经济、高效、准确地评估胚胎质量。三重免疫荧光染色方法分别用CDX2蛋白、caspase-3蛋白和Hochest 33342标记囊胚的滋养层细胞、凋亡细胞和所有细胞的细胞核,共3种染色方案。双重荧光染色方法采用PI染色滋养层细胞,或通过TUNEL法进行凋亡细胞染色;而囊胚细胞的细胞核用Hochest33342染色。结果表明,三重免疫荧光染色方法获得的图像清晰,能准确地标记囊胚中的各类细胞。另外,比较3种染色方案的准确性、复杂性及染色效果,确定两种一抗或两种二抗共同孵育的方案准确度高、效果好、且用时最短,为最佳染色方案。综上表明,在同一枚囊胚中,通过标记CDX2和caspase-3蛋白来鉴定其滋养层细胞和凋亡细胞,并进行囊胚质量的评估是可行的,而且较双重荧光染色有较大的优势。
- 孙尉峻于学颖胡庭溪郭芹芹刘岩郝海生赵学明朱化彬杜卫华
- 关键词：CDX2CASPASE-3
- 第一次减数分裂期小鼠卵母细胞的化学去核被引量：6
- 2004年
- 通过免疫荧光染色法确定了小鼠第一次减数分裂的进程 ,在此基础上分别用脱羧秋水仙碱和放线菌酮处理成熟培养的小鼠卵母细胞 ,抑制其纺锤体极间微管的延长和降低成熟促进因子的浓度 ,使其核物质随极体全部排出 .结果表明 :(1)卵母细胞从有腔卵泡中分离时处于生发泡期 ,可见核仁 ;成熟 2h内则全部发生生发泡破裂 ;培养 5h ,90 %到达第一次减数分裂的前中期 ;培养 8h ,则 33.3%处于中期 ;71.4 %的细胞在成熟 12h后发育为后期 ;第二次减数分裂的中期则于成熟培养 15h发生 .(2 )于成熟的不同时间取卵母细胞 卵丘细胞复合体进行去核处理后发现 ,体外成熟培养 5h(即卵母细胞处于第一次减数分裂前中期时进行处理 ) ,其去核率最高 ,达85 .6 % ;成熟 5h之前各组随成熟培养时间的延长而去核率升高 ,之后各组则降低 .(3)比较卵母细胞 卵丘细胞复合体与自然裸卵去核率 ,后者效率为 5 6 % ,显著低于前者 (p <0 .0 5 ) ,因此该方法在卵母细胞 卵丘细胞复合体的完全去核率与传统的物理去核方法相当 .
- 杜卫华李世杰李彦欣戴蕴平王莉莉王美丽郑敏李宁
- 关键词：卵丘细胞放线菌酮减数分裂有腔卵泡
- siRNA介导Sry基因沉默对小鼠胚胎性别决定基因表达的影响被引量：1
- 2008年
- 为研究Sry基因的调控网络,采用siRNA表达载体介导的RNAi技术,特异性地抑制睾丸决定因子Sry在小鼠胚胎中的表达,并观察Sry基因沉默后对在两性性腺分化中起重要作用的Wt1,Sf1,Dax1,Gata4,Sox9及Amh基因表达的影响。利用本课题组先前构建的siRNA重组表达载体(pSilencer4.1/Sry217及pSilencer4.1/Sry565),通过尾静脉注射法导入妊娠9.5天(9.5dpc)的母鼠体内,在11.5dpc时取胚胎,对性别鉴定为雄性的胚胎以RT-PCR法和Western-blot检测Sry基因的表达抑制效果,并同时用定量PCR法检测Wt1等上述性别决定相关基因表达变化情况。结果表明,注射干扰质粒后48hSry基因的mRNA和蛋白表达水平均降低,其中siRNA表达质粒pSilencer4.1/Sry565的抑制效果显著,可达到80%的抑制率。Sry基因沉默后,Wt1基因表达量显著升高;Sf1,Dax1,Gata4,Sox9基因表达水平没有明显变化;Amh基因无表达。试验结果表明,Sry基因表达抑制会导致Wt1基因表达升高;另外,Sry基因激活Sox9基因的表达可能需要其他的辅助因子协同作用。
- 吴宁林秀坤廖冰杜卫华韩凤桐赵金红
- 关键词：SRY尾静脉注射性别决定基因
- 细胞抽提物诱导的体细胞重编程被引量：1
- 2013年
- 体细胞重编程是指在特定条件下将已分化的体细胞去分化逆转回原始多能状态或转分化为其他类型细胞。目前诱导体细胞重编程的方法主要有:体细胞核移植、细胞融合、特定转录因子转染、细胞抽提物诱导等。近年来抽提物诱导体细胞重编程越来越受到研究者的关注。利用此法,通过重编程不仅可以获得需要类型的细胞,而且方便识别与重编程有关的细胞因子,探求重编程的机制。文章简略概述诱导体细胞重编程的方法,并重点阐述细胞抽提物诱导体细胞重编程的研究进展。
- 范宗兴朱化彬杜卫华
- 关键词：抽提物重编程体细胞核移植
- 基于液质联用技术定量分析牛体外受精胚胎中谷胱甘肽含量被引量：1
- 2018年
- 旨在为探索外源谷胱甘肽(glutathione,GSH)影响胚胎发育的机制提供研究方法。将牛体外受精胚胎分别置于含GSH(3 mmol·L^(-1),处理组)和不含GSH(对照组)的培养液中培养7 d,统计两组胚胎的卵裂率、桑椹胚率、囊胚率和囊胚总细胞数;并分别采用荧光染色法和液质联用技术(liquid chromatography mass spectrometry,LC/MS)对不同发育阶段的牛受精卵(受精后8、18、24、32 h)中GSH进行定量和跟踪分析,同时分析其中氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的含量。另外,在受精卵培养液中添加GSH的同位素标记物(GSX),利用LC/MS检测受精卵及其培养液中GSX含量。结果表明:1)外源GSH可显著或极显著降低受精后18、24、32 h胚胎内ROS的含量(P <0. 05,P <0. 01)。2)处理组胚胎的桑椹胚率(58. 67%vs. 48. 46%)、囊胚率(50. 83%vs. 34. 88%)和囊胚总细胞数(102. 26 vs. 76. 27)显著高于对照组(P <0. 05)。3)各发育阶段(受精后18、24、32 h)的处理组受精卵中,GSH的含量均显著高于对照组(P <0. 05),且随发育进程而逐渐下降。4)外源GSX也显著提高了处理组受精卵(受精后18、24、32 h)中GSH含量(P <0. 05),培养液中GSX的浓度则随培养时间的延长而持续下降。综上表明,外源GSH可清除胚胎内ROS,提高胚胎发育率和囊胚质量; LC/MS是定量分析胚胎内GSH及其同位素标记物的可靠方法,可用于外源GSH促进胚胎体外发育的机制研究。
- 李凤崔立欣郝海生刘岩赵学明庞云渭朱化彬杜卫华
- 关键词：胚胎发育谷胱甘肽氧自由基液质联用
- 采用2D电泳初步进行牛精子蛋白分离研究
- 为了建立牛精子蛋白的分离技术路线,对牛精子细胞裂解方法、双向电泳条件等进行了摸索,结果发现采用尿素-盐酸胍两步裂解法裂解精子细胞制备蛋白,并使用13cm非线性胶条进行蛋白二维电泳,能取得较好的实验结果。图谱经二维电泳软件...
- 王栋沙里金朱化彬程金华王振玲郝海生杜卫华张营霞
- 关键词：精子双向电泳
- 文献传递
- 家畜卵母细胞和胚胎去脂方法研究进展
- 2023年
- 卵母细胞和胚胎冷冻技术可与超数排卵和胚胎移植等繁殖技术相结合,打破生理、地区和时间对母畜繁殖潜力的限制,对国际种源流通、优良家畜扩繁和濒危动物种质资源保存具有重要意义。然而,卵母细胞和胚胎中丰富的脂质在降温过程中容易引起膜结构损伤、内质网和线粒体损伤、脂质过氧化,降低其解冻后发育能力,这极大地限制了冷冻卵母细胞和胚胎的应用。众多研究表明,在冷冻前降低卵母细胞和胚胎的脂质含量有利于提高其解冻后的存活率、囊胚率和妊娠率。目前,常用的降脂方法包括3种,即离心极化脂滴后通过显微操作去除脂滴、添加化学物质促进脂质代谢以及通过调控脂质代谢相关基因的表达降低脂质含量。作者简要阐述了过高的脂质含量引起卵母细胞和胚胎冷冻损伤的机制,总结了离心去脂法与化学去脂法的原理、应用效果以及局限性,并探讨了通过调控脂质代谢相关基因的表达从而去脂的可能性,以期为开发更稳定的卵母细胞和胚胎冷冻技术提供一定的参考。
- 徐茜杨宇泽郝海生杜卫华朱化彬杨柏高赵学明
- 关键词：卵母细胞胚胎去脂
- 影响卵母细胞胞浆内单精子注射效率的精子相关因素
- 2009年
- 卵母细胞胞浆内单精子注射(ICSI)技术作为辅助受精的一种手段,自从出现以来,就显示出广泛的应用前景。ICSI将体外受精和胚胎的显微操作技术相结合,大大降低对精子质量的要求,在畜牧业生产实践和哺乳动物生殖生理的基础研究中都有着十分重要的意义。然而,ICSI过程中的每一个环节都可能影响到其效果,最主要和最根本的影响因素是精子和卵子本身的状态。论文就精子有关方面的因素,简要综述了精子顶体与核周鞘、细胞骨架与中心粒、DTT处理和卵母细胞激活因子(SOAF)等对ICSI的影响。
- 庞云渭杜卫华郝海生王栋朱化彬
- 奶水牛发情标记物的研究进展
- 2023年
- 水牛是我国产奶畜种之一,其适应能力强,耐高温高湿、耐粗饲,其奶营养丰富,经济价值高,被誉为“奶中之王”。然而,奶水牛性成熟晚、发情症状不明显,且其发情易受环境因素影响,导致其繁殖效率低下,从而在生产中造成人力浪费和经济损失。因此,掌握有效的奶水牛发情鉴定技术进而确定最佳配种时间对奶水牛生产具有重要意义。本文参考国内外相关报道,简要总结了奶水牛各发情阶段的人工和自动化鉴定方法及其优缺点,回顾了通过血液、尿液、唾液、宫颈阴道液(cervical-vaginal fluid,CVF)以及粪便等物质鉴定奶水牛发情的相关研究,探讨了利用组学技术开发新的奶水牛发情鉴定方法的可能性,旨在为开发奶水牛发情鉴定新方法提供一定参考。
- 余洲杨柏高张航徐茜张培培冯肖艺曹建华牛一凡杜卫华郝海生朱化彬阿布力孜·吾斯曼赵学明
- 关键词：奶水牛发情鉴定唾液繁殖性能
- 哺乳动物GV期卵母细胞玻璃化冷冻研究进展被引量：2
- 2020年
- 哺乳动物GV期卵母细胞的玻璃化冷冻保存技术为家畜胚胎生物技术提供了卵子库,有利于濒危动物和珍稀野生动物遗传资源的长期保存,是维持物种多样性乃至人类生殖力保存的重要途径。至今,玻璃化冷冻技术已成功用于多种哺乳动物GV期卵母细胞的冷冻保存。与此同时,玻璃化冷冻会对GV期卵母细胞产生的细胞学损伤及表观遗传的影响,成为制约其应用潜力的关键瓶颈。本文综述了近年来哺乳动物GV期卵母细胞玻璃化冷冻的研究进展,并对冷冻损伤及对策进行了系统分析,为哺乳动物GV期卵母细胞玻璃化冷冻的后续研究提供参考。
- 张培培郝海生杜卫华庞云渭权国波赵善江朱化彬赵学明
- 关键词：哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻
