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重组人ADAM15去整合素区域蛋白与人血清白蛋白融合蛋白的表达及其活性被引量：1: 2013年; 目的在毕赤酵母中表达重组人ADAM15去整合素区域蛋白(recombinant human disintegrin of ADAM15,rhddADAM15)与人血清白蛋白融合蛋白(HSA-rhddADAM15-His),并测定其活性。方法以rhddADAM15基因为模板,PCR扩增rhddADAM15-His基因,克隆入pBluescript-HSA质粒中,经酶切后与pPIC9k载体连接,构建重组表达质粒pPIC9k-HSA-rhddADAM15-His,将重组表达质粒转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达。表达产物经Blue-Sepharose、Ni2+螯合层析及DEAE阴离子交换层析纯化,纯化产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,利用划痕及SRB法检测其活性。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;融合蛋白HSA-rhddADAM15-His相对分子质量约76 000,以可溶性分子形式存在于发酵液上清中;纯化的融合蛋白纯度约为75%,可与兔抗rhddADAM15多克隆抗体特异性结合;融合蛋白对小鼠黑色素瘤细胞B16的迁移具有明显的抑制作用,但对其增殖无明显抑制作用。结论成功在毕赤酵母GS115中表达并纯化了HSA-rhddADAM15-His蛋白,为其作用机理的研究奠定了基础。; 侯颖储敏杜芳芳戴惠云陈蕴金坚; 关键词：人血清白蛋白融合蛋白毕赤酵母

重组人ADAM15去整合素区域蛋白抑制肿瘤细胞增殖作用的研究: 2014年; 观察重组人ADAM15去整合素区域蛋白干预肿瘤细胞增殖效应,为研究其作用机制提供基础。采用SRB法筛选重组人ADAM15去整合素区域蛋白敏感肿瘤细胞,分析其剂量依赖关系。利用流式细胞仪分析重组人ADAM15对肿瘤细胞周期的影响,并利用DAPI染色检测其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。重组人ADAM15去整合素区域蛋白对于观察的8种肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用,其中人宫颈癌细胞Hela及野生型乳腺癌细胞MCF-7最为敏感,IC50分别为2.97,2.90μmol/L,当其浓度低于8μmol/L时,细胞增殖抑制率与蛋白浓度呈剂量依赖关系。选择Hela细胞进行周期检测发现,重组人ADAM15去整合素区域蛋白浓度高于2μmol/L时,Hela细胞周期开始出现S期阻滞,G2/M期含量下降,并出现核凋亡现象。当蛋白干预浓度达6μmol/L时,(53.57±1.43)%的Hela细胞出现凋亡。重组人ADAM15去整合素区域蛋白通过阻滞细胞分裂和诱导凋亡抑制肿瘤细胞的增殖。; 侯颖储敏杜芳芳王晓敏陈蕴金坚; 关键词：去整合素增殖细胞周期凋亡

重组人ADAM15去整合素区域蛋白抑制HeLa细胞的增殖及迁移被引量：1: 2014年; 观察重组人ADAM15去整合素区域蛋白(记做rhdd ADAM15)干预He La细胞在体内外的增殖及迁移效应,初步鉴定了其作用的相关通路,为研究其作用机制提供基础。利用SRB法及划痕法测得rhdd ADAM15对He La体外的增殖及迁移均有明显的抑制作用,IC50分别为2.44、1.60μmol/L,当其浓度低于8μmol/L时,细胞增殖及迁移抑制率与蛋白质浓度呈剂量依赖关系;利用瞬时转染法在He La细胞内过表达rhdd ADAM15,致使He La细胞的迁移能力下降,细胞周期出现S期阻滞,阻滞率约为5%;SRB法表明,MAPK通路激动剂EGF可以逆转rhdd ADAM抑制He La细胞增殖的效应;利用斑马鱼肿瘤移植模型,观察得到rhdd ADAM15对斑马鱼体内He La细胞生长及转移均有明显的抑制作用。以上结果表明,rhdd ADAM15可抑制He La细胞体内外的增殖及迁移,这种抑制作用与MAPK信号通路密切相关,作用靶点在细胞外及细胞内均有分布。; 侯颖储敏蔡燕飞杜芳芳王晓敏陈蕴金坚; 关键词：去整合素迁移 MAPK 斑马鱼

PI3K抑制剂LY294002抑制人卵巢癌耐紫杉醇细胞的增殖与迁移被引量：6: 2013年; 卵巢癌是妇女常见的恶性肿瘤之一，严重威胁女性的生命健康。紫杉醇作为临床化疗的一线用药，目前在卵巢癌的治疗中发挥重要作用。但是，大多数卵巢癌患者出现耐药和转移，这给治疗造成很大障碍。研究表明，磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol3-kinase，P13K）信号通路在多种肿瘤中被激活，这可促进肿瘤细胞的生长、增殖，抑制细胞凋亡，促进血管生成，引起肿瘤的侵润与转移，增强对化疗药物的抵抗能力。; 杜芳芳刘艳君姜丽马鑫金坚; 关键词：卵巢癌迁移 PI3K LY294002 紫杉醇

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杜芳芳