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杨启修: 作品数：26 被引量：28H指数：3; 供职机构：上海市血液中心更多>>; 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>

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抗人HLA抗体高通量固相化筛查方法的建立: 杨启修杨颖朱自严

选择性siRNA干扰FCGRⅡA影响THP-1吞噬调理红细胞被引量：1: 2020年; 为探讨能否通过小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)干扰影响巨噬细胞Fcγ受体介导的吞噬作用,采用FCGRⅡA siRNA转染佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)活化人单核细胞THP-1,并设NO-TARGET、GAPDH、no-siRNA(1640)为对照。培养48~72h后,用FCM分析CD14+细胞的CD32、CD32b分布,用CD14的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)值作为内参,得到CD32、CD32b相对MFI值;用Western blotting观察CD32a、CD32b的蛋白表达水平;进行单核细胞单层实验(monocyte monolayer assay,MMA),结合流式细胞术分析THP-1中能吞噬调理红细胞的吞噬百分比。采用配对t检验分析FCGRⅡA组与各对照组间的分布差异。Western blotting结果证实,FCGRⅡA组CD32a量明显减少(分别为NO-TARGET组、GAPDH组、1640组的22%、42%、31%),而CD32b不降低;FCM分析显示,FCGRⅡA组MFI CD32/CD14较NO-TARGET组、1640组、GAPDH组下降(P<0.05),而CD32b无明显减少;同时MMA结果显示,FCGRⅡA组吞噬细胞占比分别比NO-TARGET组、GAPDH组、1640组减少9.6%、9.2%和4.4%。提示siRNA选择性干扰可有效降低Fcγ受体CD32a表达,并降低PMA活化的THP-1吞噬能力,可作为潜在手段干扰输血反应所涉及的巨噬细胞吞噬作用。; 杨颖李勤张嘉敏赵俸涌杨启修叶璐夷朱自严; 关键词：THP-1 小干扰RNA

β-内酰胺类抗生素药物促进红细胞的老化清除可能会恶化药物诱发的免疫溶血性贫血被引量：2: 2022年; 目的通过体外实验检测药物处理红细胞前后,细胞表面各种与细胞衰老及清除相关指标,以及吞噬细胞对红细胞的吞噬差异性,分析β-内酰胺类抗生素对红细胞老化和清除的影响。方法使用β-内酰胺类抗生素(青霉素、头孢吡肟、头孢哌酮和头孢他啶)处理红细胞,然后在药物处理后0 h和24 h时通过流式细胞仪检测红细胞表面PS(磷脂酰丝氨酸)和清除相关CD标志物(CD35、CD47、CD55和CD59)的变化。通过显微镜观察,计算在药物处理后0 h和24 h棘细胞比例。通过单核细胞单层测定(MMA)检测药物处理后的红细胞被吞噬的情况。通过以上结果分析β-内酰胺类抗生素对红细胞老化和清除的影响。结果与未处理的红细胞相比,药物处理的红细胞在细胞表面显示出更高的PS水平(0 h vs 24 h:青霉素9.42%vs 93.30%、头孢吡肟3.88%vs 57.27%、头孢哌酮4.71%vs 75.75%和头孢他啶3.05%vs 43.19%,),以及棘细胞比率(0 h vs 24 h:青霉素7.33%vs 86%,头孢吡肟2.67%vs 52.67%,头孢哌酮3.33%vs 67.67%和头孢他啶3.33%vs 90.67%)。而清除相关的CD标志物,用药后明显降低:CD35为青霉素7.36%vs11.87%,头孢吡肟0.14%vs 28.51%,头孢哌酮11.85%vs 21.55%,头孢他啶7.63%vs 8.73%;CD47为青霉素1.22%vs 9.13%,头孢吡肟1.80%vs 0.86%,头孢哌酮0.08%vs 6.85%,头孢他啶1.54%vs 5.50%;CD55为青霉素14.46%vs 44.31%,头孢吡肟17.27%vs 38.41%,头孢哌酮19.28%vs 33.28%,头孢他啶14.62%vs 34.13%;CD59为青霉素4.71%vs 20.56%,头孢吡肟4.03%vs 7.60%,头孢哌酮5.91%vs 22.38%,头孢他啶5.93%vs 30.89%;药物处理的红细胞比未处理的红细胞更多地附着在单核细胞上。结论β-内酰胺类抗生素可诱导PS和清除相关CD标志物在红细胞表面的改变,并会导致细胞出嵴并使红细胞更容易被单核细胞吞噬。β-内酰胺类抗生素可促进红细胞老化和清除,这可能会使DIIHA恶化。; 杨启修赵俸涌李勤张嘉敏郭忠慧杨颖王晨朱自严; 关键词：Β-内酰胺类抗生素

miR-492在红细胞OK血型抗原表达调控中的作用被引量：1: 2017年; 目的探讨miR-492是否参与红细胞OK血型抗原表达的转录后调控。方法化学合成2个BSG基因3’UTR片段，分别包含BSGrs8259TT或BSGrs8259AA位点。合成时两端加上XhoI和NotI酶切位点，克隆至pUC57载体，随后构建至psiCHECK-2载体，测序验证。分别将不同浓度的miR-492mimic与构建的psiCHECK2-BSG-T或psiCHECK2-BSG-A重组质粒共转染K562细胞，设置空白对照，各转染实验重复3次。利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒测定海肾荧光素酶活性，并按萤火虫荧光素酶活性进行均一化处理，数据统计分析。结果测序结果显示，成功构建了分别包含BSGrs8259TT或BSGrs8259AA位点的重组psiCHECK-2质粒。双荧光素酶报告基因检测结果表明，miR-492mimic浓度大于100nmol／L时，对psiCHECK2-BSG-T有显著抑制作用。而mir-492mimic对psiCHECK-BSG-A无抑制作用。结论miR-492可能参与了调控BSGrs8259TT基因型个体红细胞0K抗原的表达。; 叶璐夷王晨杨启修朱自严

miR-492在红细胞OK血型抗原表达调控中的作用研究: 叶璐夷王晨杨启修来自严

M-CSF、GM-CSF诱导人源外周血单个核细胞来源巨噬细胞的不同极化和吞噬被引量：2: 2020年; 目的观察人源外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)在体外培养诱导单核巨噬细胞时是否因刺激剂M-CSF、GM-CSF的不同而造成极化状态差异,并衡量极化状态差异是否伴有吞噬能力的改变,并寻找可能相关的免疫表型标记。方法取健康献血员新鲜外周白膜血,分离获得PBMC后,每一份PBMC都分为MCSF、GMCSF组,分别对应M-CSF或GM-CSF作为诱导剂。培养d7时用诱导得到的单核巨噬细胞分别和致敏红细胞、未致敏红细胞、血小板(Plt)以及葡聚糖-40(dextran-40)共孵育,模拟MMA(单核细胞单层实验),利用流式细胞仪观察吞噬结果。同时用流式分析2组细胞的CD11C、CD14、CD15、CD16、DR、CD32、CD32b、CD49f、CD54、CD64、CD68、CD86、CD163等免疫表型。所有得到的结果进行配对t检验分析差异。结果 MCSF、GMCSF组CD14+CD16+细胞占比分别为(62.6±33.7)%vs(22.8±15.6)%,CD163+CD14+细胞(29.7±18.7 vs 0.64±0.42), CD14 MFI 3 829±2 091vs464±101,(P均<0.05)。同时MCSF组伴随CD64+(45.7±25)%vs(24.5±19)%、CD32b+(59.5±22.4)%vs(27.5±11.8)%细胞占比增高,CD32+、HLA-DR+细胞数虽然无明显变化,但其MFI分别较GMCSF组增高和降低(MFI CD32 1 093±380vs530±179;MFI DR 1 034±290vs1 661±367)。同时发现MCSF组具有较强的吞噬力,对被吞物的吞噬力多数为Plt> Dextran-40>致敏RBC>非致敏RBC。结论证实了人源PBMC诱导的单核巨噬细胞在体外培养时同一起源样品也可因M-CSF、GM-CSF而促成不同极化方向, M-CSF促进M2型极化, GM-CSF促进M1型极化,并由此影响对致敏红细胞、血小板(Plt)以及葡聚糖-40的吞噬能力,因此在临床使用M-CSF、GM-CSF时需注意单核巨噬细胞的极化方向,采取更有利于患者治疗和临床实验的制品。; 杨颖李勤郭忠慧杨启修张嘉敏赵俸涌王晨朱自严; 关键词：巨噬细胞 M2 M-CSF GM-CSF

PMA活化THP-1的巨噬细胞分化标记特征分析被引量：5: 2018年; 目的了解佛波酯-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯（PMA）分化的THP-1（人单核细胞白血病肿瘤细胞）上巨噬细胞标记特征,评估其作为人源巨噬细胞的替代品的可行性。方法用PMA诱导分化THP-1细胞72 h（活化组）,并同步分离随机健康O型献血者的新鲜外周血单个核细胞（PBMC）,其中一部分PBMC用人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）培养7 d（7 d PBMC）,而未处理的THP-1作为未活化组,分别用流式细胞仪分析这4组细胞的CD14、CD16、HLA-Ⅰ、HLA-DR等细胞表型,并分析Fc受体CD32、CD32b的组成;并用已知含人源HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗体、抗-E、健康献血者血浆各1份以及6种未确定抗体特异性但免疫血液学试验检出疑有不规则抗体的血浆与活化THP-1和新鲜PBMC细胞共培养,观察CD14、CD16、HLA-I、HLA-DR等变化;制备O型IgG致敏红细胞和非致敏红细胞,分别用活化THP-1和PBMC细胞与致敏、非致敏红细胞共培养,进行单核细胞单层试验（MMA）。结果观察到THP-1细胞未活化组为CD14~＋CD16^-,活化组为CD14~＋CD16^（＋d）,缺乏PBMC中CD14^-CD16~＋以及非经典CD14^（＋h） CD16~＋,后者在7 d PBMC中明显增加;未活化THP-1表达HLA-Ⅰ类、CD32分子,但HLA-Ⅱ类和CD32b较弱,在PMA刺激后这些抗原或标记分子均升高。发现活化THP-1细胞CD14、CD16分子可被人源性血浆吸附而致下降,而6例未确定抗体特异性的血浆有4例明显降低HLA-Ⅰ类表达。活化THP-1和PBMC均可成功作为单核细胞单层试验的反应细胞,诱导红细胞调理性吞噬。结论 THP-1可替代人单核巨噬细胞作为人源PBMC来源单核巨噬细胞的替代,细胞群落比较少;但是需要注意其与PBMC来源单核巨噬细胞的不同,并具有HLA抗原特异性,因此其应用范围可能比较局限。; 杨颖李勤张嘉敏赵俸涌杨启修叶璐夷朱自严; 关键词：THP-1 FC受体

重组SIRPα1的体外表达及其在红细胞CD47-SIRPα信号通路研究中的应用: 2018年; 目的获得野生型信号调节蛋白α1（SIRPα1）功能结构域重组蛋白,以用于研究正常或异常红细胞的吞噬和清除中CD47-SIRPα信号通路的作用。方法全基因合成人源野生型SIRPα1 IgV结构域编码区;将合成片段构建入携带组氨酸（His）标签的pET-21a大肠杆菌载体,获得重组表达载体。使用大肠杆菌BL21 （DE3）细胞体外表达重组SIRPα1,并通过亲和层析法纯化;利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定重组SIRPα1;采用基于ELISA的红细胞结合试验评估2名Rh缺失表型献血者与正常Rh表型个体对照在红细胞结合水平的差异;流式细胞术检测红细胞CD47表达;采用单因素方差分析对数据做统计分析。结果成功构建重组表达载体,纯化获得野生型重组SIRPα1。成功建立了基于ELISA的红细胞结合试验方法并应用于评估重组SIRPα1与红细胞的结合。伴随CD47表达量的明显降低,Rh缺失表型个体的红细胞和正常个体相比,其与重组SIRPα1的结合能力下降。结论 CD47-SIRPα信号通路可能在Rh缺失表型红细胞的清除中发挥了作用。; 叶璐夷杨启修夏荣伟荀春志赵俸涌张嘉敏李勤王晨向东朱自严; 关键词：重组蛋白体外表达

miR-492在红细胞OK血型抗原表达调控中的作用研究: 目的探讨miR492是否参与了红细胞OK血型抗原表达的转录后调控。方法化学合成2个BSG基因3’UTR片段,分别包含BSG rs 8259 TT或BSG rs 8259 AA位点。合成时两端加上XhoI和NotI酶切位点...; 叶璐夷王晨杨启修朱自严; 文献传递

人血液中血型抗体联合快速检测体系: 本发明涉及人血液中血型抗体联合快速检测体系，其由以下方法制备：配制血细胞悬液，加入U型孔中，静置15-30min，100-200×g离心2-3min，弃上清，用缓冲液洗涤后低温干燥48-72小时，所述的血细胞选自红细胞、...; 杨启修朱自严杨颖韩莎莎张嘉敏朱傲雪; 文献传递

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