杨青原
- 作品数：12 被引量：16H指数：3
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪CD163分子在PRRSV感染PAM细胞中的作用研究
- 目的 研究CD163分子在PRRSV感染PAM细胞中的作用.材料和方法 本试验用生物学软件分析猪CD163分子的结构，采用RT-PCR的方法将猪CD163分子胞外区分为四个片段进行扩增，并分别克隆到PET-32a原核表达...
- 冯亚琼杜东颖王冬梅崔春晓秦运杰李娜娜杨青原夏平安张改平
- 免疫复合物对猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的PAM细胞因子转录的影响被引量：5
- 2012年
- 本试验通过研究免疫复合物影响猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在巨噬细胞内增殖的因素,来进一步探讨免疫复合物经FcγR介导的PRRSV感染机制。本研究将含200TCID50PRRSV病毒液与等体积的终浓度为1.30mg·mL-1的猪IgG-兔抗猪IgG复合物分别先后和同时接种于PAM细胞,分别于12、24、36、48h收集细胞液,同时设PRRSV感染对照组、免疫复合物对照组和健康细胞对照组,利用建立的相对荧光定量PCR和绝对荧光定量PCR方法分别检测巨噬细胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA转录水平及PRRSV的RNA水平,并进行定量分析,同时采用ELISA方法检测健康细胞中IFN-α的蛋白水平。结果显示,在感染后12～36h期间,免疫复合物能够抑制PRRSV诱导的IFN-α的mRNA水平,TNF-αmRNA水平在感染后12h被促进,而在24～36h期间被抑制。在感染后48h,免疫复合物能促进IFN-α和TNF-α的mRNA水平,而在12～48h期间均能抑制IL-10的mRNA水平,此外,免疫复合物在感染12、24和36h时间段内均能明显促进病毒的增殖,但在48h后不显著。健康细胞中IFN-α的蛋白水平在培养12～48h之内呈"降-升-降"的趋势。结果表明,IFN-α蛋白的表达与其mRNA的转录不同步。在PRRSV感染初期,免疫复合物能抑制PRRSV诱导的抗病毒因子的mRNA水平,病毒的复制被促进,而在感染后期,抗病毒因子达到一定的浓度后发挥抗病毒作用,在一定程度上抑制病毒的复制。而TNF-α的转录规律不明显,表明免疫复合物可能同时与激活型和抑制型FcγR结合来共同调节PRRSV诱导的细胞因子的转录。
- 张宜娜李珂周永辉张继希杨青原慕春龙郭国富夏平安崔保安
- 关键词：PRRSV免疫复合物IFN-Α
- 猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备被引量：1
- 2013年
- 为了克隆表达猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域(IFN2EC)基因,试验采用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中扩增出猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的cDNA序列,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,并将阳性重组质粒转化BL21(DE3)菌株,IFN2EC重组蛋白得到高效表达.将融合蛋白IFNR2EC免疫BALB/C小鼠,获得鼠抗IFN2EC融合蛋白多克隆抗体,将得到的融合蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western-blotting试验方法检测.本研究成功构建重组表达质粒pET-IFNR2EC,ELISA测定多克隆抗体的效价为1∶12800,Western-blotting试验结果表明,制备的鼠抗IFNR2EC融合蛋白多克隆抗体可以与融合蛋白进行特异性结合,从而证明融合蛋白具有很好的免疫原性.
- 杨青原张军杰秦运杰王冬梅夏平安崔保安
- 关键词：克隆原核表达
- 激活型FcγRs在PRRSV感染中的作用
- 猪繁殖与呼吸综合征/(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS/)是由猪繁殖与呼吸综合征/(Porcine Reproductive and Respirato...
- 杨青原
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 文献传递
- 抗体在PRRSV感染PAM中的作用
- 目的：本试验通过研究IgG对PRRSV的增殖情况的影响,来探讨抗PRRSV特异性和PRRS非特异性抗体在PRRSV-ADE中的作用。方法：本研究分别将抗PRRS特异性IgG(2.64mg/ml)和非特异性IgG(2.63...
- 杨青原秦运杰王冬梅杜东颖夏平安杨明凡
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞感染免疫复合物基因工程抗体
- 文献传递
- 猪唾液素黏附素胞外区在PRRSV感染PAM细胞中的作用被引量：1
- 2015年
- 采用新的试验方法制备出纯度较高的抗猪Sn的鼠纯化IgG,并证实此种抗体可以阻碍PRRSV感染PAM,为研究猪Sn各结构域的作用提供参考,为进一步研究PRRSV侵入宿主的作用机制奠定基础。本试验分8个片段克隆猪Sn胞外区功能结构域（第2-17结构域）,并分别构建重组表达质粒,转化到BL21进行诱导表达。通过优化蛋白表达条件,制备其重组蛋白,将8种重组蛋白混匀后制成混合抗原（SnE）免疫小鼠以制备其多克隆抗体血清,用间接ELISA的方法检测高免血清的效价,分离并收集血清。采用硫酸铵盐析与DE-52离子交换层析相结合的方法提取并纯化血清,得到纯度较高的鼠抗猪SnE抗体。无菌灌冲猪肺脏收集原代PAM至24孔培养板中,培养6h后,用抗Sn150（第1结构域）、SnE和Sn150＋SnE等抗原的鼠纯化IgG以及鼠阴性IgG和PBS分别处理PAM,1h后用200CID50PRRSV感染PAM,分别在感染24、48h后用已建立的PRRSV实时荧光定量PCR方法检测感染细胞的病毒拷贝数。结果显示,PRRSV感染24h和48h时后,鼠抗猪Sn150抗体组的PRRSV mRNA拷贝数与阴性IgG组相比较均差异较小（P〉0.05）;而鼠抗猪SnE抗体和Sn150＋SnE混合抗体组的PRRSV mRNA拷贝数均显著低于对应的阴性IgG组,且鼠抗猪SnE抗体组24h和48h时PRRSV mRNA拷贝数分别是阴性IgG组的0.75倍（P〈0.001）和0.74倍（P〈0.001）,Sn150＋SnE混合抗体组24h和48h时的PRRSV mRNA拷贝数分别是阴性IgG的0.83倍（P〈0.01）和0.76倍（P〈0.001）。结果表明,鼠抗猪SnE抗体和Sn150＋SnE混合抗体封闭后PRRSV感染PAM的能力降低,且效果显著,提示PRRSV的吸附和内吞作用可能与pSn整个胞外区都有密切的关系。
- 秦运杰李娜娜王冬梅崔春晓冯亚琼杜东颖张莹莹杨青原杨明凡夏平安张改平
- 关键词：多克隆抗体PRRSV
- PRRSV感染PAM中猪FcγRⅢ介导的免疫抑制反应
- 为了研究猪FcγRⅢ介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)免疫抑制反应,本研究采用将含有200个TCID50的PR...
- 杨青原秦运杰王冬梅杜东颖夏平安杨明凡崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因复制
- 文献传递
- 抗体在PRRSV感染PAM中的作用
- (目的)本试验通过研究IgG对PRRSV的增殖情况的影响,来探讨抗PRRSV特异性和PRRS非特异性抗体在PRRSV-ADE中的作用。(方法)本研究分别将抗PRRS特异性IgG(2.64mg/ml)和非特异性IgG(2....
- 杨青原秦运杰王冬梅杜东颖夏平安杨明凡
- 关键词：PRRSV免疫复合物抗体PAM
- 文献传递
- 不同特性IgG促进PRRSV在PAM细胞中的增值作用被引量：4
- 2014年
- 本试验通过研究IgG对猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)增殖情况的影响,来探讨抗PRRSV特异性和PRRS非特异性抗体在PRRSV-ADE中的作用。分别将抗PRRS特异性IgG(2.64g/L)和非特异性IgG(2.63g/L)作倍比稀释,与等体积含200TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备成一系列的感染性免疫复合物(PRRSVIgG)和阴性抗体-病毒混合液(PRRSV+IgG),接种PAM细胞;同时将纯化的猪阴性IgG(2.63g/L)和兔抗猪IgG(2.64g/L l)等体积混合制备免疫复合物(IC),分别与等体积含200TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备成免疫复合物-病毒混合液(PRRSV+IC),接种PAM细胞。接种24h后,用实时荧光定量PCR方法检测PRRSV的mRNA水平。同样的方法,分别将2倍稀释的PRRSV-IgG,PRRSV+IgG和4倍稀释的PRRSV+IC接种PAM细胞,用实时荧光定量PCR方法分别检测感染12、24、36和48h后不同时间段内PRRSV的mRNA水平。结果显示,一定质量浓度的PRRS特异性亚中和水平抗体和非特异性抗体,在感染48h内均能极显著促进PRRSV在PAM细胞中增殖;而适当剂量的免疫复合物,在感染48h内也均能促进PRRSV在PAM细胞中增殖。结果表明,一定质量浓度的PRRS特异性亚中和水平抗体和非特异性抗体均能促进PRRSV在PAM细胞中增殖,但是不同特性的抗体对PRRSV的增殖能力存在着差异。
- 杨青原秦运杰张宜娜李珂王冬梅杜东颖夏平安
- 关键词：PRRSV免疫复合物抗体PAM
- 猪CD163分子在PRRSV感染PAM细胞中的作用研究被引量：6
- 2015年
- 目的研究CD163分子在PRRSV感染PAM细胞中的作用。方法生物学软件分析猪CD163分子的结构,将其胞外区分为4个片段进行扩增,分别克隆到PET-32a原核表达载体中构建4种重组表达质粒并获得4种融合蛋白,用这4种融合蛋白分别免疫小鼠制备多克隆抗体,经间接ELISA方法检测4种多抗克隆抗体效价分别为1∶10 240、1∶12 800、1∶25 600和1∶12 800。饱和硫酸铵盐析法和DE-52离子交换层析技术二步法提取并纯化得到4种纯度较高的特异性抗体。用制备的4种抗体以及4种抗体的混合物分别封闭PAM细胞1 h,经PRRSV感染24 h和48 h,用已建立的绝对荧光定量PCR方法检测感染细胞中PRRSV的m RNA水平,用Graph Pad Prism 5软件进行处理所得到的数据。结果鼠抗猪CD163-P3抗体能够阻碍PRRSV感染PAM细胞,提示CD163-P3(SRCR5-6)可能参与PRRSV感染PAM细胞过程,其他片段不影响PRRSV感染宿主过程。结论用本试验方法所制备和纯化的抗体具有生物学活性,且CD163在PRRSV感染宿主细胞过程中发挥作用,发挥功能作用的部分是CD163-P3(SRCR5-6)。
- 冯亚琼杜东颖王冬梅崔春晓秦运杰李娜娜杨青原夏平安张改平
- 关键词：多克隆抗体PRRSV
