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基于免疫磁珠富集粪便脱落细胞的大肠癌筛选法被引量：5: 2008年; 大肠癌是目前发病率、致死率均较高的恶性肿瘤,严重危害人民健康生活。现有的临床检测技术均存在一定的局限性,因而限制了其临床应用的范围。与常规临床大肠癌检测相比,粪便脱落细胞检测法具有高特异性、高灵敏性且容易被受试者接受等显著优点。作为最新型的脱落细胞检测法-免疫磁珠富集粪便脱落细胞检测法除具有一般脱落细胞检测法的优点外,还具有细胞回收效率高、肿瘤细胞特异性高等优点。本文阐述了脱落细胞检测大肠癌的原理和基本方法,着重介绍了免疫磁珠富集脱落细胞的原理和操作过程以及针对脱落细胞进行大肠癌检测的多种方法,并对全自动、快速、高通量的自动化脱落细胞检测仪器应用于脱落细胞检测进行了展望。; 梁超李丹滢周国华; 关键词：大肠癌脱落细胞免疫磁珠法

基于免疫磁珠法的自动化粪便脱落细胞提取仪的研制与应用: 2010年; 目的根据免疫磁珠法的原理设计研制自动化粪便脱落细胞提取仪，实现大肠癌脱落细胞的自动化富集。方法根据粪便组分、理化特性以及粪便脱落细胞分布特点，设计制造包括粪便样本采集装置、粪便样本预处理器、脱落细胞-免疫磁珠结合装置和脱落细胞-免疫磁珠复合物洗涤装置的自动化粪便脱落细胞提取仪。采用抗大肠癌特异表面抗原表皮细胞黏附分子（EpCAM）的单抗Ber-EP4包被至磁珠表面制备免疫磁珠，用于从细胞培养物中富集大肠癌细胞，并在显微镜下观察免疫磁珠与大肠癌细胞的结合效果。收集10例大肠癌患者的癌组织（或癌旁组织），并应用自动化粪便脱落细胞仪提取患者粪便样本的脱落细胞，应用实时荧光定量PCR检测癌组织（或癌旁组织）以及粪便样本的脱落细胞肿瘤相关基因c-myc、cox-2和CD44v6的表达，并对比两种不同来源的样本检出的3种基因的阳性表达率。结果设计制作了自动化粪便脱落细胞提取仪样机，并且结合自行制备包被特异抗体的免疫磁珠成功提取到直肠癌细胞，细胞回收率达27％。在10例癌组织或癌旁组织中，c-myc、cox-2、CD44v6基因的阳性表达率分别为20％、10％、20％，而在粪便脱落细胞中均为100％，差异有统计学意义（均P〈0．01）。自动粪便脱落细胞仪提取的患者粪便样本的脱落细胞为肿瘤细胞。结论利用免疫磁珠富集大肠癌脱落细胞是可行的，以此为依据制作的自动化脱落细胞提取仪可以用于临床大肠癌的早期筛查。; 梁超李传军邓黎莉周国华; 关键词：结直肠肿瘤粪便脱落细胞免疫磁珠法自动化装置

可视化等温扩增法快速筛查并分型禽流感病毒被引量：4: 2011年; 目的:建立一种通用筛查禽流感病毒及其3种亚型的快速核酸检测方法。方法:对20例已知样本扩增禽流感病毒共有的M基因上的一段保守序列快速筛查并确定是否为禽流感病毒,扩增禽流感病毒(H5N1,H7N7,H9N2)3种亚型特异性HA基因上一段序列鉴定禽流感病毒的基因型。采用环介导等温扩增法检测核酸,用肉眼观察双链嵌合染料SYBR Green I荧光显色信号强度。结果:3种禽流感病毒亚型的检测灵敏度均为10拷贝/管,3组引物间无非特异性扩增。18例阴性,2例阳性,准确性及特异性均为100%。结论:建立的核酸检测方法适合现场快速检测禽流感病毒及其3种亚型。; 初亚男成思佳梁超周国华; 关键词：禽流感病毒环介导等温扩增 H5N1亚型 H9N2亚型

高灵敏度等温扩增法可视化检测血液中的病毒核酸被引量：2: 2011年; 目的探讨便携式、可灵敏、快速检测血液标本中病毒核酸的方法。方法以HBV病毒为例,针对其基因组保守序列设计特异性引物,采用环介导等温扩增法(LAMP)对待测HBV标本做核酸目标序列扩增,以高灵敏双链DNA嵌合荧光染料为指示剂,根据荧光信号指示扩增反应产物的有无;将本法与实时荧光PCR法对临床标本做HBV检测的对照分析。结果建立了血液病毒核酸的可视化检测方法,研制出扩增检测一体化仪器;灵敏度达到可在<1 h完成10 cp/管的HBV核酸扩增反应和产物检测。62例实时荧光PCR检测为HBV阳性的临床标本,本法亦都检测为阳性;而从42例实时荧光PCR检测为HBV阴性的临床标本中,本法检出了6例HBV阳性。结论所建立的方法和装置可实现高灵敏度单管快速检测血液病毒核酸,为特殊现场环境中的血液安全性筛查提供了新的手段。; 梁超成思佳武海萍周国华; 关键词：血液安全环介导等温扩增核酸检测

指数线性聚合酶链式反应法制备焦磷酸测序反应的单链模板被引量：9: 2009年; 建立了一种简单的焦磷酸测序用单链模板制备方法,以包含SNP6位点一段78bp序列为对象,采用非热启动Taq酶进行指数线性PCR扩增,通过加入甘油、BSA等PCR增强剂增加反应的效率和特异性,设计反应液A和B处理PCR产物中干扰焦测序的限制性引物、未完全反应的产物、焦磷酸和dNTPs等杂质,处理后1～2μLPCR产物就可直接用于焦测序检测。测定了BRCA1基因中5个乳腺癌相关的SNP位点,获得的图谱无非特异性信号,测得序列与参考序列一致,能够进行SNP分析,表明本方法可以制备高质量焦测序单链模板,且使焦测序的成本显著降低,操作更为简便,减少了操作过程中样本间的交叉污染,有利于焦测序样品预处理的自动化。; 杨会勇奚涛梁超陈之遥徐定邦周国华; 关键词：单核苷酸多态性

多重环介导核酸等温扩增技术检测血液中常见病原体被引量：6: 2013年; 背景:血液安全性筛查是输血前必要检测项目。目前临床采用血清学检测技术,存在较长的检测窗口期,易产生假阴性检测结果,造成输血交叉感染。目的:建立多重环介导核酸等温扩增技术,实现在一管反应体系内同时检测四种病原体:乙肝病毒,丙肝病毒,艾滋病毒和梅毒螺旋体。方法:通过限制性酶切处理多重环介导核酸等温扩增产物,利用酶切产物的长度分析扩增产物的种类,从而分析待测样本中含有何种血液病原体。结果:检测164例临床样本,其检测结果可以通过琼脂糖电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳及芯片电泳分析,且均可实现对多重扩增产物的酶切片段进行区分和鉴别。结论:多重环介导核酸等温扩增技术可以同时单管检测多种待测血液病原体,可以为临床提高简单、快速、高灵敏和高特异的检测技术。; 梁超成思佳王聪初亚男奚涛周国华

基于免疫磁珠富集粪便脱落细胞的大肠癌筛选法: 大肠癌是目前发病率、致死率均较高的恶性肿瘤，严重危害人民健康生活。现有的临床检测技术均存在一定的局限性，因而限制了其临床应用的范围。与常规临床大肠癌检测相比，粪便脱落细胞检测法具有高特异性、高灵敏性且容易被受试者接受等显...; 梁超李丹滢周国华; 关键词：大肠癌脱落细胞免疫磁珠法; 文献传递

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