王倩
- 作品数：36 被引量：211H指数：8
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金黑龙江省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 2016年我国3株欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其全基因组特征分析被引量：10
- 2017年
- 2016年,本实验室共检测到3株基因1型(欧洲型)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为ZD1株、WK14株和WG9株,本研究对3株PRRSV进行了全基因组序列分析。遗传演化分析显示,3株PRRSV均属于基因1型I亚型,与基因1型代表株LV的核苷酸同源性为88.7%~88.9%,与基因2型代表株VR2332的核苷酸同源性为60.7%~60.8%。ORF3与ORF4推导氨基酸序列比对结果显示,ZD1株的ORF3提前26个氨基酸(aa)终止,这是首次报道基因1型PRRSV编码的结构蛋白存在提前终止现象,WK14株与WG9株在ORF3的245位存在1个氨基酸的缺失;3株PRRSV在ORF4的66位皆存在1个氨基酸的缺失。Simplot生物学重组软件分析表明,WK14株为重组病毒,供体病毒株为BJEU06-1,提供重组片段的病毒株为NVDC-FJ,重组位置位于第931~3 379位碱基处。ZD1株和WG9株未发现重组现象。本研究发现我国欧洲型PRRSV基因组在缺失、重组等方面正发生一些新的变化,有必要对该类病毒进行持续监测和深入研究。
- 张洪亮张晶张文立相丽润宋帅杰刘春晓李真彭金美陈家锃冷超粮王倩白云安同庆童光志蔡雪辉田志军
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 中国与美国RFLP 1-4-4 lineage1C变异株同一分支PRRSV的全基因组序列分析被引量：9
- 2022年
- 2020年美国报道了高致病性的RFLP 1-4-4 lineage 1C PRRSV变异株,其对猪的致死率达到17.5%。为了分析美国1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国当前流行的PRRSV的关系,本研究对中国不同基因亚型的PRRSV与美国新发1-4-4 lineage1C PRRSV变异株进行遗传演化分析,结果显示,中国类NADC34 PRRSV与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株关系密切;其Nsp2推导氨基酸序列比对结果显示,中国类NADC34 PRRSV与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株在Nsp2区域存在相同的分子特征,即100个氨基酸(aa328~aa427)的连续缺失。PRRSV基因重组分析结果显示,美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株是以类NADC34 IA14737-2016株为母本毒株,并由IA/2014/NADC34和NADC30病毒株提供重组基因片段的重组病毒,而中国早期的类NADC34 PRRSV是以IA/2014/NADC34株为母本毒株的重组病毒。美国早期的类NADC34 PRRSV对仔猪的致病力差异较大,而中国早期的类NADC34 PRRSV对仔猪多为中、低致病力。此外,中国HLJZD22-1812株与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株具有类似的重组模式、相同的Nsp2缺失特征、相同的1-4-4 ORF5限制性片段长度多态性(RFLP)模式,且均属于lineage1C分支。本研究结果首次表明美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国类NADC34(PRRSV)属于同一亚型分支,且具有一致的分子特征,提示类NADC34 PRRSV在我国的流行及演化情况需高度关注。
- 许浒李超相丽润汤艳东赵静龚帮俊李宛生付军彭金美王倩周国辉冷超粮安同庆蔡雪辉张洪亮田志军
- 关键词：重组病毒
- 河南某规模化猪场内猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及多样性分析被引量：1
- 2015年
- 为研究规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）疫苗免疫猪群中PRRS病毒（PRRSV）感染及其变异情况,本研究采集了775份血清及21份病料样品进行病原检测分析,共分离获得了14株高致病性PRRSV（HP-PRRSV）分离株,分别将其命名为Henan-A1～Henan-A14.通过对其全基因组测序及比对分析结果显示,分离株与HP-PRRSV代表株JXA1、HuN4差异显著,同源性仅约为96％.此外,这14株分离株间差异较大,平均差异率达3.44％,呈现不同的变异方向.进一步研究表明,有5个分离株不能在Marc-145细胞中增殖,这是区别于其他HP-PRRSV的重要特征,表明部分分离株的细胞嗜性发生了改变.采用抗HP-PRRSV HuN4株血清对14株分离株进行中和试验,结果显示5份血清对其中9株分离株的中和活性较低,表明目前分离的大部分PRRSV分离株的中和抗原已经发生了较大的变异.本研究结果为有效预防PRRS提供了实验依据.
- 刘益民陈家锃白云张洪亮张秋月王倩张武超叶超彭金美安同庆田志军王笑梅
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞嗜性
- CAML蛋白对流感病毒复制调控机制的初步研究
- 2021年
- 为探究宿主因子钙离子信号调节亲环素配体(CAML)调控流感病毒复制的机制,本研究通过siRNA干扰技术下调CAML的表达后,利用病毒蚀斑试验检测CAML对流感病毒复制的影响,利用激光共聚焦显微镜观察CAML对流感病毒NP蛋白入核的影响,通过流式细胞仪检测CAML对流感病毒诱导的细胞凋亡的影响。瞬时过表达CAML后,利用双荧光素酶报告基因试验检测CAML对流感病毒聚合酶活性的影响。通过qRT-PCR检测流感病毒感染后对CAML mRNA转录水平的影响。结果显示:下调表达CAML可显著抑制流感病毒的复制水平,但对流感病毒NP蛋白的入核无影响;瞬时过表达CAML对流感病毒聚合酶活性无影响;下调表达CAML能够促进流感病毒诱导的细胞凋亡过程,并且流感病毒感染能够导致CAML mRNA转录水平的逐渐降低。以上结果表明:CAML可能通过抑制细胞凋亡的方式促进流感病毒复制,而不是作用于流感病毒的侵入阶段以及转录复制阶段,并且流感病毒感染对CAML的表达具有下调作用。本研究初步探究了宿主因子CAML参与流感病毒复制的分子机制,为其的深入研究奠定了基础。
- 孔凡迪王广文严娅温霞王倩赵玉辉梁立滨李俊平李呈军陈化兰姜丽
- 关键词：流感病毒细胞凋亡
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV免疫保护效果的评价被引量：5
- 2021年
- 类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)10^(5.0)TCID_(50)/头,免疫后21 d,免疫组和攻毒对照组每头各肌注2 mL和滴鼻2 mL类NADC30 PRRSV SD53-1603株(104.0TCID_(50)/mL)。攻毒后观察各组实验猪临床症状,可见攻毒对照组所有猪均发热,持续5 d9 d,免疫组仅2头猪发热1 d2 d。检测各组实验猪体重变化,结果显示,攻毒后免疫组和攻毒对照组体重增长均显著低于空白对照组(p<0.001),但攻毒14 d以后,免疫组体重增长显著高于攻毒对照组(p<0.05)。IDEXX ELISA测定各组猪血清中PRRSV的特异性抗体,结果显示免疫后14 d可以诱导免疫组仔猪产生良好的针对PRRSV的特异性抗体。利用荧光定量PCR测定血清和组织中的病毒载量,结果显示免疫组血清和组织中的病毒载量均极显著低于对照组(p<0.0001)。对PRRSV免疫后及攻毒后各组仔猪各脏器病理学观察,结果可见攻毒对照组与免疫组相比出现明显的剖检和组织病理学变化。以上结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV可以提供一定的交叉保护,该研究为评价我国现有疫苗是否对类NADC30 PRRSV具有保护效果提供了参考依据。
- 张洪亮相丽润许浒宋帅杰赵静张文立李真汤艳东陈家锃冷超粮王倩彭金美安同庆童光志蔡雪辉田志军
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白相互作用的研究被引量：2
- 2021年
- 核蛋白(NP)是流感病毒的主要结构蛋白,其与RNA依赖性的聚合酶蛋白(PB2、PB1和PA)及vRNA构成核糖核蛋白复合体,参与流感病毒复制过程中的多个阶段。宿主因子着丝粒蛋白V(CENPV)在细胞生命周期中发挥重要作用,但是目前尚未见关于CENPV蛋白与流感病毒NP蛋白相互作用的报道。为研究宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白相互作用机制,本实验利用酵母双杂交技术筛选与NP蛋白相互作用的CENPV,利用酵母回交验证,结果显示CENPV与NP诱饵质粒共同转化Y2H酵母感受态细胞,在DDO、QDO和QDO/X/A 3种营养缺陷型的培养基上均能生长,并使菌落呈现蓝色,与阳性对照结果一致,而阴性对照组在QDO和QDO/X/A培养基上均未观察到菌落,表明在酵母系统中宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白存在相互作用。将pCAGGS-CENPV-Myc(1μg)表达质粒与pCAGGS-NP(1μg)质粒共转染293T细胞,通过免疫共沉淀(Co-IP)检测,结果显示鼠抗NP MAb仅可结合CENPV与NP共转染组中的CENPV,表明宿主蛋白因子CENPV与流感病毒的NP蛋白存在相互作用;进一步利用激光共聚焦试验检测,结果显示在A549细胞中宿主因子CENPV与流感病毒的NP蛋白存在共定位。根据人CENPV序列设计合成CENPV的特异性siRNA,利用RNAiMAX将CENPV siRNA转染A549细胞,48 h后进行细胞活力测定和病毒感染试验,结果显示利用siRNA干扰技术下调CENPV表达后对细胞活力无影响,但可促进流感病毒在A549细胞中的复制。以上研究结果首次证实宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白存在相互作用,并且调控流感病毒的复制。本研究进一步完善了流感病毒NP蛋白与宿主因子的相互作用网络,为宿主因子调控流感病毒复制研究提供参考。
- 温霞赵玉辉李奇兵王倩孔凡迪梁立滨王广文李俊平姜丽陈化兰李呈军
- 关键词：酵母双杂交流感病毒核蛋白相互作用
- 猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征被引量：86
- 2014年
- 2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d内全部死亡,均出现典型的PR症状及组织病理学变化。将PRV-JL1及PRV-HLJ1与近3年来本实验室分离鉴定的及GenBank中登录的来源于国内10多个省份的32个PRV株和17个经典PRV株的gE核苷酸序列进行比对分析,结果表明:近3年分离的PRVs与本实验室之前分离的变异株PRV-HeN1的同源性在97.1%~99.5%,而与经典株PRV双城株(PRV-S)的同源性在96.6%~99.1%。以gE氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3年分离的PRVs形成一个相对独立于经典株的新分支。以上结果表明变异株已成为我国主要流行的病毒株,而且变异株均在gE蛋白的第48位和第492位各存在1个天冬氨酸的插入。该插入突变可以作为鉴定PRV变异株的分子特征,其生物学意义有待于进一步研究。
- 赵鸿远彭金美安同庆李琳冷超粮陈家锃王倩常丹张秋月蔡雪辉童光志田志军
- 关键词：伪狂犬病病毒分子特征
- 2016年～2017年我国华北地区某规模化猪场经典美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及全基因组序列分析被引量：4
- 2017年
- 为了解近期我国华北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及变异情况,本研究对该地区某猪场采集33份2016年~2017年疑似患PRRS猪病料样品进行PCR检测,对阳性样品进行病毒分离,并从分离株中选择两株病毒(SD158和SD192)进行全基因的序列扩增及分析。结果显示,检测到13份PRRSV阳性病料样品,病原为经典美洲型PRRSV,但仅分离到11株病毒(4株感染MARC-145细胞,另外7株感染PAM细胞)。SD158和SD192株与Resp PRRS MLV株(疫苗株)的核苷酸同源性最高,分别为99.7%和99.4%。对这两株PRRSV与VR-2332、Resp PRRS MLV的各基因的推导氨基酸序列进行分析,结果显示在VR-2332与Resp PRRS MLV株22处差异氨基酸中,SD158株有15处、SD192株有14处氨基酸和Resp PRRS MLV株相同,但二者仅各有6处及7处氨基酸与VR-2332株一致,在鉴别PRRSV VR-2332株与Resp PRRS MLV株的7处可能与毒力相关的氨基酸位点时发现,SD158与SD192株各有5处基酸与VR-2332株相同。根据以上结果推测SD158与SD192株可能来源于PRRSV Resp PRRS MLV株,具有上述分子变化特征的PRRSV在我国的流行状况值得关注。
- 刘春晓张洪亮张文立相丽润李真冷超粮陈家锃彭金美王倩安同庆童光志蔡雪辉田志军
- 关键词：病毒分离鉴定流行病学
- 欧洲型PRRSV竞争ELISA抗体检测方法的建立及应用被引量：2
- 2022年
- 为快速准确地监测1型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)在我国的流行情况,本研究以分子筛纯化灭活的PRRSV-1(ZD-1株)为包被抗原,利用PRRSV-1的特异性单克隆抗体(MAb EU-1)为竞争抗体,经条件优化,建立了检测PRRSV-1的竞争ELISA(EU-C-ELISA)方法。反应条件优化结果显示,最佳抗原包被量为455 ng/孔,PRRSV-1 MAb EU-1的最佳稀释度为1:8。EU-C-ELISA结果判定标准:血清样品抑制率PI≥45%时判定为阳性,PI<45%判定为阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能检测PRRSV-1阳性血清,与各谱系PRRSV-2及其他常见猪病毒和细菌阳性血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法能检测出16倍稀释的阳性标准血清,并且最早可在PRRSV ZD-1株感染猪后第7 d检测到血清中PRRSV-1抗体阳转;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%,对比试验结果显示该方法特异性和敏感性均显著优于现有试剂盒对PRRSV-1抗体的检测。利用该方法对2020年采自黑龙江、辽宁、河北、山东省10个猪场的432份临床血清样品进行检测,2个猪场检出PRRSV-1抗体阳性,猪场阳性率达20%,样品总阳性率为15.0%,显示PRRSV-1抗体已存在于我国部分地区猪群中。本研究在我国首次建立了PRRSV-1竞争ELISA抗体检测方法,为监测PRRS-1在我国的流行情况及科学防控该病提供了检测手段。
- 许浒相丽润张文立汤艳东赵静李超龚邦俊李宛生付军彭金美王倩周国辉冷超粮安同庆蔡雪辉张洪亮田志军
- 关键词：竞争ELISA流行病学调查
- 两株2.1d新基因亚型猪瘟病毒的全基因组序列分析及其基因亚型分子特征被引量：2
- 2016年
- 为研究猪瘟病毒(CSFV)2.1d新基因亚型的基因组特征,本研究根据Gen Bank中登录的Zj0801株CSFV全基因组序列设计合成6对引物,通过RT-PCR方法对2014年分离自山东的两株2.1d亚型CSFV(SDSG1410和SDLS1410)进行全基因组测序,两株CSFV全长均为12 296 nt。全基因组遗传演化分析表明这两个分离株位于一个独立分支中,属于2.1d亚型,与E2基因分型结果一致。核苷酸和推导氨基酸同源性分析显示,分离株全基因组同源性与参考株相比差异较大,与Zj0801株的全基因组同源性最高为97.3%~97.5%,而与1.1亚型的Shimen和HCLV株的同源性仅为85.0%~85.1%和84.3%~84.4%;部分基因和非翻译区变异较大,如N^(pro)、C、E2、NS2、NS5A和3'UTR。对全基因组氨基酸序列分析,结果显示2.1d亚型CSFV在V^(640)、K^(992)、A^(1020)、M^(1090)、R^(1395)和D^(2374) 6处氨基酸上具有共同的分子特征。以上研究结果增加了CSFV 2.1d新基因亚型的分型依据。
- 冯丽苹张洪亮彭金美刘春晓王倩李真吴桐翁长江蔡雪辉田志军熊涛
- 关键词：猪瘟病毒分子特征
