王楷文
- 作品数：20 被引量：38H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生电子电信生物学更多>>
- 远红荧光蛋白HcRed基因的原核和真核表达及鉴定
- 2010年
- 目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模板,通过PCR获得目的基因,并分别连接于PET28a(+)原核载体和PIRES真核载体。经PCR、酶切鉴定后,原核载体转化大肠埃希菌,经IPTG诱导表达;真核载体用脂质体转染DC2.4,G418筛选出克隆后,应用RT-PCR和流式细胞仪进行检测。结果:扩增出687 bp的HcRedCDS区序列,构建了原核和真核表达载体PET28a(+)/HcRed和PIRES/HcRed,分别于大肠埃希菌和DC2.4细胞系中成功表达。结论:成功构建HcRed基因的原核、真核表达载体,并分别在工程菌和细胞系中成功表达,为后续基因及融合蛋白的筛选、示踪和体内观测奠定了基础。
- 何志强薛渊石燕杨恒赵银霞王楷文周成林王胜军邵启祥焦志军许化溪
- 关键词：原核表达
- 一种用于检测全血中T淋巴细胞功能的ELISA试剂盒及其检测方法及应用
- 本发明公开了一种用于检测全血中T淋巴细胞功能的ELISA试剂盒及其检测方法及应用，用于筛选适合抗CD20单克隆抗体治疗的患者及疗效监测。本发明的试剂盒，能用于全血中T淋巴细胞功能的检测，弥补了国内CD8<Sup>+</S...
- 王楷文赵江峰曹励欧叶霜
- 飞秒激光诱导水光学击穿阈值被引量：1
- 2010年
- 为了研究飞秒激光诱导水光学击穿阈值随激光脉冲参数的变化关系,采用四阶RungeKutta方法对飞秒激光诱导水光学击穿的椭球体模型进行了不同脉宽(40～540fs)、波长(400～1200nm)和光斑尺寸(0～200μm)下的数值模拟。通过控制变量法得出阈值光强与这些激光脉冲参数的关系曲线图,据此定性分析了阈值光强与激光脉冲参数的变化特征趋势。应用光强与功率、能量、辐照曝光量和电场强度之间的关系,得到了它们随激光脉冲参数脉宽、波长和光斑尺寸的动态关系,这为进一步研究飞秒激光与水和含水介质的相互作用提供了理论依据。
- 王亚伟王立峰邓晓斌刘莹卜敏王楷文雷海娜
- 关键词：飞秒激光击穿阈值RUNGE-KUTTA方法
- 一种风湿病患者细胞因子流式检测的样本前处理及保存方法
- 本发明提供了一种风湿病患者细胞因子流式检测的样本前处理及保存方法，和一种用于判断自身免疫性疾病类型，诊断自身免疫性疾病(例如风湿病的)诊断试剂盒。具体地，本发明提供的方法和试剂盒对于提高风湿病患者基于流式细胞术进行细胞因...
- 赵江峰王楷文叶霜
- 文献传递
- IL-25与免疫相关疾病关系的研究进展被引量：4
- 2010年
- IL-25又称为IL-17E，是细胞因子IL-17家族的成员之一，主要由活化的Th细胞和肥大细胞所分泌。与其他家族成员不同，IL-25能够诱导Th2型细胞因子如IL-4、IL-5和IL-13的产生，介导Th2类免疫应答，还能够影响Th17细胞的分化并调节自身免疫性疾病的发生发展。总之，IL-25在多种免疫性疾病的发生发展中都发挥着重要的作用。
- 王楷文许化溪
- 关键词：IL-25IL-17TH2细胞超敏反应自身免疫性疾病
- 化学发光法检测抗可提取核抗原抗体的临床应用研究被引量：1
- 2018年
- 目的研究全自动、全定量和随机上样的化学发光法(CLIA)在针对抗可提取核抗原抗体(antiENA)检测结果在结缔组织病(CTD)的临床诊断价值,为临床实验室检测anti-ENA的方法学选择提供参考。方法同时利用CLIA、免疫斑点法(ID)和多重流式免疫分析法(MFI)对323例CTD患者、123例非结缔组织病组(Non-CTD)及70例健康对照组(NCs)开展针对抗核糖核蛋白/史密斯(RNP/Sm)抗体、抗史密斯(Sm)抗体、抗干燥综合征抗原A(SSA/Ro60)抗体、抗干燥综合征抗原B(SSB/La)抗体、抗组氨酰tRNA合成酶(Jo-1)抗体、抗硬皮病70(Scl-70)抗体和抗核糖体P蛋白(Rib-P)抗体的平行检测;分析CTD患者各抗体与ID和MFI检测结果一致性。使用ELISA方法就比对不同方法学差异样本进行复测验证。结果在NCs组中,CLIA法检测anti-ENA的阳性检出率均低于2%;在Non-CTD组中,各抗体阳性检出率均低于10%。在CTD中,CLIA分别与ID和MFI开展方法学比对分析。与ID相比,除抗SS-A抗体(71.21%)外,其他抗体一致性均大于85%;与MFI相比,除抗SSB抗体(69.66%)和抗Sm抗体(73.07%)外,其他抗体一致性均大于75%。针对抗Sm抗体,不同方法学差异样本进行ELISA方法学的重复验证,以其结果作为参考依据,再次开展一致性分析,总体一致性分别提升至96.28%;CLIA及MFI诊断效能分析中,抗Sm抗体的曲线下(AUC)面积分别为0.516 3及0.814 9,抗SSB抗体AUC面积分别为0.738 0及0.747 0。结论与ID和MFI相比较,CLIA在NCs中检测anti-ENA时具有最好的检测特异度,且与上述两种检测方法在CTD中的检测结果具有较好的一致性和符合率。由于不同检测方法在检测anti-ENA时灵敏度及特异度均存在一定差异,未来实验室方法学的选择时,应结合样本的临床诊断信息及方法学的具体特点(包括自动化程度、检测线性范围、样本随机上样和检测项目灵活组合)等方面综合判断。
- 李静刘国娣王楷文胡德宇赵江峰
- 关键词：化学发光法免疫斑点法酶联免疫吸附法
- miR-146a与类风湿关节炎患者疾病活动度的相关性研究被引量：3
- 2015年
- 目的通过检测类风湿关节炎(RA)患者血浆中mi R-146a的表达,探讨mi R-146a与疾病活动度的相关性。方法 RA患者40例,其中活动期20例,非活动期20例,留取血浆提取和纯化mi RNA,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测mi R-146a的表达,采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果活动期患者血液中炎性指标类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)明显增高;受累指关节滑膜增生厚度、mi R-146a的表达明显高于非活动期患者,差异有统计学意义(P<0.05);而两组患者的抗CCP抗体、受累指关节滑膜血流分级与滑膜动脉阻力指数(RI)比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在RA活动期患者体内,mi R-146a与滑膜增生厚度、血流分级、RF均有明显的正相关(P<0.05);而与血液中其他一些炎症指标(ESR、CRP、抗CCP)均无相关性(P>0.05)。而非活动期患者的mi R-146a与各项炎症指数均无关联(P>0.05)。结论 mi R-146a在RA活动期患者血浆中高表达,且与反映RA患者病情活动度的一些特异性指标相关,而与其他一些非特异性指标无相关,提示血浆mi R-146a可以作为RA患者疾病活动度的一个较特异性的预测指标。
- 王楷文邵军刘磊
- 关键词：类风湿关节炎MIRNA疾病活动度
- 抗MDA5抗体对皮肌炎继发间质性肺病的病情活动与预后评估的价值被引量：2
- 2019年
- 目的 :观察特发性炎性肌病(idiopathic inflammatory myopathy, IIM)合并间质性肺病(interstitial lung disease, ILD)患者血清中抗黑素瘤分化相关基因5(melanoma differentiation associated gene 5, MDA5)抗体的表达水平,探讨抗MDA5抗体与IIM合并ILD(IIM-ILD)临床特征、严重程度及6个月死亡率之间的关系,为寻找新的免疫干预新途径积累实验数据。方法:采用酶联免疫吸附试验检测104例IIM不合并ILD患者19例和IIM-ILD患者85例[其中多发性肌炎(polymyositis, PM)4例,皮肌炎(dermatomyositis, DM)8例,无肌病性皮肌炎(amyopathic dermatomyositis, ADM)7例, PM-ILD 17例, DM-ILD 25例, ADM-ILD 43例],以及13名正常对照者血清中的抗MDA5抗体水平,分析该抗体与患者肺功能[包括用力肺活量(forced vital capacity, FVC%)]与一口气呼吸法一氧化碳扩散功能(single breath, carbon monoxide diffusing capacity, DLCO/SB)、肺结构包括高分辨率CT评分及半年生存率间的关系。结果 :ADM-ILD患者血清中的抗MDA5抗体水平较正常对照组、IIM不合并ILD组及PM-ILD组明显增高(P<0.005);相比DM-ILD患者,ADM-ILD患者血清中的抗MDA5抗体水平增高(P<0.05);该抗体水平与IIM患者肺功能间无相关性(FVC%,r=-0.044 25,P=0.757 9;DLCO/SB,r=-0.068 39,P=0.633 5),而与肺结构改变呈显著正相关(r=0.387 9,P=0.000 2);抗MDA5阳性DM患者的半年内的生存率与抗MDA5阴性患者相比明显降低(77.55%比100.00%),差异有统计学意义(P=0.000 2)。结论:采用酶联免疫吸附试验测得的血清抗MDA5抗体水平,与DM尤其是ADM合并ILD患者的肺功能、肺结构破坏严重程度及半年生存率密切相关。
- 王娟王楷文赵江峰
- 关键词：皮肌炎间质性肺炎
- T-bet对肺癌细胞系(Lewis细胞)致瘤作用的体内干预研究
- 2011年
- 目的:探讨T-bet质粒局部应用对小鼠肺癌细胞皮下移植瘤的干预作用。方法:将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右肩部皮下,制备荷瘤小鼠模型;瘤内分别注射PIRES-eGFP/mT-bet(m指小鼠)、PIRES-eGFP质粒和PBS,观察各组小鼠存活时间,肿瘤体积的变化;HE染色观察肿瘤组织的病理变化;Western blot检测肿瘤组织T-bet的表达,QRT-PCR检测肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平。结果:瘤内注射T-bet质粒载体后Western blot检测发现,肿瘤组织T-bet蛋白表达显著高于对照组;QRT-PCR结果显示,肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平呈上升趋势,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。T-bet质粒干预组小鼠肿瘤生长明显缓慢,存活期延长。HE染色组织病理观察可见mT-bet干预组小鼠局部组织淋巴细胞大量浸润。结论:T-bet基因局部注射可延缓小鼠肺癌Lewis皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答能力,增强对已发肿瘤的生长限制作用,为T-bet应用于肿瘤治疗积累试验数据。
- 赵银霞王楷文杨恒郑东苏兆亮仝佳王胜军许化溪
- 关键词：肺癌细胞系质粒小鼠
- 抗MDA5抗体在划分系统性红斑狼疮患者临床亚型中的应用
- 本发明提供了抗MDA5抗体在划分系统性红斑狼疮(SLE)患者临床亚型和判断疾病预后中的应用。具体地，本发明提供了一种抗MDA5抗体或其检测试剂的用途，用于制备一诊断试剂或试剂盒。使用所述诊断试剂或试剂盒，通过测定SLE患...
- 赵江峰王楷文叶霜
