王福山
- 作品数：7 被引量：20H指数：2
- 供职机构：武汉大学生命科学学院病毒学研究所更多>>
- 发文基金：“九五”国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 多重特性重组杆状病毒的构建
- 王福山
- 关键词：重组杆状病毒
- 单细胞克隆法快速筛选重组昆虫杆状病毒被引量：1
- 1995年
- 首次采用显微操作系统挑取包含有重组病毒的单细胞，成功地获得了重组杆状病毒的单细胞克隆，并得到了重组病毒的纯培养．对有多角体的和无多角体的重组病毒细胞的挑取表明，这一方法对重组杆状病毒的筛选具有普遍适用性．我们发展的这一方法比常规的空斑技术简便、快速，只需两周左右即可完成重组病毒的筛选．
- 王福山杨远征齐义鹏
- 关键词：杆状病毒昆虫病毒重组病毒
- 全长和截短的δ内毒素cryIAc基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达
- 1995年
- 在昆虫病毒转移载体ＰＶＬ１３９３多角体基因启动子下游克隆了全长的苏芸金杆菌δ内毒素基因ｃｒｙＩＡｃ，得到了重组转移载体ｐＴｈＹ１，用ＫｐｎＩ将ｃｒｙＩＡｃ基因进行了截短，得到了重组转移载体ｐＶＬＹ２．随后在两种重组转移载体ｃｒｙ基因的下游引入了ＩＥ１启动于驱动的ｎｅｏ基因作为筛选标记和ＳＶ４０小ｔ抗原终止区作为ｃｒｙ基因的终止信号，得到了重组转移载体ｐＶＬＹｌｎｅｏ和ＰＶＬＹ２ｎｅｏ，分别用两种重组转移载体ＤＮＡ与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染昆虫Ｓｆ９细胞，用Ｇ４１８筛选后经有限稀释法纯化，得到了携带全长和截短。ｒｙＩＡｃ基因的两种重组病毒ｖＶＬＹ１ｎｅｏ和ｖＶＬＹ２ｎｅｏ，分别在昆虫细胞中表达了分子量为１３３３００和８２０００的ｃｒｙ蛋白，大小分别与ｃｒｙＩＡｃ晶体蛋白和预计的截短蛋白相同，并均具有与原晶体蛋白相同的免疫活性，生物测定表明两种表达产物均具有杀虫活性，和昆虫病毒一起产生协同增效毒性．
- 杨远征杜全胜朱反修王福山齐义鹏黄永秀
- 关键词：基因表达内毒素杆状病毒
- 基因工程重组杆状病毒杀虫剂
- 本发明公开了一种全新的基因工程杆状病毒杀虫剂，其主要内容是用基因工程手段对苜蓿尺蠖核型多角体病毒(AcNPV)基因组进行多方改造：构建两类转移载体，并克隆毒素基因或报道基因的表达盒，与野生的或重组的AcNPV共转染昆虫细...
- 齐义鹏黄永秀王福山李凌云杜全胜李晓峰吕利群朱印周湘鄂杨芳
- 文献传递
- 多角体完整重组病毒的构建及苏芸金杆菌截短δ内毒素基因的表达被引量：16
- 1995年
- 杆状病毒由于其特异的宿主专一性,对有益昆虫、人畜无害和具有持续性和流行性等优点而广泛用于生物防治.但其主要缺点是毒力不高,杀虫速度慢,限制了它的应用.曾有人分别克隆苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)全长δ内毒素cryIA(c),cryIA(b)基因到杆状病毒多角体蛋白基因ocu(occlusion)启动子下游构建重组病毒,但并没有提高杀虫速度.其原因可能是昆虫细胞内缺少碱性条件,不能降解全长毒素基因表达的原毒素有活性的毒性片段.在转基因植物中,3′半端截短的cryIA(b)基因的表达量比全长基因高10倍。
- 王福山黄永秀齐义鹏刘子夜杨远征
- 关键词：苏芸金杆菌基因表达重组杆状病毒
- 双基因双重组AcNPV的构建及其杀虫活性被引量：6
- 2000年
- 质粒 pAcIEneo携带杆状病毒极早期基因IE1启动子驱动的新霉素抗性基因 (neo) ,经酶切回收后插入到质粒pAc34DZ1的SacI位点上 ,构建成多角体外膜蛋白基因 (pe)失活的转移载体 pAc34DZ2。我们曾构建了一个多角体完整 (ocu+ )的表达苏云金杆菌 (Bt)截短cryIAb基因的重组病毒 (1)vAcPhBtT。为了改进这一重组病毒的杀虫效率 ,将转移载体 pAc34DZ2与重组病毒 (1)vAcPhBtTDNA共转染Sf9细胞 ,进行第二次同源重组。由于neo基因的表达 ,用G4 18筛选得到重组病毒 (2 )vAcPhBtTPE-;Southernblot证明vAcPhBtTPE-的构建是正确的 ,经SDS PAGE分析 ,重组病毒 (2 )仍然能在昆虫细胞中表达 80kD的Bt截短毒蛋白 ,但不表达 34kD的多角体外膜蛋白。电镜观察重组病毒 (2 )无多角体外膜 ,碱解时病毒粒子释放的速度快于重组病毒 (1)。以重组病毒 (2 )感染甜菜夜蛾三龄幼虫 ,LC50 比野生型病毒小了接近 1倍 ,LT50 提前近 2d。
- 裴子飞肖化忠齐义鹏王福山朱应
- 关键词：重组杆状病毒PE生物防治杀虫活性
- 昆虫杆状病毒表达系统中阳性重组病毒的筛选被引量：1
- 1995年
- 近年来，随着杆状病毒表达系统的普遍应用，阳性重组病毒筛选方法也有了很大的改进，从过去的经验性的ｏｃｕ￣＋／ｏｃｕ￣－空斑表型筛选发展到根据颜色差异，药物抗性，抗生素抗性等等筛选重组病毒。同源重组过程也可在大肠杆菌或酵母甚至体外进行，大大提高了重组率，由于重组率是如此之高，有些方法可以免去繁琐的空斑选择，很快得到重组病毒的纯培养。文章对各种筛选方法进行了比较，并指出各自的优缺点。
- 朱反修王福山齐义鹏
- 关键词：杆状病毒外源基因表达重组病毒
