王舒阳
- 作品数：6 被引量：18H指数：2
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- Oct3/4在体外诱导大鼠骨髓间质干细胞神经分化中的作用被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨Oct3/4在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元中的作用。方法:构建大鼠Oct3/4慢病毒载体(Oct3/4-LV)并感染大鼠MSCs;实验分为感染组(感染Oct3/4-LV)、阴性对照组(感染FU-PGC-NC-LV)和未感染组3组;采用β-巯基乙醇诱导各组大鼠MSCs分化为神经元。倒置荧光显微镜下观察MSCs感染后形态学变化;MTT法检测细胞存活率;免疫细胞化学法检测神经元烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Oct3/4的表达变化;Western blotting法检测MAP-2和Oct3/4蛋白的表达变化;RT-PCR法检测MAP-2和Oct3/4 mRNA的表达变化。结果:(1)阳性克隆PCR证明大鼠Oct3/4慢病毒载体构建成功,孔稀释法测定病毒滴度为2×10^(11)TU/L。(2)倒置显微镜下观察大鼠Oct3/4慢病毒载体感染成功,感染复数(MOI)值为10,感染48 h时感染率最高,荧光表达最强;感染率可达83.4%±2.2%。感染组中,MSCs形态发生变化;MTT提示感染组细胞存活率显著降低(P<0.05)。(3)β-巯基乙醇可以诱导大鼠MSCs向神经元分化,其中以感染组诱导效果最佳,具有比较典型的神经元形态,NSE和MAP-2的表达率与其它各组相比显著增高(P<0.05)。(4)感染组与其它各组同时点的Oct3/4表达相比均显著增高(P<0.01)。并且随着诱导时间的延长,各组Oct3/4表达持续减少,诱导后5 h与诱导前相比存在显著差异(P<0.05)。结论:Oct3/4在大鼠MSCs分化为神经元的过程中可能起到了重要的调控作用。
- 王舒阳韩瑞张广宇王翠琴彭越鲁晶晶彭涛贾延劼
- 关键词：骨髓间充质干细胞慢病毒
- DSCAM在APP转基因小鼠脑内的表达变化及其意义
- 目的本研究探讨唐氏综合症细胞粘附分子(DSCAM)在APP(amyloid precursor protein)转基因模型小鼠脑内的表达部位及表达量的变化规律,分析DSCAM与APP小鼠学习记忆功能改变的关系。
- 贾永林贾延劼景黎君鲁晶晶张博爱李尽义韩瑞王舒阳
- 文献传递
- Zfp521在大鼠骨髓间充质干细胞向神经元分化过程中的表达变化及意义被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨锌指蛋白521(Zfp521)在大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元过程中的表达变化及意义。方法:体外培养大鼠MSCs,实验分为未转染组、转染组(转染Rn-Zfp521-siRNA)和阴性对照组(转染nega-tive control siRNA),采用β-巯基乙醇诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元。倒置荧光显微镜下观察MSCs转染后荧光表达情况。采用免疫细胞化学法、RT-PCR法及Western blotting法检测诱导后神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白2(MAP-2)的表达情况及诱导前、后Zfp521的表达变化。结果:(1)siRNA转染72 h荧光表达最强,转染率可达84.1%±2.3%,转染组骨髓间充质干细胞的Zfp521 mRNA表达下降(P<0.05);(2)β-巯基乙醇可以诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元,以转染组诱导效果最佳,NSE和MAP-2表达显著高于其它各组(P<0.05);(3)Zfp521在各组细胞中均有表达,诱导后Zfp521表达明显低于诱导前(P<0.01)。结论:Zfp521在大鼠骨髓间充质干细胞神经分化中表达下降,抑制Zfp521表达可促进神经元的分化,提示Zfp521在骨髓间充质干细胞的神经分化中可能发挥重要调控作用。
- 韩瑞周燕王舒阳张广宇彭越王翠琴鲁晶晶彭涛贾延劼
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经元
- MicroRNA-9-1慢病毒载体的构建及其对小鼠骨髓间质干细胞诱导分化为神经细胞的影响被引量：14
- 2011年
- 目的:探讨microRNA-9-1在体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化中的作用。方法:构建小鼠microRNA-9-1慢病毒载体(microRNA-9-1-LV)并感染小鼠MSCs,筛选最适感染复数(MOI);实验分为未感染组、感染组(感染microRNA-9-1-LV)、阴性对照组(感染FU-RNAi-NC-LV);采用β-巯基乙醇诱导感染后小鼠MSCs分化为神经细胞。倒置荧光显微镜下观察MSCs感染后荧光表达情况;采用免疫细胞化学染色检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经微管结合蛋白(MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化;PT-PCR检测MAP-2 mRNA的表达变化;MTT方法检测细胞存活率。结果:(1)阳性克隆PCR证明小鼠mi-croRNA-9-1慢病毒载体构建成功,孔稀释法测定病毒滴度为1×1012 TU/L。(2)倒置显微镜下观察小鼠microR-NA-9-1慢病毒载体感染成功,MOI值为20,感染4 d时感染率最高,细胞存活率较高,感染率可达91.3%±4.2%。(3)β-巯基乙醇可以诱导MSCs向神经细胞分化,其中以感染组诱导效果最佳,NSE和MAP-2的表达率显著高于其它各组(P<0.05)。结论:(1)MicroRNA-9-1-LV可高效感染小鼠MSCs。(2)感染miRNA-9-1-LV后MSCs经β-巯基乙醇诱导向神经细胞分化比率增加。
- 景黎君贾永林鲁晶晶韩瑞王舒阳李尽义彭涛贾延劼
- 关键词：骨髓间充质干细胞慢病毒
- MicroRNA-9-1慢病毒载体的构建及其对小鼠骨髓间质干细胞诱导分化为神经细胞的影响
- 目的探讨microRNA-9-1在体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化中的作用。方法构建小鼠microRNA-9-1慢病毒载体(microRNA-9-1-LV)并感染小鼠MSCs,筛选最适感染复数(MO...
- 景黎君贾永林鲁晶晶韩瑞王舒阳李尽义彭涛贾延劼
- 文献传递
- 淀粉样蛋白前体695转基因小鼠骨髓间质干细胞的神经分化与Notchl信号调节
- 2014年
- 目的探讨Notchl信号通路在淀粉样蛋白前体（APP）695转基因小鼠骨髓间质干细胞的神经分化中的作用。方法实验分为APP695阳性组（APP＋组）和APP阴性对照组（APP-），体外培养两组小鼠骨髓间质干细胞（MSCs），采用p巯基乙醇诱导骨髓间质于细胞分化为神经细胞，MTT法检测诱导后两组细胞存活率，免疫组织化学法、RT—PCR法、Westernblot法检测神经元烯醇化酶（NSE）、神经微管结合蛋白（MAP-2）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、A0蛋白的表达变化，及诱导前、诱导5d后两组细胞中Notchl表达变化，酶联免疫吸附法（ELISA）法检测两组细胞分化后A8分泌量。结果两组MSCs诱导5d后均可表达NSE、MAP-2，以APP＋组更为明显（P〈0．05），且APP＋组可表达GFAP，MTT检测诱导5d后APP＋组存活率较APP-组低（P〈0．05）；诱导5d后APP＋组Aβ表达较APP-组高（P〈0．05），Aβ分泌量较APP-组高（P〈0．05）；APP＋组诱导前、诱导5d后细胞中Notchl表达均较APP组表达低（P〈0．05），两组细胞诱导5d后细胞中Notchl较诱导前均明显减少（P〈0．01）。结论APP695转基因小鼠MSCs更易于分化为神经细胞和胶质细胞，Aβ可能通过抑制Notchl信号通路在APP转基因小鼠MSCs神经分化中发挥重要调节作用。
- 韩瑞王舒阳张广宇王翠琴彭越鲁晶晶彭涛贾延劼
- 关键词：淀粉样蛋白前体间质干细胞NOTCHL
