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南蛇藤雌性性别相关的RAPD和SCAR标记被引量：4: 2014年; 南蛇藤(Celastrus orbiculatus Thunb)属卫矛科南蛇藤属落叶藤本植物,是中国传统中药材,雌雄异株,少量雄全同株。由于目前在分子水平上对南蛇藤性别差异的研究较少,极大地限制了对其的开发利用。本研究利用RAPD分子标记对南蛇藤雌株、雄株和雄全同株进行了差异比较。100个引物中有5个引物(S127、S140、S148、S174及S111)在不同性别南蛇藤的基因组DNA中扩增到存在明显差异的条带。根据序列分析的结果将RAPD引物转化成特异性较强的SCAR引物后,仅引物S111扩增出一条雌性特异性条带。序列分析发现,该片段包含两个超过100个氨基酸的开放阅读框,其功能有待进一步的研究。; 魏丽娟张娟刘林德王蕾赵同欣; 关键词：性别分化 RAPD SCAR

利用ISSR和叶绿体trnL-trnF序列变异研究葡萄种质资源的遗传多样性和系统发育关系被引量：4: 2015年; 利用ISSR标记和叶绿体DNA trn L-trn F非编码区分析36种葡萄种质的遗传多样性和系统发育关系.13个ISSR引物共产生了63条带,平均有效等位基因数、Nei's基因多样性和香农信息指数分别是1.5827,0.3463和0.5172.基于UPGMA的ISSR分析将葡萄种质材料分为6个主要的进化枝.葡萄在trn L-trn F区域有较高的遗传多样性水平(Hd=0.667,Pi=0.00206).由NJ,ML和贝叶斯分析得到的进化树都没有表现出不同地区葡萄品种与地域之间的地理相关性.中性检验葡萄的进化历史过程中发生过种群扩张事件.葡萄种质资源的保护应以就地保护为主.本研究为葡萄种质资源的理论和应用研究提供了有价值的信息.; 王蕾张娟刘林德张莉魏丽娟胡德昌邓世斌; 关键词：葡萄 ISSR

大豆GmF6′H1基因的克隆及功能验证: 2015年; 以大豆品种‘黑农35号’为材料,利用同源克隆方法获得了一个依赖于Fe(Ⅱ)和2-酮戊二酸的双加氧酶基因,命名为GmF6′H1。荧光定量PCR分析显示GmF6′H1在大豆根中的表达量最高,其次是荚果、叶和茎;2,4-D处理对大豆GmF6′H1的转录水平影响很小,水杨酸和激动素的处理均显著提高了GmF6′H1基因的表达,但随着处理时间的延长表达水平稳定下降,最后接近处理前的水平。带有组氨酸标签的GmF6′H1异源表达的蛋白纯化后,以阿魏酰辅酶A为底物研究了其酶活特性,利用HPLC分析检测到GmF6′H1能够催化阿魏酰辅酶A生成东莨菪素。采用农杆菌介导法将该基因转入拟南芥Atf6′h1突变体,转基因拟南芥与Atf6′h1突变体植株外在表型没有明显的差异,而香豆素的含量分析显示,转基因株系根中香豆素的含量较拟南芥Atf6′h1突变体有所提高,与野生型拟南芥中香豆素的含量接近。; 王蕾张娟魏丽娟刘林德; 关键词：香豆素

天然香豆素类物质的利用和研究进展被引量：3: 2013年; 综述了香豆素在医药、化工以及农药方面的应用,介绍了目前香豆素植物提取和化学合成的方法,提出了目前香豆素研究的热点以及今后的研究重点.; 张娟刘林德王蕾魏丽娟; 关键词：香豆素医药农药抗肿瘤

靶向叉头框蛋白J2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建及其对肝癌细胞转化生长因子β/Smads表达和增殖的影响被引量：3: 2021年; 目的构建靶向叉头框蛋白J2(FOXJ2)的规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因敲除质粒,探讨干扰FOXJ2基因后对小鼠肝癌细胞Hepa1-6的信号通路转化生长因子β/Smads家族蛋白(TGF-β/Smads)表达和增殖的影响。方法设计小鼠FOXJ2的小向导RNA(sgRNA)序列,与PX458载体连接并转化感受态大肠埃希菌,挑取单克隆扩增提质粒。利用脂质体将重组质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs转染入肝癌细胞Hepa1-6,对照组只转染空载体,48 h后RT-PCR检测对Hepa1-6细胞FOXJ2的抑制作用,同时检测FOXJ2被抑制后TGF-β和Smads的表达情况;MTT法检测干扰FOXJ2后对肝癌细胞增殖能力的影响。结果成功构建3个FOXJ2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs,其中质粒PX458-FOXJ2-sgRNA2可以有效抑制FOXJ2的表达,同时检测到干扰了FOXJ2的细胞的TGF-β、Smad2和Smad4的表达均高于对照组,差异显著;并且FOXJ2被抑制组肝癌细胞的增殖能力明显提高。结论小鼠肝癌细胞中的FOXJ2基因在一定程度上抑制TGF-β、Smad2和Smad4基因的表达,抑制细胞的增殖,推测在体情况下,肝癌细胞的增殖和TGF-β信号通路的激活与FOXJ2基因的负调控有一定的相关性,FOXJ2可以作为肝癌预防和治疗的靶点分子进行干预。; 曲明娟郑煜李延敏宋洋王蕾周菊华; 关键词：肝癌细胞转化生长因子Β SMADS蛋白四甲基偶氮唑盐法

南蛇藤脯氨酸脱氢酶基因的克隆和表达特性被引量：1: 2014年; 利用兼并性引物和RACE方法,在南蛇藤(Celastrus orbiculatus)中克隆了1个脯氨酸脱氢酶基因,并命名为Nst Pro DH1。序列比对显示该基因与拟南芥(Arabidopsis thaliana)和烟草(Nicotiana tabacum)的脯氨酸脱氢酶(Pro DH)具有很高的同源性。酶学特性分析表明该酶具有脯氨酸脱氢酶的活性。比较南蛇藤不同器官该基因的转录表达模式与脯氨酸脱氢酶活性,结果显示两者之间没有明显的关联,说明该基因的表达受到转录和翻译水平的双重调控,同时也暗示南蛇藤中还存在其它的脯氨酸脱氢酶基因。Nst Pro DH1基因的表达模式与野生型拟南芥中的Pro DH1具有相似性,因此推测Nst Pro DH1基因可能在功能上与拟南芥Pro DH1基因相似。; 魏丽娟张娟王蕾刘林德赵同欣黄清荣; 关键词：南蛇藤 NST PRO

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王蕾

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