胡宁宁
- 作品数：31 被引量：38H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金吉林省重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的克隆、表达及纯化
- 2010年
- 目的构建含衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的原核表达载体,经转化E.coli以表达CPAF融合蛋白,研究其生物学功能。方法从病料中克隆得到CPAF的原始基因,将PCR产物经纯化连接到pMD18-T,将重组质粒pMD-CPAF经NdeI和BamHI双酶切,与用相同酶消化的原核表达载体pET42b(+)连接,建立pET42b(+)-CPAF表达载体,阳性克隆经鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,经亲和纯化、离子交换纯化、分子筛纯化融合蛋白,进行SDS-PAGE分析,Western印迹检测。结果经酶切鉴定和测序分析证实原核表达质粒构建正确。SDS-PAGE和West-ern印迹结果显示在70kD处呈现单一蛋白条带,pET42b(+)-CPAF重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达了CPAF天然蛋白,目的蛋白占全菌体蛋白的20%左右,采用镍柱的亲和纯化后,可达70%左右。结论经DNA测序、SDS-PAGE、Western印迹检测表明成功构建了能够稳定表达可溶性CPAF的菌株,并获得纯化CPAF的方法,为今后CPAF的研究及应用奠定了基础。
- 王飞朱庆三苗旭漫胡宁宁李霄金宁一
- 关键词：纯化生物学功能
- 单链抗体标联SEA的抗HIV基因工程靶向药物构建与活性研究
- 如何根除 HIV 感染者或 AIDS 患者体内的病毒细胞储存池,是当前限制 AIDS 治疗的最大瓶颈问题。本研究立足于靶向杀伤 HIV 感染细胞的目的,通过合成可作为导向的抗 HIV-1gp120(gp41)单链抗体基因...
- 李昌金宁一金洪涛王宏刘玉生于芳佟敬山胡宁宁
- 文献传递
- 抗HIV-1外膜蛋白单链抗体基因的酵母表达和生物活性分析被引量：4
- 2007年
- 目的:构建含抗HIV-1外膜蛋白gp120单链抗体(scFv)基因的酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达,并检测其生物活性。方法:采用基因工程和重组DNA技术,从质粒pET28-scFv中切下目的基因片段,定向克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9的相应位点,构建重组酵母表达质粒pPIC9-scFv。BglⅡ线性化后,电转化入受体酵母菌GS115中,筛选阳性重组子,进行甲醇诱导表达,并用RT-PCR、SDS-PAGE、双抗体夹心Dot-ELISA法分析目的蛋白表达情况。结果:通过表型筛选、PCR鉴定获得阳性重组酵母工程菌,RT-PCR、SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到很好表达,表达量可占培养液上清总蛋白量的18%,双抗体夹心Dot-ELISA法检测,表达产物能够特异识别重组HIV-1gp120抗原蛋白并与之发生特异性免疫反应,证明表达的重组scFv具有良好的抗体活性。结论:成功地实现了scFv基因的分泌性表达,为抗AIDS靶向治疗及进一步研究其抗HIV活性提供了依据。
- 李昌金宁一王宏伟刘玉生于芳佟敬山胡宁宁
- 关键词：外膜蛋白单链抗体
- 吉林地区人群戊型肝炎病毒感染的流行病学调查被引量：7
- 2015年
- 目的调查吉林地区部分人群戊型肝炎病毒(HEV)感染情况。方法用ELISA检测人群血清中抗HEV抗体;对部分血清用RT-PCR检测HEV RNA,对PCR阳性产物进行测序,所得序列构建系统发育树。结果 ELASA方法检测7 514份人血清,1 621份抗HEV抗体阳性,阳性率21.57%。其中男、女性阳性率分别为30.87%和12.01%,男、女性感染者之比为2.64︰1。感染者抗体水平随年龄增加而升高。不同职业人群HEV率不同,以猪销售人员及养猪从业人员感染率最高,分别为97.18%和97.09%。从戊型肝炎患者中检测HEV RNA,序列分析结果为HEV基因Ⅳ型。结论吉林地区人群HEV感染率较高。从进化关系角度分析,吉林地区人源HEV与猪源HEV可能分化于同一分支。
- 朱光泽李一权兰添范园园张诺娜胡宁宁邢彬尹秀英李霄金宁一
- 关键词：基因型同源性戊型肝炎病毒
- 缺失TC7L-TK2L基因减毒天坛株痘苗病毒构建及筛选被引量：1
- 2014年
- 目的通过敲除天坛株痘苗病毒(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)的复制非必需基因TC7L-TK2L,并结合双标记筛选及外源筛选标记敲除技术构建TC7L-TK2L基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TC7L--TK2L-。方法人工合成含有痘病毒早晚期复合强启动子pE/L和外源筛选标记增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)的重组臂,构建穿梭质粒pTC7L-TK2L-EGFP,再与VTT共转染BHK-21细胞,通过连续筛选10次,获得含有筛选标记的重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L--EGFP+;利用Cre/loxp系统敲除EGFP,连续筛选10次,获得无筛选标记的重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,用PCR方法对rVTT-TC7L--TK2L-进行鉴定和遗传稳定性检测,用电镜观察病毒形态变化,并通过绘制生长曲线观察病毒在细胞内的复制情况。结果 PCR结果表明,成功构建了重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,且具有良好的遗传稳定性;电镜观察痘苗病毒缺失TC7L-TK2L基因未影响病毒形态;生长曲线显示敲除TC7L-TK2L基因后病毒毒力显著下降,但不影响病毒的正常复制。结论成功构建了痘苗病毒减毒株rVTT-TC7L--TK2L-,该重组痘苗具有良好的遗传稳定性且毒力减弱。
- 李一权阚式绂胡宁宁姜爽陈智飞周晔李霄孙丽丽金宁一
- 关键词：病毒载体同源重组
- 用于检测H7N9亚型流感病毒的引物组合及检测试剂盒
- 本发明提供一种用于检测H7N9亚型流感病毒的引物组合及含有所述引物组合的检测试剂盒。所述引物组合包括特异性扩增H7N9亚型流感病毒HA基因的引物对（Seq ID No.1和2）以及特异性扩增H7N9亚型流感病毒NA基因的...
- 金宁一田明尧鲁会军李昌李霄周博胡宁宁薛斐辛舒
- 文献传递
- 戊型肝炎病毒Ch-S-1株全长体外转录载体的构建及表达初步研究
- 2015年
- 目的:构建出HEV Ch-S-1株的全长c DNA克隆,并转染至Hep G2细胞并对其表达进行初步研究。方法:利用重叠PCR方法获得HEV Ch-S-1株全长PCR产物;构建体外转录载体p KS-HEV,成功获得HEV基因组RNA,并转染至Hep G2细胞,通过RT-n PCR、套式PCR和间接免疫荧光实验检测病毒的表达。结果:成功构建了HEV基因组全长c DNA体外转录载体p KS-HEV,并证明了该c DNA克隆在Hep G2细胞中成功进行了表达。结论:成功构建了HEV Ch-S-1株全长体外转录载体p KS-HEV,并对其表达进行了初步研究,为将来在分子水平上研究HEV及研发疫苗提供了一些实验基础。
- 朱光泽李一权兰添范园园张诺娜胡宁宁邢彬尹秀英李霄金宁一
- 关键词：戊型肝炎病毒反向遗传学DNA克隆
- 携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-mock(均为前期工作构建)分别感染人结直肠癌SW1116细胞和胃黏膜上皮GES细胞,MTT法检测感染后细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用DCFH-DA和Rho123染色流式细胞术分别检测细胞活性氧水平和线粒体膜电位,Western blotting检测细胞色素C的释放。建立BALB/c小鼠结直肠癌CT26细胞皮下移植瘤模型,观察Ad-ApoptinPEG3p-E1a对结直肠癌皮下移植瘤的抑制作用。结果:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a抑制SW1116细胞增殖,并具有一定的剂效和时效关系,以MOI=100感染72 h后抑制率达到(56.23±6.64)%,其抑制能力明显强于Ad-p EG3p-E1a和Ad-Apoptin等对照组(均P<0.05)。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a感染导致SW1116细胞活性氧水平上调、线粒体膜电位下降以及细胞色素C释放增加,最终诱导SW1116细胞凋亡,凋亡率为(37.97±3.78)%,但对正常GES细胞的上述各项指标均无明显影响。Ad-ApoptinPEG3p-E1a能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长(P<0.05);有效延长模型动物平均生存期,Ad-Apoptin-PEG3p-E1a治疗组平均生存期为(41.0±0.7)d,显著高于Ad-PEG3p-E1a的(34.4±1.6)d、Ad-Apoptin的(33.2±1.2)d和Ad-mock的(28.4±1.4)d(均P<0.05)。结论:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a可以特异性有效抑制结直肠癌细胞增殖及皮下移植瘤的生长。
- 陈智飞李一权胡宁宁兰添周晔李霄孙丽丽金宁一
- 关键词：溶瘤腺病毒凋亡素基因结直肠癌
- Asia 1型、O型FMDV复合多表位与CTB基因融合重组酵母表达载体的构建
- 口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的主要侵害偶蹄动物的急性、热性、高度接触性人兽共患传染病。被世界动物卫生组织(OIE)列为A类动物传染病,该病的暴发和流行对一个...
- 胡博金宁一李昌胡宁宁
- 关键词：口蹄疫疫苗接种
- 抗HIV-1 gp120单链抗体和白喉毒素融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2007年
- 目的构建人源抗HIV-1单链抗体和白喉毒素融合基因的原核表达质粒,并诱导其在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法通过PCR扩增,获得目前应用较多的DAB389基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot方法分析鉴定。结果酶切及DNA序列测定鉴定正确。SDS-PAGE和West-ern Blot分析证实,重组质粒可表达出相对分子质量为75200的蛋白,与DT-hs120融合基因分子量一致,其表达量约占菌体总蛋白的21%,表达形式主要为包涵体。结论成功构建了DT-hS120表达载体,并获得了高效表达。
- 于芳金宁一李昌刘玉生佟敬山胡宁宁金洪涛
- 关键词：HIV-1单链抗体
