舒特俊
- 作品数：26 被引量：16H指数：2
- 供职机构：浙江理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划浙江省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 家蚕JAB1/CSN5蛋白的基因克隆表达及亚细胞定位被引量：4
- 2009年
- JAB1/CSN5是COP9信号复合体(constitutive photomorphogenic signalosome CSN)的第5个亚基,内嵌的JAMM基序是CSN参与蛋白的泛素化降解途径并调控生物体生长发育过程的异构酶活性位点。在家蚕蛹cDNA文库中筛选到的一条基因序列,其ORF长度为1047 bp,预测编码蛋白含有JAB1/CSN5保守结构域JAB-MPN,因此命名为BmJM。将BmJM基因的ORF插入到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a(+)-BmJM,于E.coliRosetta菌中进行原核表达,重组蛋白以包涵体形式存在。以纯化后的重组蛋白为抗原免疫大白兔获得BmJM的多克隆抗体,采用RT-PCR、Western blotting方法对BmJM基因在家蚕不同发育时期和组织中的转录及蛋白表达水平进行分析,发现BmJM蛋白在家蚕5龄幼虫的生殖腺表达量最高,而在其他组织中表达量较少,由此初步揭示了JAB1/CSN5在家蚕生长发育过程中的作用。亚细胞定位测定表明BmJM蛋白在细胞质近核区域含量最高,在细胞核中也有分布。
- 许红姚斐盛清吕正兵陈健聂作明王丹刘立丽沈红丹舒建洪舒特俊陈剑清吴祥甫张耀洲
- 关键词：家蚕基因克隆荧光定量PCR亚细胞定位
- 家蚕脂围蛋白(PLIN)基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究
- 2009年
- 脂围蛋白(perilipin)与脂肪细胞脂类代谢的调节有关。从家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条cDNA开放阅读框(ORF)序列长度为918 bp的基因,预测其编码305个氨基酸残基,蛋白分子质量约32.5 kD。经NCBI比对发现该蛋白具有部分脂围蛋白的保守结构域,因此将该ORF序列命名为BmPLIN基因。将该基因插入到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a(+)-BmPLIN,并转化大肠杆菌中进行原核表达得到带有His标签的融合蛋白,表达的融合蛋白以包涵体形式存在。用纯化后的融合蛋白为抗原免疫大白兔获得多克隆抗体,ELISA间接法测定抗体的效价达到1∶12 800以上。通过荧光定量PCR和Western blotting技术对BmPLIN基因及其编码蛋白在家蚕5龄幼虫各个组织器官中的转录、表达水平进行分析的结果是:BmPLIN基因mRNA在家蚕5龄幼虫各组织器官中的转录水平由高到低依次为生殖腺(卵巢和睾丸)、脂肪体、肠、表皮、头部、马氏管、丝腺、气门,在家蚕5龄幼虫的生殖腺(卵巢和睾丸)中有明显的BmPLIN蛋白特异条带。以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞实验的结果显示,BmPLIN蛋白在细胞质和细胞核中均有分布。
- 姚斐许红舒特俊盛清吕正兵陈健聂作明王丹刘立丽沈红丹舒建洪陈剑清吴祥甫张耀洲
- 关键词：家蚕蛋白纯化亚细胞定位
- 一种蛹虫草的培育方法及其应用
- 本发明提供一种蛹虫草的培育方法，它包括以下步骤：干蚕蛹粉20g/L、大米粉180g/L、磷酸二氢钾1.2g/L、磷酸二氢钠1g/L、余量为水配制培养基，密封、灭菌、冷却；接种蛹虫草菌种，菌种密度为3～5个菌球/mL，培养...
- 陈剑清舒特俊
- 文献传递
- 家蚕Gar1p基因的克隆表达及生物信息学分析
- 2007年
- 在对家蚕功能基因筛选中获得一条长844 bp的基因序列,其编码蛋白与一种富含甘氨酸和精氨酸的核仁小分子RNA结合蛋白(glycine and arginine-rich nucleolar protein,Gar1p)的同源性达63%。利用生物信息学方法分析了该基因上游的启动子序列,发现该基因不含内含子,由1个699 bp的单一外显子编码232个残基的蛋白,预测分子量为22.4 kD,等电点11.43。该Gar1p蛋白的疏水性最大值为1.167,最小值为-2.011,其序列的两端各有1个强亲水性的GAR区域,而中间含有5个潜在的磷酸化位点。Gar1p基因已从家蚕基因组中扩增得到,并克隆进表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中得以表达,为研究其功能提供了条件。
- 舒特俊陈健聂作明吕正兵王丹吴祥甫张耀洲
- 关键词：家蚕基因克隆生物信息学
- 间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中的表达被引量：1
- 2014年
- 间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25是间日疟原虫有性生殖期表达的表面蛋白,可以抑制疟原虫在媒介按蚊体内的有性生殖及孢子增殖,有效地阻断疟疾病原从按蚊向人体的传播。为了探索该疫苗高效、低成本生产的新途径,进行了Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中表面展示表达的初步试验。首先将经过非功能区去除和密码子优化的间日疟原虫Pvs25基因克隆至转移载体pFastBacHTb,构建重组质粒pET32a-Pvs25并转化E.coli Rosetta菌株,诱导后成功表达了Pvs25蛋白,利用Ni-NTA亲和层析的方法纯化重组Pvs25蛋白,免疫BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,利用Protein A抗体纯化柱纯化后的抗体经间接ELISA法测定其效价为1∶12 800;利用Bac-to-Bac系统构建含Pvs25基因的重组杆状病毒vBmPvs25,接种BmN细胞和家蚕5龄幼虫,经SDS-PAGE与Western blotting分析表明Pvs25在BmN细胞和幼虫中均成功表达;构建vBmgp64-CMV-Pvs25表面展示重组病毒,检测到Pvs25在BmN细胞中表达并展示于细胞和杆状病毒囊膜上。研究结果为利用家蚕杆状病毒表达系统生产间日疟疾传播阻断候选疫苗奠定了一定的试验基础。
- 盛稳稳郭庆拓陈剑清崔立旺张耀洲于威舒特俊盛清
- 关键词：间日疟原虫传播阻断疫苗
- 一种基于抗氧化反应元件的抗氧化药物筛选模型的制备被引量：1
- 2013年
- 目的利用抗氧化反应元件(ARE)调控荧光素酶(Luc)报告基因的表达水平,建立抗氧化药物筛选细胞模型。方法构建由ARE调控Luc表达的重组质粒载体pARE-Luc-Neo,使用FuGENE HD转染剂将重组质粒转染人胚肾上皮Hek293细胞,通过G418进行筛选,使用稀释法挑选阳性单克隆细胞,经抗氧化蛋白诱导剂TBHQ诱导,检测细胞中Luc的活性,筛选Luc高活性的单克隆细胞株。利用白藜芦醇和姜黄素评价阳性克隆的筛选效果,观察5个中药单体穿心莲内酯、隐丹参酮、水飞蓟素、苦参碱和虎杖苷在不同浓度(0、3.125、6.25、12.5、25、50、100μmol/L)时对Luc表达水平的影响。结果通过检测Luc活性,筛选获得Hek293-ARE,该细胞中的Luc的表达水平受ARE调控,且在一定范围内与诱导剂的浓度呈相关性。穿心莲内酯、隐丹参酮与水飞蓟素有较好的诱导效果。结论建立的抗氧化药物细胞筛选模型可有效地、高通量地用于抗氧化药物的初步筛选。
- 刘阳陈剑清舒特俊吕正兵张耀洲
- 关键词：抗氧化药物药物筛选细胞模型荧光素酶报告基因
- 一种蛹虫草液体培养基及其制备方法
- 本发明涉及一种蛹虫草液体培养基及其制备方法，其特征在于：它由糖、蚕蛹提取液、蛋白胨、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、硫酸镁和水组成，由蚕蛹提取液和蛋白胨联合作为氮源，其中各组分的浓度为：糖15‑30g/L，蚕蛹提取液5‑30(蚕...
- 陈剑清吕正兵蒋彩英舒特俊陈健聂作明舒建洪
- 文献传递
- 油菜含片及其制备方法
- 本发明提供一种油菜含片，它为固体片剂，成分为100%油菜。制备方法为：挑选具有丰富肉质的八成成熟度油菜，剔除病虫、腐烂及干瘪部分，清洗，脱水处理使水分含量控制在11%以下；加入超微粉碎机进行超微粉碎；以喷雾的形式均匀喷入...
- 陈剑清吕正兵舒特俊聂作明
- 文献传递
- 核质蛋白——重要的分子伴侣被引量：3
- 2007年
- 分子伴侣一词最初是指一类在细胞核内介导蛋白和核酸相互作用的生物分子.核质蛋白是第一个发现和命名的核内分子伴侣,它在体内以五聚体的形式存在,参与核小体的装配、染色质的重建以及细胞凋亡中染色质的聚缩等重要生命活动.其序列中富含的酸性氨基酸区带是核质蛋白行使功能的重要结构域,这些酸性区带通过屏蔽组蛋白中的正电荷,使得组蛋白能逐步有序地结合到DNA上装配成核小体.核质蛋白晶体结构的测定又将研究推向分子机制的深入探讨和作用模型的建立.本文主要对核质蛋白的结构和生物学性质、核质蛋白的相关功能以及活性调节的研究进展作一综述.
- 舒特俊张耀洲
- 关键词：分子伴侣
- 约氏疟原虫Pys25和Pys48抗原的表达与产物活性初步研究
- 2014年
- 通过家蚕杆状病毒表面展示技术获得约氏疟原虫有性阶段候选抗原Pys25(217AA)和Pys48(455AA),以期建立一种新的鼠疟模型。首先利用大肠杆菌原核表达系统表达这两种抗原,免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,同时利用家蚕杆状病毒表面展示技术,并改造pFastBac Dual载体,在其Ph启动子前端加入哺乳动物启动子CMV,并将目的蛋白基因与杆状病毒囊膜蛋白gp64基因片段融合表达,融合蛋白展示在病毒粒子表面。用其免疫Balb/c小鼠,在小鼠体内,CMV启动子启动融合蛋白表达,共同刺激小鼠产生多克隆抗体。通过间接ELISA检测,两种抗原抗体效价均能达到1∶12 800。本实验为后期免疫阻断效应研究、多时期多价疫苗的构建及鼠疫模型的建立提供了实验基础。
- 李伟杰盛稳稳陈剑清于威吴祥甫崔立旺张耀洲舒特俊
- 关键词：疫苗
