- ASICla过表达对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞代谢的影响
- 2011年
- 目的；构建真核表达pcDNA3．1／ASICla质粒，转染佐剂性关节炎（AA）大鼠关节软骨细胞，建立酸敏感离子通道la（Acid-sensing ion channella，ASICla）基因在关节软骨细胞中过表达的模型，观察ASICla过表达对AA大鼠关节软骨细胞代谢的影响，
- 江晟陈飞虎荣超王念胡伟吴繁荣
- 关键词：关节炎大鼠佐剂性关节炎过表达PCDNA3.1关节软骨细胞酸敏感离子通道
- siRNA沉默ASIC1a基因对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞凋亡的影响研究被引量：5
- 2012年
- 目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)技术诱导佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默对细胞凋亡的影响。方法:通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1asiRNA-FAM,使用Lipo-fectamine 2000转染试剂盒将ASIC1asiRNA转染入关节软骨细胞,采用荧光显微镜、流式细胞术、实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)及WesternBlot法检测siRNA转染效率及其对ASIC1amRNA和蛋白表达的抑制作用。同时采用An-nexin-V/PI流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:ASIC1asiRNA能成功转入软骨细胞,转染后AA大鼠关节软骨细胞中ASIC1amRNA表达显著低于对照组(P<0.01),最大抑制率为85.4%;Western Blot结果显示,转染特异性siRNA后ASIC1a蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。Annexin-V/PI流式细胞术结果表明,与模型组相比,siRNA-3转染引起ASIC1a表达沉默后AA大鼠软骨细胞凋亡明显减少。结论:siRNA介导的AA大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达沉默模型是研究酸敏感离子通道对软骨细胞代谢影响的可靠模型,siRNA-3转染对胞外酸化刺激条件下AA大鼠关节软骨细胞凋亡的保护作用可能与其调节的表达有关。
- 江晟陈飞虎陈寸知荣超胡伟吴繁荣葛金芳唐杰
- 关键词：关节软骨细胞细胞凋亡
- pcDNA3.1/ASIC1a真核表达载体的构建及其在佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的通过构建真核表达pcDNA3.1/ASIC1a质粒,转染佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨细胞,建立酸敏感通道在关节软骨细胞中过表达的模型,观察ASIC1a mRNA及其蛋白的相对表达。方法通过PCR扩增目的基因ASIC1a,并用XbaⅠ和BamHⅠ进行双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pcDNA3.1,将其酶切产物按常规方法连接并转化入大肠杆菌,挑去菌落培养,提取质粒,进行酶切鉴定及测序,然后用Lipofectamine 2 000转染试剂盒将所构建质粒转染入关节软骨细胞,使用荧光定量PCR、RT-PCR和Westernblot法检测ASIC1a mRNA和蛋白表达,以鉴定模型建立成功与否。结果①通过对大鼠脑组织RNA的提取及逆转录,获得ASIC1a基因,并与载体连接,通过大肠杆菌培养,获得足够多的实验用转染质粒,经酶切鉴定包含目的基因,且酶切条带准确清晰。②Lipofectamine 2 000细胞转染后,获得稳定阳性克隆细胞,通过对ASIC1a mRNA及其蛋白相对表达量进行检测,表明转染后细胞mRNA及蛋白量表达均相对上升。结论成功构建了pcDNA3.1/ASIC1a重组表达载体,并用于观察酸敏感离子通道表达水平对关节软骨细胞代谢的影响。
- 王念陈飞虎江晟荣超胡伟吴繁荣沈际佳
- 关键词：关节炎软骨细胞转染
- siRNA介导的佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默模型的构建
- 目的 评价siRNA技术诱导佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默模型的可行性.方法 通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1 a siRNA-FAM,使用Lipofectamine 2000转染试...
- 江晟陈飞虎荣超胡伟张晨晨葛金芳
- 酸敏感离子通道在酸诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡中的作用及其线粒体途径机制研究
- 背景：类风湿关节炎/(rheumatoid arthritis，RA/)是一种不明病因的临床综合征，以慢性多关节炎症为主要表现，由于炎症导致关节局部组织酸化，关节腔内滑液pH显著下降。酸敏感离子通道/(Acid-sens...
- 荣超
- 关键词：酸敏感离子通道软骨细胞细胞凋亡信号转导
- 文献传递
- ASICs在酸诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡中的作用及其线粒体途径机制研究
- 背景:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种不明病因的临床综合征,以慢性多关节炎症为主要表现,由于炎症导致关节局部组织酸化,关节腔内滑液pH显著下降。酸敏感离子通道(Acid-sensing...
- 荣超
- 关键词：软骨细胞酸敏感离子通道细胞凋亡
- 文献传递
- ASIC1a过表达对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞代谢的影响
- 目的:构建真核表达pcDNA3.1/ASIC1a质粒,转染佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨细胞,建立酸敏感离子通道1a(Acid—sensing ion channel 1a,ASIC1a)基因在关节软骨细胞中过表达的模...
- 江晟陈飞虎荣超王念胡伟吴繁荣
- 文献传递
- 基质金属蛋白酶在类风湿关节炎发病机制中的作用研究进展被引量：12
- 2011年
- 类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是以对称性、多发性关节炎为主要表现的自身免疫性疾病,该病是慢性、进行性、侵蚀性疾病,主要侵犯滑膜组织,继而引起关节软骨、周围韧带及骨质的破坏。RA呈全球性分布,是造成人类丧失劳动力和致残的主要原因之一，尽管其发病机制目前尚不清楚，但人们已经发现RA的发病与遗传和环境因素有密切的关系。
- 胡伟荣超陈飞虎吴繁荣刘丽萍
- 关键词：关节炎类风湿基质金属蛋白酶发病机制
- 胞外酸化对体外培养大鼠关节软骨细胞增殖与凋亡及组织蛋白酶K mRNA表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨不同胞外pH环境对体外培养的大鼠关节软骨细胞增殖、凋亡的影响,以及大鼠关节软骨细胞中组织蛋白酶K的表达与胞外酸化的关系。方法:Ⅱ型胶原酶消化法从大鼠关节软骨中分离软骨细胞;细胞传代培养后分为4组分别在pH 7.4、pH 6.5、pH 6.0、pH 5.5不同的胞外酸化环境下培养3h,MTT法检测软骨细胞活力,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态,Annexin-V/PI双染法检测软骨细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR检测组织蛋白酶K基因的表达。结果:与pH 7.4组比较其他各组软骨细胞增殖均受到抑制,其中pH 5.5、pH 6.0与pH 7.4相比差异有重要的统计学意义(P<0.01),pH5.5和pH 6.0组可见较多的凋亡细胞,且流式细胞仪检测的凋亡率明显高于pH 7.4组(P<0.01);组织蛋白酶K的表达与酸性程度成正相关。结论:胞外酸化环境下能明显抑制体外培养软骨细胞增殖、促进软骨细胞凋亡,并且酸性环境能增加组织蛋白酶K的表达,这为类风湿关节炎中关节软骨的破坏发生机制提供了实验依据。
- 荣超陈飞虎江晟胡伟葛金芳张晨晨吴繁荣
- 关键词：软骨细胞
- 胞外酸化对体外培养大鼠关节软骨细胞增殖与凋亡及组织蛋白酶K的影响
- 目的 类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是伴有关节软骨破坏的自身免疫性疾病,由于炎症导致关节局部组织酸化,关节腔内滑液pH显著下降.组织蛋白酶K(cathepsin K)是一种酸性的蛋白内切酶...
- 荣超陈飞虎江晟胡伟张晨晨吴繁荣
