董大勇
- 作品数：30 被引量：60H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 炭疽保护性抗原与炭疽毒素受体结合特征分析
- 2008年
- 目的:建立检测炭疽毒素保护性抗原(PA)与靶细胞受体(ATR)结合能力的Binding-ELISA方法,并对两者结合特征进行分析。方法:以ELISA实验为基础,建立PA与ATR结合的体外模型,并对实验中的反应条件进行优化。采用Binding-ELISA方法,通过测定不同包被蛋白、不同二价阳离子条件下的D450以及相对饱和度等参数,分析PA与两种ATR的结合特征。结果与结论:以重组PA作为包被抗原时灵敏度更高,包被浓度为2μg/ml;二价阳离子浓度为5 mmol/L。两种受体与PA的亲和力不同,其中CMG2与PA的结合能力更强;并且两者与PA结合时离子依赖特征不同,PA与TEM8的结合能力在Mn2+存在时最强,PA与CMG2的结合能力在Ca2+存在时最强。这一结果与国外报道相符,进一步说明Binding-ELISA方法用于定性分析炭疽毒素与其受体结合能力的可行性,为评价以抑制PA与ATR结合为靶点的毒素抑制剂提供了有效的手段。
- 张军赵剑董大勇宋小红徐俊杰陈薇
- 关键词：炭疽毒素酶联免疫吸附试验
- 分泌型大肠杆菌表达载体及其应用
- 本发明公开了一种分泌型大肠杆菌表达载体及其应用，其目的是提供一种可在大肠杆菌中高效分泌表达外源蛋白的分泌型大肠杆菌表达载体及其应用。本发明的分泌型大肠杆菌表达载体，是含有外膜蛋白OmpA的信号肽序列的大肠杆菌表达载体，所...
- 陈薇徐俊杰郭强董大勇
- 文献传递
- 重组炭疽保护性抗原的表达、纯化与生物活性分析被引量：18
- 2004年
- 构建分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中实现了重组炭疽保护性抗原 (rPA)的分泌型表达。重组蛋白位于细菌外周质 ,表达量约占菌体总蛋白的 10 %。以离子交换、疏水层析和凝胶过滤为基础 ,建立了rPA的纯化工艺 ,每升培养物可获得约 15mgrPA ,纯度可达 95 %以上。体外细胞毒性试验显示rPA具有较好的生物学活性。用rPA免疫家兔产生的抗血清在体外可抑制炭疽致死毒素的活性 ,表明rPA可诱导机体产生保护性免疫。
- 徐俊杰董大勇宋小红葛猛李冠霖付玲庄汉澜陈薇
- 关键词：炭疽杆菌炭疽毒素保护性抗原纯化大肠杆菌
- 炭疽保护性抗原受体结合区的关键氨基酸位点分析
- 2005年
- 目的分析炭疽毒素保护性抗原(PA)受体结合区与其功能相关的关键氨基酸位点。方法通过定点突变的方法将PA的Asp683分别突变成为一系列带有不同电荷以及不同长度侧链的氨基酸,通过细胞毒性实验分别探询电荷及立体结构对其活性的影响。同时对Asp683的一些邻近氨基酸进行了定点突变的研究。结果细胞毒性实验显示,不同的突变导致了PA活性不同程度的下降,其中Asp683电荷的改变对其活性的影响尤为明显,但当它突变为不带电荷的氨基酸时,PA仍然保留了一定的活性;而当Asp683突变为带正电的Lys后,PA却保留了相对较高的活性。结论Asp683所带的负电荷在PA与其受体的相互作用中起着关键的作用,但PA与其受体之间的相互作用可能还通过一些其他方式进行。
- 葛猛徐俊杰于少洋董大勇李冠霖赵剑付玲陈薇
- 关键词：定点突变细胞毒性实验
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达及膜定位研究被引量：1
- 2011年
- 从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因,克隆入pET21a(+)载体。将成功构建的pET21a(+)-ESAT-6重组质粒转化入感受态BL21(DE3)中,经诱导表达后,使用SDS-PAGE和Western blot鉴定。超声破碎后发现目的蛋白以可溶性表达形式存在,经过Ni-NTA柱和DEAE-SepharoseTMFast Flow柱纯化,获得纯度约为95%的重组ESAT-6蛋白。将目的蛋白和RAW264.7细胞共孵育后,使用免疫荧光技术发现ESAT-6蛋白能够直接和RAW264.7的细胞膜结合。
- 李浩殷瑛毛亚丽董大勇张军付玲郭继红徐俊杰陈薇
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6纯化免疫荧光
- 一种制备重组炭疽保护性抗原的方法及其专用表达质粒
- 本发明公开了一种制备重组炭疽保护性抗原的方法及其专用表达质粒，本发明提供的重组炭疽保护性抗原的表达质粒，其DNA序列为序列表中的序列1或在高严谨条件下可以与序列1杂交的序列。本发明所提供的制备重组炭疽保护性抗原的方法，是...
- 陈薇徐俊杰董大勇付玲
- 文献传递
- 分泌型大肠杆菌表达载体及其应用
- 本发明公开了一种分泌型大肠杆菌表达载体及其应用，其目的是提供一种可在大肠杆菌中高效分泌表达外源蛋白的分泌型大肠杆菌表达载体及其应用。本发明的分泌型大肠杆菌表达载体，是含有外膜蛋白OmpA的信号肽序列的大肠杆菌表达载体，所...
- 陈薇徐俊杰郭强董大勇
- 文献传递
- 杀灭芽孢杆菌芽孢的复合制剂
- 本发明公开了一种杀灭芽孢杆菌芽孢的复合制剂。本发明提供的复合制剂，其活性成分是乳酸链球菌素和L－丙氨酸。应用本发明的复合制剂，在常温条件下，在15min内，对芽孢的杀灭率可达99.37％，比常规试剂乳酸链球菌素提高了约5...
- 陈薇李曼侯利华曹晓梅付玲李建民张晓鹏董大勇宋小红
- 文献传递
- 携带被插入到乙肝核心抗原蛋白或其片段内的炭疽保护性抗原表位的重组融合蛋白及其用途
- 本发明涉及包括携带炭疽保护性抗原的一种或数种表位的一种或数种多肽的重组融合蛋白，所述的表位多肽以单表位或组合在一起的多个表位的形式插入到乙肝核心抗原(HBcAg)蛋白或其片段的相同或不同的许可位点，形成了能够刺激机体对炭...
- 陈薇徐俊杰殷瑛张军李建民付玲易绍琼董大勇赵剑郭强
- 文献传递
- 结核分枝杆菌ESX-1分泌蛋白ESAT-6增强巨噬细胞吞噬功能被引量：1
- 2013年
- 【目的】研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)分泌蛋白ESAT-6(early secreted antigenictarget of 6 kDa)对巨噬细胞吞噬功能的影响。【方法】用重组质粒pFLAG-ESAT-6和pFLAG-EGFP转染RAW264.7细胞,经G418筛选,PCR、RT-PCR和Western blot鉴定,获得稳定表达flag-ESAT-6和flag-EGFP的RAW细胞系,然后用流式细胞术观察各稳转细胞系吞噬荧光微球的能力,并用共聚焦显微镜和菌落计数法检测稳转细胞系吞噬大肠杆菌(Escherichia coli)的能力。【结果】获得了稳定表达flag-ESAT-6的RAW-E6细胞系和表达flag-EGFP的RAW-EGFP细胞系;流式细胞术检测结果表明RAW-E6吞噬荧光微球的能力显著强于野生型细胞系RAW264.7和对照细胞系RAW-EGFP;菌落计数和激光共聚焦分析表明RAW-E6细胞系吞噬E.coli的能力也显著强于RAW264.7和RAW-EGFP。【结论】通过胞内表达发现结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6能够增强巨噬细胞的吞噬功能,这将为深入理解结核分枝杆菌的致病机制提供新的思路。
- 屈野殷瑛李浩刘炬杨秀旭董大勇徐俊杰陈薇
- 关键词：ESAT-6巨噬细胞
