蔡冬生
- 作品数：8 被引量：37H指数：3
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- 人脑膜瘤细胞的原代培养被引量：2
- 2008年
- 目的建立一种人脑膜瘤细胞原代培养简单有效的方法。方法新鲜脑膜瘤组织取自福建协和医院神经外科25例连续治疗的脑膜瘤手术病人,以胰蛋白酶消化法分离细胞,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行培养并传代,显微镜下观察脑膜瘤细胞生长状况。上皮膜抗原(EMA)、波形蛋白(Vimentin)对脑膜瘤细胞进行免疫组化鉴定。结果用胰酶消化法培养脑膜瘤细胞,方法简单,细胞形态典型;EMA、Vimentin表达阳性,鉴定为脑膜瘤细胞。结论单一的胰蛋白酶消化法是一种简单有效的脑膜瘤细胞原代培养的方法。
- 李军涛杨卫忠石松生王春华陈春美方俊杰杨永凯蔡冬生
- 关键词：脑膜瘤细胞体外培养传代胰蛋白酶
- 颅内压监测在重型颅脑损伤中的应用体会被引量：8
- 2013年
- 目的:探讨颅内压探头在重型颅脑损伤治疗中的应用价值。方法:选择重型颅脑损伤患者90例,分为A组与B组,A组患者40例,使用颅内压探头监测,未使用颅内压探头监测的50例患者为B组,对两组的治疗效果进行对比分析。结果:A组40例应用颅内压探头监测的重型颅脑损伤患者的死亡率为17.5%,B组未使用颅内压监护的50例患者死亡率为24.0%,两组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:颅内压监测在重型颅脑损伤患者治疗中应用,可以连续动态观察颅内压、脑灌注压情况,为临床治疗提供准确的压力指标,提高重型颅脑损伤救治的成功率。
- 蔡冬生
- 关键词：颅内压监测重型颅脑损伤
- NOS、p38MAPK、Caspase-3介导大鼠脑缺血神经细胞凋亡可能通路的实验研究被引量：18
- 2008年
- 目的探讨脑缺血后细胞凋亡发生的可能机制以及神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase，nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS），p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated proteinkinase p38．p38MAPK）和半光氨酸蛋白酶-3（caspase-3）在脑缺血后神经细胞凋亡中的共同作用机制。方法采用线栓法闭塞大鼠大脑中动脉（middle cerebral artery occlusion，MACO）建立脑缺血SD大鼠模型，应用透射电镜观察脑缺血对脑组织超微结构的影响，流式细胞仪方法（FCM）分别定量检测细胞凋亡率，半定量RT—PCR检测nNOS、iNOS，p38MAPK和Caspase-3 mRNA表达水平。结果透视电镜下脑缺血6h出现核固缩，缺血12h出现细胞核分裂，缺血24h出现凋亡小体；FCM检测细胞凋亡百分率随着缺血时间延长而增加，缺血72h达到高峰，约70．37％；RT—PCR产物的琼脂糖凝胶电泳显示nNOS、iNOS、p38MAPK和Caspase-3 mRNA的特异性片段大小分别为501、342、250和342bp，但mRNA。表达量不一致，nNOSmRNA主要在缺血早期表达，iNOS，p38MAPK和Caspase-3 mRNA在缺血中晚期表达，并在缺血3～5d，后三种基因的表达量达到高峰。结论脑缺血区域发生典型的神经细胞凋亡现象，nNOS来源的NOS在缺血早期发挥神经毒性作用，INOS来源的NOS在缺血晚期发挥神经毒性作用；NOS，p38MAPK和Caspase-3三种基因的相互关系可能构成介导缺血神经细胞凋亡的通路之一。
- 陈春美杨卫忠王春华石松生易海波陈晓斌蔡冬生杨意堃
- 关键词：脑缺血凋亡NOSP38MAPKCASPASE-3
- NOS反义RNA重组腺相关病毒载体体内提高脑细胞耐缺血能力的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨二种分别携带神经元型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）反义RNA重组腺相关病毒载体（rAAV—AsnNOS和rAAV-AsiNOS）提高脑细胞耐受缺血能力的作用机制。方法应用立体定位技术将预处理好的病毒载体转染至将要梗死侧的基底节区，转染病毒滴度为2×10^9mL～，并将SD大鼠分为4组：即rAAV-AsnNOS组，rAAV-AsiNOS组，rAAV—LacZ组和对照组；处理后运用MACO建立缺血模型，每组分为缺血早期和缺血晚期，流式细胞术（FCM）检测NT阳性细胞百分比和细胞凋亡率，逆转录反应系统（RT-PCR）分析nNOS、iNOS，p38MAPK，Caspase-3 mRNA的表达。结果一定剂量的重组病毒载体转染到大鼠海马区域，无神经损伤症状；转染rAAV-AsnNOS病毒载体的脑神经细胞在缺血早期（缺血1～6h），NT阳性细胞百分比、细胞凋亡率以及nNOS、p38MAPK和Caspase-3 mRNA表达量均较对照组、rAAV-LacZ组和rAAV—AsiNOS组降低；转染rAAV—AsiNOS病毒载体的脑神经细胞在缺血晚期（缺血24—72h），NT阳性细胞百分比、细胞凋亡率以及nNOS、p38MAPK和Caspase-3 mRNA表达量均较对照组、rAAV-LacZ组和rAAV-AsnNOS组降低，差异有统计学意义。结论转染重组病毒载体后动物模型脑神经细胞能够耐受缺血损伤，转染rAAV-AsnNOS病毒载体的脑神经细胞能够在缺血早期抑制nNOS、p38MAPK和Caspase-3的表达，转染rAAV—AsiNOS病毒载体的脑神经细胞能够在缺血晚期抑制iNOS、038MAPK和Caspase-3的表达，从而在缺血后抑制神经细胞凋亡的发生。
- 杨卫忠陈春美王春华石松生陈建屏黄勇蔡冬生
- 关键词：一氧化氮合酶重组腺相关病毒载体
- 一氧化氮合酶反义RNA重组腺相关病毒载体体内抑制脑缺血神经细胞凋亡的研究被引量：6
- 2008年
- 目的探讨二种分别携带神经元型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）反义RNA重组腺相关病毒载体（rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS）在脑缺血时抑制神经细胞凋亡的作用机制。方法运用MACO法建立脑缺血模型，闭塞1h后分别经右侧颈内动脉缓慢注入重组病毒载体（rAAV-AsnNOS、rAAV-AsiNOS和rAAV-LaeZ），继续闭塞大脑中动脉，每只转染病毒滴度为1×10^10个病毒颗粒／ml，并于分别缺血早期（缺血5h）和缺血晚期（缺血25h）时处死模型，流式细胞术（FCM）检测硝基酪氨酸（NT）阳性细胞百分比和细胞凋亡率，逆转录反应系统（RT-PCR）分析nNOS、iNOS，p38MAPK，Caspase-3 mRNA的表达。结果在脑缺血早期，rAAV-AsnNOS组的NT阳性百分比、凋亡率以及nNOS、p38MAPK、Caspase-3 mRNA表达量较对照组、rAAV-LacZ组和rAAV-AsiNOS组的低均降低，差异有统计学意义；在脑缺血晚期，rAAV-AsiNOS组的NT阳性百分率、凋亡率以及nNOS、p38MAPK、Caspase-3 mRNA表达量较对照组、rAAV-LacZ组和rAAV-AsiNOS组低，差异有统计学意义。结论在体内缺血动物模型中，rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS重组病毒载体能够分别在缺血早期和晚期通过抑制NOS表达，从而抑制p38MAPK和Caspase-3基因的表达，抑制缺血后神经细胞凋亡的发生。
- 石松生杨卫忠陈春美王春华易海波陈晓斌蔡冬生杨意堃
- 关键词：脑缺血一氧化氮合酶脱噬作用重组腺相关病毒载体反义寡核苷酸类
- 5-脂氧合酶与诱导型一氧化氮合酶在大鼠脊髓缺血组织中的表达及相关性研究
- 目的：探讨5-脂氧合酶(5-LOX)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在大鼠缺血脊髓组织中的表达特点及其相关性。
方法：50只雄性SD大鼠随机分成5组，假手术组及缺血6h、12h、24h、48h组。采用阻断左肾动...
- 蔡冬生
- 关键词：脊髓缺血5-脂氧合酶诱导型一氧化氮合酶炎症反应
- 文献传递
- 5-脂氧合酶在大鼠脊髓缺血组织中表达的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究5-脂氧合酶(5-LOX)在大鼠不同缺血时间点脊髓组织中的表达特点。方法50只雄性SD大鼠随机分成5组,假手术组及缺血6、12、24、48h组。采用阻断左肾下5条腰动脉的方法建立大鼠脊髓缺血模型,运用改良的Tarlov评分和HE染色的方法对脊髓模型进行评价;免疫组化染色,RT-PCR方法检测大鼠脊髓组织中5-LOX的表达。结果Tarlov评分:假手术组10只大鼠均为4分,无一发生瘫痪,缺血48h组2只为1分,余8只完全瘫痪;HE染色:假手术组神经细胞外形清楚、结构正常,缺血24、48h组出现大量神经元坏死,组织中有灶性出血,可见脊髓组织软化;免疫组化染色评分(H-score法):5-LOX正常脊髓组织低表达,缺血6、12、24、48h组表达高于假手术组并呈递增趋势(P<0.01);RT-PCR检测:5-LOXmRNA在正常脊髓组织表达低,在缺血6、12、24、48h脊髓组织表达高于假手术组并呈递增趋势(P<0.01)。结论5-LOX参与了脊髓缺血继发性的炎症反应,可作为治疗脊髓缺血的重要靶点。
- 蔡冬生石松生杨卫忠陈春美王春华
- 关键词：脊髓缺血5-脂氧合酶靶点
- 诱导型一氧化氮合酶反义RNA重组腺相关病毒载体的构建被引量：2
- 2008年
- 目的应用分子克隆技术构建携带诱导型一氧化氮合酶(iNOS)反义基因片断的重组腺病毒载体(rAAV-AsiNOS)。方法应用RT-PCR技术扩增iNOS目的基因片断,EcoRⅠ和XbaⅠ内切酶分别双酶切pAAV-MCS质粒和iNOS基因,经过胶回收和纯化后,住T4连接酶作用下,构建rAAV-AsiNOS重组质粒,并转化到感受态细菌XL-10中,进行鉴定和测序,293细胞病毒包装,重组腺相关病毒载体大量扩增,滴度和感染率的测定以及浓缩和纯化。结果从SD大鼠脑缺血区域中扩增的iNOS特异性片段大小分别为361bp;经双酶切和连接成重组质粒rAAV-AsiNOS;PCR鉴定结果显示重组质粒rAAV-AsnNOS目的基因产物特异性片段大小为593bp;基因测序结果显示iNOS基因片段分别反向克隆到pAAV的MCS,成功地构建携带反义iNOS基因的重组质粒rAAV-AsiNOS;经测算病毒原液的滴度为(6～12)×107个/ml,对PC12细胞的感染率约为70%;分离浓缩和纯化重组腺相关病毒载体,获得较高的病毒滴度,均约2×1010个病毒颗粒/ml,去除腺病毒等影响因素。结论成功构建携带iNOS反义基因的腺相关病毒载体,测序证实iNOS基因片断分别反向克隆到的腺相关病毒载体上;证实重组腺相关载体能够传染PC12细胞,转染率为70%。
- 杨卫忠陈春美王春华石松生黄勇李青罗望池蔡冬生
- 关键词：腺相关病毒载体诱导型一氧化氮合酶分子克隆技术
