谭文斌
- 作品数：14 被引量：51H指数：6
- 供职机构：湖南医科大学分子生物学研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人干细胞因子(SCF)5’旁侧调控序列与其全长cDNA融合克隆的构建及鉴定
- 2001年
- 目的 :为研究人干细胞因子 (SCF) 5’旁侧 1.42 kb区域内不同序列对全长 c DNA在真核细胞中表达的调控作用 ,构建了 SCF5’旁侧 1.42 kb的调控序列与其 1.2 kb的全长 c DNA融合克隆。方法 :将 PCR获得的 SCF5’旁侧 1.42kb的调控序列与 RT- PCR获得的其 1.2 kb的全长 c DNA克隆入 p GEM- T载体 ,筛选正确插入方向 ,利用合适的限制性内切酶从中切出三个片段依次亚克隆入 p UC19克隆载体中。结果 :获得了 SCF5’旁侧 1.42 kb的调控序列与其 1.2 kb的全长 c DNA并成功地构建了它们的融合克隆。结论 :T-载体在克隆添加了少量具有 3’→ 5’外切核酸酶的 PCR产物中仍然有效 ;在稍大片段的基因克隆操作中 ,利用分段亚克隆的方法 ,避开干扰另外的酶切位点 ,依次分段亚克隆更为可行。
- 谭运年谭文斌彭兴华
- 关键词：人干细胞因子CDNA
- 迎接21世纪生命科学的新时代——基因组与蛋白组计划时代被引量：10
- 1998年
- 当全世界人类基因组计划在近年取得迅速和突出的进展，即将来临的２１世纪将带领人类基因组计划进入一个后基因组时代、蛋白组计划、生物信息学的新时代，所有这些将构成２１世纪生命科学研究的核心前沿和主流。同样，生物信息学的成果将高度地拓展生命科学新的研究领域和加速其研究的进程。多种多样数以千万计的生命模式（如生物大分子结构功能的模式）的数字化，将是加快生命科学信息化步入一个崭新的水平和时代的必由之路。
- 谭文斌
- 关键词：人类基因组计划基因组计划
- 两种质粒转化方法的比较被引量：9
- 1996年
- 本文对一种快速质粒转化方法与传统质粒转化方法进行比较，发现前者每微克超螺旋质粒ＤＮＡ能获得１．３４×１０４～２．３６×１０５个转化子，且整个过程快速简便稳定，能满足一般的质粒克隆转化要求。
- 谭文斌成光杰罗建新谢慎思
- 关键词：质粒生物技术
- QRT-PCR内标准RNA的选择与构建被引量：10
- 1997年
- QRT-PCR是当前精确定量分析基因表达的一种最快速、敏感的方法,其关键在于如何设立一个合适的内标准RNA。本文就这一方面最新进展进行概述。
- 谭文斌
- 关键词：聚合酶链反应RNA
- 人干细胞因子基因5′旁侧序列的克隆和功能研究被引量：4
- 2000年
- 人干细胞因子 ( human stem cell factor,h SCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用 .利用改进的 PCR体系 ,从人类基因组 DNA中扩增出自 h SCF基因编码起始位点( + 1 81 )至 5′旁侧 - 1 1 90位点共 1 372 bp的片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体中 ,经序列分析证明无误 .为探寻此片段中对转录调控起作用的具体区域 ,用基因缺失技术从 - 1 62 ( Bst X )位点向上游分别延伸至 - 2 73( Pst )、- 339( Sma )、- 381 ( Sac )、- 44 0 ( Eco R )、- 570 ( H inc )、-853( Bgl )及 - 1 1 90 ( Xho )等位点 ,共获 7个不同长度的 h SCF基因 5′旁侧序列片段 ,随后将这7个片段分别克隆入荧光素酶 ( luc)报告基因载体 p GL2 - Promoter.经阳离子脂质体包埋技术介导转染 He La细胞 ,培养 48h后检测 Luc活性 .结果表明 :h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域对luc表达有明显的增强作用 ,而 - 339～ - 2 73区域则显示有抑制作用 .分别以包含这两个区域的片段为探针进行竞争性凝胶阻滞实验 ,结果均出现一个或多个特异性滞留区带 ,说明这两个区域存在转录因子的结合位点 .实验结果表明 ,h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域富含 AT,是一典型基质结合区 ,而 - 339～ - 2 73区域为一新的沉默子 。
- 谭文斌聂怡玲郭小珊谭运年成光杰陈汉春朱定尔
- 关键词：人干细胞因子基因基因表达转录调控
- 重组人干细胞因子在大肠杆菌中的表达及活性鉴定被引量：6
- 1999年
- 采用ＰＣＲ方法从重组载体ｐＫＫＳＣＦ扩增出人干细胞因子（ＳＣＦ）基因ｃＤＮＡ片段，经亚克隆构建成表达载体ｐＥＴ１１ｄＳＣＦ，经限制性酶谱分析鉴定证实．继用ＩＰＴＧ诱导重组ｐＥＴ１１ｄＳＣＦ在大肠杆菌ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）中表达，经初步纯化获得重组人ＳＣＦ蛋白质，经检测具有生理活性，对脐带血ＣＦＵ－ＣＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖有明显刺激作用，为进一步的生物工程研究奠定了基础．
- 谭文斌成光杰李卫民李卫民朱定尔
- 关键词：干细胞因子基因表达生物工程
- IFN-α联合IL-6对CGL患者骨髓细胞生长及生长-凋亡相关基因表达的影响被引量：4
- 2000年
- 目的 探讨α干扰素 (IFN α)及IFN α联合白细胞介素 6 (IL 6 )对慢性粒细胞白血病(CGL)患者骨髓单个核细胞生长及bcr abl、bcl 2和c myc基因表达的影响。方法 以 2 0 0U mlIFN α或2 0 0U mlIFN α联合 10 0ng mlIL 6液体培养CGL慢性期患者骨髓单个核细胞 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)相对定量分析培养 2 4h的骨髓单个核细胞中 β actin、bcr abl、bcl 2和c myc基因表达水平。结果 IFN α明显抑制细胞生长 ,IL 6可在IFN α作用的基础上轻微降低IFN α对细胞生长的抑制程度 ;IFN α或IFN α加IL 6共同作用均抑制bcr abl和bcl 2基因表达 ;IFN α抑制c myc基因表达 ,IL 6则促进c myc基因表达。结论 IFN α及IFN α联合IL 6均抑制bcr abl和bcl 2等抗凋亡基因表达 ,并调节c myc基因表达水平。通过促进细胞凋亡而抑制恶性克隆增长是IFN α或IFN α联合IL 6治疗CGL的可能作用机制。
- 陈汉春汤立军彭兴华罗志勇罗赛群谭文斌
- 关键词：慢性粒细胞白血病骨髓IFN-ΑIL-6
- 定量RTPCR中人干细胞因子的RNACRS的构建被引量：2
- 2000年
- 一种适用于定量RT PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术 ,构建人干细胞因子 (hSCF)基因的RNA竞争性参考标准 (RNA CRS)的新方法 :用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCFcDNA ,并克隆入质粒pGEM T获重组的pGEMSCF载体 ,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理 ,以导致hSCFcDNA中一小片段缺失 ,由此获得重组 pGEMSCF模拟体 (mimic) ,经体外转录得到hSCFRNA CRS .测序表明 :该RNA CRS与hSCFmRNA比较 ,缺失了从第 4 99位至 60 8位共 110个核苷酸 ,但二者RT PCR反应可用同一对扩增引物 ,反应动力学极为相似 .这种hSCFRNA CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准 ,适用于定量RT PCR中 ,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析 .此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及
- 谭文斌聂怡玲罗赛群郭小珊成光杰陈汉春朱定尔public.cs.hn.cn
- 关键词：基因表达定量RT-PCR
- PCR-SSCP分析线粒体DNA突变的方法学改进被引量：7
- 2000年
- 在采用PCR -SSCP(PolymeraseChainReaction -SingleStrandConformationPolymorphism ,聚合酶链式反应 -单链构象多态性 )分析技术对 8例骨关节病患者软骨细胞线粒体DNA进行突变分析的过程中 ,针对区带多而杂乱的情况 ,改变变性剂成份和电泳电压 ,从而有效提高了检出灵敏度 ,同时极大地节省了时间。
- 朱敏吕红斌周钢谭文斌谢慎思
- 关键词：基因突变PCR-SSCP分析线粒体DNA
- 人干细胞因子全长cDNA的基因扩增与克隆
- 2001年
- 目的 探讨人干细胞因子的结构与功能及其在真核细胞中的表达与调控的机制，首先克隆了人干细胞因子金长ｃＤＮＡ。方法 用ＲＰＭ１６４０，体积分数为１０％的小牛血清培养比闷细胞，抽提ＲＮＡ，行ＲＴ－ＰＣＢ，纯化ＰＣＲ产物，与ｐＧＥＭ－Ｔ克隆载体连接，转化，铺板，筛选阳性克隆，酶切鉴定并进行序列测定。结果 通过酶切鉴定并进行序列测定，成功地获得了人干细胞固子全长ｃＤＮＡ的基因克隆。结论 人干细胞因子全长ｃＤＮＡ的基固克隆的构建成功，为其结构与功能的研究及其在真核细胞中的表达与调控的研究提供了一定的物质基础。
- 谭运年谭文斌彭兴华
- 关键词：干细胞因子脱氧核糖核酸克隆基因扩增
