赵刚
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：解放军第306医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 模拟微重力条件下重组骨保护素融合蛋白(rhOPG-HSA)对破骨前体细胞Raw264.7抑制效应的研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨在模拟微重力(Simulated microgravity,SMG)条件下重组骨保护素融合蛋白(rhOPG-HSA)对破骨前体细胞Raw264.7的抑制效应。方法在SMG条件下,分别培养破骨前体细胞Raw264.7与成骨细胞MC3T3-E1,利用ELISA法检测MC3T3-E1细胞培养液中骨保护素活性,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)以及可溶性破骨细胞分化因子(sRANKL)诱导Raw264.7分化为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法鉴定rhOPG-HSA抑制破骨细胞能力,利用半定量RT-PCR测定破骨细胞中TRAP的表达。结果 SMG条件下,骨保护素活性在72 h后显著降低(P<0.01);Raw264.7细胞经M-CSF及sRANKL诱导3、4、5 d后,与阴性对照组相比,TRAP阳性染色的破骨细胞用rhOPG-HSA处理后明显减少(P<0.05),RT-PCR测定结果表明破骨细胞TRAP的表达降低(P<0.05)。结论 SMG条件下,rhOPG-HSA能够抑制破骨前体细胞Raw264.7的分化。
- 刘俊丽宋淑军司少艳冯凯刘军连赵刚张建中
- 关键词：模拟微重力
- mTERT启动子调控的CD80-SEA基因重组腺病毒载体的构建及在不同肿瘤细胞中的表达研究被引量：4
- 2011年
- [目的]构建小鼠端粒酶反转录酶(mTERT)启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)和CD80基因共表达重组腺病毒载体,并观察其介导的SEA和CD80在小鼠肝癌细胞Hepa1-6、结肠癌细胞CT26、黑色素瘤细胞B16和成纤维细胞NIH3T3中的表达情况。[方法]采用AdEasy腺病毒体系,亚克隆mTERT核心启动子区至穿梭质粒pShuttle2,并在其上游插入myc-Max反应元件MMRE,用来调控SEA及CD80基因的表达,构建SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERT-BIS,转化Ad293细胞制备病毒并纯化,然后将病毒以感染复数为100的浓度分别感染上述四种细胞。采用免疫荧光染色法及流式细胞术检测SEA和CD80在细胞膜表面的表达情况。[结果]以感染复数为100病毒量感染上述细胞后,CD80和SEA的不同肿瘤细胞上表达率不同,而病毒感染的NIH3T3细胞不表达SEA和CD80。[结论]成功地构建了mTERT启动子调控的SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体,能够调控SEA和CD80基因在不同肿瘤细胞中的靶向表达,但表达效率有所不同。为进一步采用同一腺病毒对不同肿瘤细胞的进行靶向基因治疗研究奠定了基础。
- 司少艳徐冰心宋淑军史亮赵刚刘俊丽刘志国张建中
- 关键词：葡萄球菌肠毒素ACD80腺病毒
- 小鼠TERT启动子调控的CD80-SEA基因重组腺病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:构建小鼠端粒酶反转录酶(mTERT)启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)和CD80基因共表达重组腺病毒载体,并观察其介导的SEA和CD80在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中的表达情况。方法:采用AdEasy腺病毒体系,亚克隆mTERT核心启动子区至穿梭质粒pShuttle2,并在其上游插入myc-Max反应元件MMRE,用来调控SEA及CD80基因的表达,构建SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERT-BIS,制备病毒并纯化,然后将病毒以感染复数为100的浓度分别感染肝癌细胞系Hepa1-6和成纤维细胞系NIH3T3。采用免疫荧光染色法检测SEA和CD80在细胞膜表面的表达情况。结果:重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERT-BIS感染的Hepa1-6肝癌细胞膜上能够共表达SEA和CD80;而病毒感染的NIH3T3细胞不能表达SEA和CD80。结论:成功地构建了mTERT启动子调控的SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体,能够调控SEA和CD80基因在肝癌细胞中的靶向表达,为进一步研究肝癌的靶向基因治疗奠定了基础。
- 司少艳宋淑军徐冰心赵刚谭小青刘俊丽张建中刘志国
- 关键词：葡萄球菌肠毒素ACD80腺病毒
- 不同修饰型hTERT启动子在多种肿瘤细胞中的转录活性研究被引量：1
- 2012年
- 目的:对人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子进行不同修饰,然后对其在不同肿瘤细胞和原代培养的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)中的转录活性进行比较。方法:常规分子生物学方法克隆hTERT启动子区-378至+77之间序列和CWV增强子,采用SV40增强子、CWV增强子、SV40-CWV双增强子、Myc-Max反应元件(Myc-Max response elements,MMRE)、MMRE和SV40增强子联合对hTERT启动子分别进行修饰,分别构建其荧光素酶报告基因表达载体;采用脂质体Li-pofectamine2000将重组质粒分别和pRL-CMV共转染不同肿瘤细胞和原代培养的牙龈成纤维细胞,双荧光素酶法检测hTERT启动子的转录活性。结果:酶切和测序鉴定hTERT启动子、CWV增强子克隆成功,以及荧光素酶表达载体构建成功;荧光素酶活性检测显示:野生型hTERT启动子不同肿瘤细胞中相对转录活性从9.9%到24.4%有所不同,经不同修饰后活性大多有所提高,分别是野生型hTERT启动子的倍数:SV40增强子1.3至4.9倍;CWV增强子4.0至42.8倍;CWV和SV40联合增强子2.0至49.2倍;单一MMRE0至5.5倍,MMRE和SV40增强子联合为1.2至8.4倍。野生型和修饰后的hTERT启动子在原代培养的牙龈成纤维细胞转录活性均较低。同一hTERT启动子在不同肿瘤细胞中转录活性不同。结论:不同修饰的hTERT启动子相对野生型hTERT转录活性大多有所提高,其中CMV增强子或SV40-CMV双增强子修饰的hTERT启动子提高幅度最大,用于靶向性肿瘤基因治疗具有巨大潜力。
- 司少艳宋淑军洪彪刘俊丽赵刚景青萍张建中
- 关键词：人端粒酶逆转录酶启动子靶向基因治疗肿瘤
- 模拟微重力条件下成骨生长肽促进MC3T3-E1成骨样细胞的增殖与分化被引量：5
- 2012年
- 目的研究回转模拟微重力(simulated microgravity,SMG)条件下成骨生长肽(OGP10-14)对MC3T3-E1成骨样细胞增殖与分化的影响。方法利用回转器模拟失重,MTT法检测OGP10-14对回转24 h,48h,72 h MC3T3-E1细胞增殖的效应,并观察培养液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨桥素(osteopontin,OPN)活性变化。结果回转模拟微重力条件下,10-8mol/L OGP10-14能够显著促进成骨细胞系MC3T3-E1的增殖(P<0.01)并促进成骨细胞系MC3T3-E1的ALP和OPN活性。结论回转模拟微重力条件下,OGP10-14对成骨细胞系MC3T3-E1的增殖与分化具有促进作用。
- 刘俊丽牛忠英宋淑军司少艳周金莲赵刚谭小青张建中
- 关键词：模拟微重力回转器成骨生长肽
- 重组骨保护素融合蛋白（rhOPG-HSA）与成骨生长肽(OGP10-14)生物学活性的研究
- 目的探讨重组骨保护素融合蛋白（recombiant human osteoprogerin-human serum album,rhOPG-HSA）对破骨细胞的抑制效应以及成骨生长肽(osteogenic growth ...
- 刘俊丽宋淑军司少艳冯凯赵刚景青萍周游周学慧张建中
