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赵明哲: 作品数：13 被引量：78H指数：3; 供职机构：南方医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：生物学医药卫生更多>>

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人BNIP3基因在Hela细胞中的表达及定位被引量：1: 2009年; 目的:构建BNIP3-HA融合蛋白的真核表达载体,观察BNIP3在Hela细胞中表达及其定位。方法:采用两步克隆法将HA和BNIP3的编码序列以融合表达的形式克隆到载体pcDNA3上,随后转染Hela细胞。BNIP3经AlexaFluor 488免疫荧光标记,线粒体用MitoFluor Red 589染色后在荧光显微镜下观察BNIP3的表达和定位。结果:重组质粒经酶切、聚合酶链反应(PCR)和测序鉴定构建正确,并在Hela细胞中能够表达,在荧光显微镜下观察,BNIP3-HA融合蛋白分布于线粒体。结论:成功构建BNIP3-HA融合蛋白表达载体并在Hela细胞线粒体中表达。; 陈登宇刘芸钟田雨王蔚赵明哲刘靖华姜勇; 关键词：基因 BCL-2 HELA细胞线粒体荧光免疫测定细胞内定位

内毒素休克小鼠肝脏细胞质磷酸化蛋白质组学的研究: 脓毒症(sepsis)是感染引起的全身炎症反应征候群，其严重并发症——感染性休克(septic shock)是创伤、烧伤和手术后病人最主要的死亡原因之一。统计表明，临床半数的脓毒症是由于革兰氏阴性菌(Gram-negat...; 赵明哲; 关键词：内毒素休克病理机制磷酸化蛋白质组学生物信息学; 文献传递

用FRET技术研究TLR4和MD-2的相互作用被引量：9: 2006年; 目的利用荧光共振能量转移(FRET)技术在活体细胞研究人Toll样受体(TLR)4与髓样细胞分化蛋白2(MD-2)的相互作用。方法用PCR方法扩增TLR4编码序列和MD-2编码序列(不包括信号肽序列)并分别亚克隆入带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白和增强型黄色荧光蛋白表达载体(pECFP-C1-SP,pEYFP-C1-SP)中,重组质粒经酶切、序列鉴定分析后分别或共同转染HEK293细胞,用荧光显微镜观察荧光蛋白表达和分布情况,并用常规的方法和受体光漂白的方法对共表达青色荧光蛋白(CFP)-TLR4和黄色荧光蛋白(YFP)-MD-2的细胞进行FRET分析。结果重组质粒在HEK293细胞中得到表达,仅转染pECFP/TLR4或pEYFP/MD-2的细胞可见青色或黄色荧光主要分布在胞质内,以核周较多;而共转染pECFP/TLR4和pEYFP/MD-2的细胞可同时检测到青色和黄色荧光,主要分布在细胞膜,同时胞质也有少量表达。无论是用常规的方法还是受体光漂白的方法,对共表达CFP-TLR4和YFP-MD-2的细胞进行FRET分析结果表明有FRET现象的发生,提示TLR4和MD-2有相互作用并形成复合物。结论本研究为TLR4和MD-2在活体细胞中的相互作用提供了直接的证据。; 刘亚伟刘靖华唐靖赵清李建军赵明哲李志杰王国军钟田雨邓鹏姜勇; 关键词：TOLL样受体4 荧光共振能量转移

内毒素休克小鼠肝脏细胞质膜差异蛋白质组的二维液相色谱分析被引量：1: 2008年; 目的:建立和优化肝脏细胞质膜蛋白质研究的方法系统,并对正常组小鼠和内毒素休克小鼠组肝脏细胞质膜蛋白质进行二维液相色谱分离,分析两者之间的差异表达谱.方法:BALB/c小鼠20只随机分为正常组和内毒素休克小鼠组(10只,LPS刺激3h,LPS剂量为35mg/kg),n=10.采用差速离心结合蔗糖密度梯度离心法分离和富集两组肝脏细胞质膜蛋白,分别将两组样品按蛋白质PI进行一维的色谱聚焦分离,然后每个PI组分再按蛋白质的疏水性经二维HPLC分离,利用ProteoVue软件将UV光吸收图谱转换成PI对疏水性的胶样图谱,再利用DeltaVue软件分析两组肝脏质膜蛋白质组的表达差异.结果:图像分析显示两组比值在≥2.0及≤0.5的差异蛋白点共有24个,与正常组比较,在内毒素休克小鼠的肝脏质膜蛋白中有16个蛋白点表达上调,8个蛋白点表达下调.结论:正常组和内毒素休克小鼠组的肝脏质膜蛋白质组有明显差异.; 李红梅陈丽夏高晓赵明哲胡水旺姜勇; 关键词：内毒素休克

转甲状腺素蛋白真核表达载体的构建及其细胞内定位被引量：3: 2009年; 目的构建转甲状腺素蛋白(TTR)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达及定位。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到TTR编码序列,将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒pcDNA3-TTR-HA。重组质粒通过PCR、酶切测序等证明构建正确后经脂质体转染NIH3T3细胞,固定并染色后通过荧光显微镜观察该融合蛋白的表达及定位。结果重组质粒经鉴定证明构建正确。转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要分布在细胞质中。结论成功构建带HA标签的TTR真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为深入研究TTR在细胞内的相关生物学功能奠定了基础。; 胡水旺孙明晶夏高晓陈丽赵明哲姜勇; 关键词：前白蛋白基因表达

丝裂原活化的蛋白激酶在高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放炎性细胞因子中的作用被引量：5: 2009年; 目的研究重组人高迁移率族蛋白1(HMGB1)诱导内皮细胞释放趋化因子白介素-8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的规律及其与脂多糖(LPS)的协同作用;探讨丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路在上述作用中的地位。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测不同浓度重组HMGB1(0~75ng/ml),或者HMGB1(15ng/ml)刺激后不同时间点人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌IL-8、MCP-1的水平变化以及HMGB1(15ng/ml)与LPS(10ng/ml)共同刺激后IL-8、MCP-1的水平变化;探讨MAPK信号通路在HMGB1诱导内皮细胞释放趋化因子中的作用时首先加入抑制剂SB203580(20mol/L)、PD98059(20mol/L)和JNKinhibitorII(50nmol/L)预处理细胞1h,再加入HMGB1和LPS刺激。结果在HMGB1蛋白刺激后3~6h,IL-8和MCP-1水平开始增加,12~24h持续增高(P<0.01);随着HMGB1浓度的增加,IL-8和MCP-1水平也明显升高,与基础值相比差异有统计学意义(P<0.01)。如果用LPS(10ng/ml)和...; 钟田雨唐靖刘亚伟李志杰陈登宇赵明哲王蔚刘靖华姜勇; 关键词：白介素-8 单核细胞趋化蛋白-1 人脐静脉内皮细胞

重组人CRP的表达纯化及其内化进入HeLa细胞的观察被引量：2: 2008年; 目的:构建人C-反应蛋白(CRP)原核表达载体,表达纯化his-EGFP-CRP蛋白,观察其能否内化进入HeLa肿瘤细胞。方法:利用特异性引物,从p91023/CRP载体上将编码人CRP的基因序列亚克隆到原核表达载体pET14b/MCS-EGFP-(N)36上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的重组蛋白通过亲和色谱纯化,梯度透析复性,并与HeLa细胞孵育,利用荧光显微镜观察其内化入胞。结果:PCR、双酶切和测序鉴定表明,pET14b/EGFP-hCRP原核表达质粒构建正确;转化实验发现,该质粒在BL21(DE3)中能够被大量诱导表达;蛋白纯化及荧光显微镜观察结果表明,复性后的表达产物可结合于HeLa细胞膜,孵育一定时间后,可定位于胞质及胞核。结论:成功地构建了带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的人CRP原核表达载体,该载体能够在大肠杆菌BL21(DE3)中被诱导表达重组蛋白his-EGFP-CRP,纯化复性后的重组人CRP能与HeLa肿瘤细胞结合,并能内化入胞,移位入核。; 陈腾祥李红梅胡水旺赵明哲刘亚伟刘靖华姜勇; 关键词：C反应蛋白蛋白质复性 HELA细胞

小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组的提取和双向电泳分离: 2009年; 目的提取小鼠肝细胞核磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳分离小鼠肝细胞核磷酸化蛋白。方法提取小鼠肝细胞核蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂纯化出磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并挑选其中一个蛋白斑点进行质谱分析。结果成功提取了肝细胞核磷酸化蛋白,通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组图谱。质谱鉴定结果证实被挑选蛋白斑点是小鼠核磷酸化蛋白。结论磷酸化蛋白纯化技术结合二维凝胶电泳分离技术是研究肝细胞核磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面研究和鉴定小鼠肝细胞核磷酸化蛋白的功能打下了基础。; 夏高晓李红梅陈丽赵明哲胡水旺王继刚孙明晶邓鹏刘靖华姜勇; 关键词：磷酸化蛋白质组双向凝胶电泳肝脏质谱

ERK信号通路的信号转导调控机制被引量：56: 2009年; 胞外信号调控激酶(ERK)是发现的第1个丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),它调控多种重要的细胞生物学过程,包括细胞增殖、分化和凋亡等。ERK信号级联反应能够特异地介导广泛的生物学过程,其机制主要是通过信号的反馈调控,与支架蛋白的相互作用,亚细胞定位的改变,在级联反应的每一个环节存在不同功能的多种组分,细胞内非磷酸酶抑制物和G蛋白等的调控实现的。; 赵明哲刘靖华李玉花姜勇; 关键词：激酶亚细胞定位支架蛋白信号调控

小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组的初步研究: 2009年; 目的提取小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳技术对其进行分离。方法提取小鼠肝细胞线粒体蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,质谱鉴定感兴趣的蛋白点。结果成功提取了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白,并通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组图谱。结论磷酸化蛋白纯化技术与二维凝胶电泳分离技术的结合是研究亚细胞器磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面鉴定和研究线粒体磷酸化蛋白的功能打下了基础。; 陈丽李红梅夏高晓赵明哲胡水旺王继刚徐佳刘靖华邓鹏姜勇; 关键词：磷酸化蛋白质组

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