邹晓华
- 作品数：11 被引量：12H指数：2
- 供职机构：三峡大学更多>>
- 发文基金：湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目湖北省卫生厅青年科技人才基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- S100A10蛋白的表达及其抗体的制备被引量：2
- 2014年
- 目的制备S100A10蛋白及其特异性抗体。方法用PCR扩增编码S100A10的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的蛋白产物经镍柱亲和层析纯化后,作为抗原皮内接种免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体,分别以ELISA,Western blot法检测抗体的滴度和抗原特异性。结果成功构建原核表达载体pET28a(+)-(S100A10)2,得到纯化的(S100A10)2蛋白,制备的多抗具有较高的抗体滴度和抗原特异性。结论建立了S100A10原核表达及纯化系统,成功制备了S100A10的多克隆抗体,为S100A10的进一步研究提供了工具。
- 辛丹丹邹晓华佐满珍刘朝奇
- 关键词：原核表达抗原特异性多克隆抗体
- HCV core 基因克隆蛋白表达及其活性分析
- :丙型肝炎病毒(HCV)的感染在肝癌的发生发展中具有重要作用,尤其是HCV 的核心蛋白(HCV core)在肝细胞的表达及核苷酸的变异.因此检测HCV core 对于肝癌的早期诊断及预防具有非常重要的意义.本实验构建HC...
- 邹晓华吴薇聂纪芹刘朝奇
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- 小鼠CRT-SPD1融合基因原核表达载体的构建和表达
- 2013年
- 目的:设计原核表达小鼠钙网蛋白(Calreticulin,CRT)与程序性死亡分子1(Programmed Death-1,PD1)的融合蛋白,用于肿瘤靶向治疗。方法:应用RT-PCR技术扩增小鼠CRT的N、P区基因及PD1胞外区cDNA序列,用一个Linker将两者连接起来,克隆至表达载体pET28a(+)上。将重组表达质粒pET28a(+)-CRT-SPD1转化入大肠杆菌BL21(DE3)内,IPTG诱导表达;用Ni柱亲和层析纯化蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。结果:所得产物经SDS-PAGE检测后,在45 kDa处显示特异条带,最后经Western Blotting鉴定,所纯化蛋白能被CRT抗体和PD1抗体抗体识别。结论:获得较纯的融合蛋白,所构建的载体可为进一步研究两者的功能和免疫学特性及肿瘤的免疫治疗奠定了基础。
- 吴薇汪龚泽邹晓华王艳林刘朝奇
- 关键词：钙网蛋白程序性死亡分子蛋白纯化
- 小鼠肝纤维化中内质网应激分子的表达与作用被引量：1
- 2015年
- [目的]利用高脂饲料和异种血清诱导建立肝纤维化模型,检测内质网应激分子在该纤维化模型中的作用及机制。[方法]收集各组小鼠血清进行ALT检测,对小鼠肝组织进行HE和Masson染色观察肝组织的结构变化以及胶原纤维状况,并分别用Western和RT-PCR检测组织内CRT、GRP78、TLR2等基因的表达。[结果]与正常对照组(48.8±6.1 U/L)相比高脂饲料饮食组(139.7±13.4 U/L)、腹腔注射异种血清组(72.8±7.2U/L)以及高脂饲料联合腹腔异种血清注射组(193.0±14.1 U/L)血清ALT显著升高(p<0.05);镜下也观察到肝细胞脂肪变性,大量的胶原纤维产生;肝组织内GRP78和TLR2基因mRNA水平、CRT蛋白水平均升高(p<0.05)。[结论]高脂饲料和异种血清诱导建立的肝纤维化模型显示内质网应激与肝纤维化的发生发展密切相关。
- 田慧群吴薇邹晓华王雅琴张伟任东明刘朝奇
- 关键词：肝纤维化高脂饲料猪血清CRTGRP78
- 阿霉素联合顺铂诱导宫颈癌细胞凋亡实验研究被引量：4
- 2013年
- 目的:研究化疗药物阿霉素(ADM)联合顺铂(DDP)对宫颈癌CaSki细胞株的增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的相互作用机制。方法:应用MTT比色法检测不同浓度阿霉素、顺铂单独和联合应用对宫颈癌CaSki细胞的增殖抑制作用;同时RT-PCR法在mRNA水平上检测Bcl-2和TNF-α基因表达量的变化。结果:两种药物单独应用均可抑制CaSki细胞的增殖,联合用药(<12μg/mL)时具有协同抑制作用并与各药物单一应用比较具有显著性差异(P<0.05);阿霉素、顺铂作用CaSki细胞后能上调TNF-α基因和下调Bcl-2基因的表达。结论:宫颈癌CaSki细胞在化疗药物阿霉素和顺铂两药联合作用下通过诱导TNF-α和Bcl-2 mRNA表达量的变化发挥协同抑制作用,同时TNF-α的高表达增强了化疗药物阿霉素和顺铂诱导肿瘤细胞凋亡的敏感性,其机制主要与凋亡诱导效应有关。
- 赵文思吴薇任东明邹晓华刘朝奇
- 关键词：阿霉素顺铂TNF-ΑBCL-2凋亡
- 抗HIV-1 p15(gag)IgY抗体的制备及活性检测被引量：2
- 2012年
- 目的:制备具有高效价强特异性的抗HIV-1 p15(gag)鸡卵黄抗体(IgY),纯化并分析其免疫学活性。方法:用纯化的HIV-1 p15(gag)蛋白抗原免疫蛋鸡,用水稀释法对IgY抗体进行粗提取并结合乙醇沉淀和氯化钠盐析法纯化抗体,再通过SDS-PAGE、Western blot、酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗体的纯度、特异性及效价。结果:表达纯化的HIV-1 p15(gag)-GST融合蛋白分子量为45kDa,用于抗体检测的抗原。用纯化的His-P15蛋白作为免疫原免疫蛋鸡后,获得的卵黄抗体重链、轻链分子量分别为65kDa和25kDa。8倍体积水稀释卵黄,pH值5.1,20%冰乙醇及0.028mol/L盐溶液分离纯化,纯度可达96℅,每毫升卵黄液可得到的卵黄抗体为9.8mg。终浓度为18%～25%的冰乙醇纯化的抗体浓度高且稳定,同时具有较强的特异性和较高的效价。结论:用HIV-1p15(gag)蛋白免疫蛋鸡,可以获得高效价的特异性抗体IgY,为IgY抗体在HIV-1p15蛋白的研究奠定了实验基础。
- 赵文思邹晓华沈雪莲王海龙柳发勇刘朝奇
- 关键词：活性检测
- 高脂饲料和异种血清联合诱导小鼠肝纤维化模型的实验研究被引量：3
- 2014年
- 利用高脂饲料和异种血清诱导建立肝纤维化模型,检测炎性因子的表达情况。将BALB/c小鼠随机分为正常小鼠组、高脂饲料饮食组、腹腔注射异种血清组、高脂饲料联合腹腔异种血清注射组。6周后,比较4组小鼠体重以及肝重指数,收集肝脏标本经HE和Masson染色后光镜观察肝组织的结构变化以及胶原纤维状况,并提取肝组织的总RNA,RTPCR检测白介素-17A(IL-17A)、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)、Ⅰ型胶原蛋白(COLL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等基因mRNA水平的改变。结果显示与正常对照组体重及肝重指数(26.7±2.5g,5.24±0.81)相比显示,高脂饲料饮食组(30.4±3.7g,5.44±0.32)和高脂饲料联合腹腔异种血清注射组(30.3±1.8g,6.51±1.13)体重及肝重指数明显升高(P<0.05);HE和Masson染色显微镜下也观察到肝细胞脂肪变性,大量的胶原纤维产生;RT-PCR检测TIMP,IL-17A,COLL以及TNF-α的mRNA,相比于正常对照组,实验组肝组织mRNA表达均有升高且具有统计学意义(P<0.05)。本实验应用高脂和异种血清联合处理建立了小鼠肝纤维化模型,并发现炎性因子IL-17A及TNF-α参与了小鼠肝纤维化的形成过程。
- 吴薇刘元佼陈独腾邹晓华刘朝奇
- 关键词：高脂饲料猪血清
- SPA-Luc嵌合基因的构建及其融合蛋白活性检测
- 2013年
- 目的:葡萄球菌A蛋白-荧光素酶(SPA-Luc)原核表达载体的构建,表达,纯化,并对其生物学效应进行初步研究。方法:PCR扩增SPA和Luc基因,并连接到pET28a(+)中,构建原核表达质粒。构建正确的重组质粒转化至E.coliBL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE及Western Blot鉴定,同时用Ni-NTA亲和层析法纯化SPA-Luc蛋白,最后用荧光素酶试剂盒和ELISA检测融合蛋白的生物学活性。结果:成功构建重组质粒pET28a(+)-SPA、pET28a(+)-Luc和pET28a(+)-SPA-Luc,SDS-PAGE及Western Blot证明正确表达了重组蛋白,并获得了纯化的融合蛋白SPA-Luc。荧光素酶试剂盒检测发现该蛋白仍能与IgG结合,并且与兔和鼠的IgG有较高亲和性。ELISA显示SPA-Luc蛋白替代常规二抗检测抗原,具有更高的敏感性。结论:成功的克隆、表达、纯化的SPA-Luc蛋白可用于抗原抗体的检测,且比常规二抗具有更高的敏感性,为进一步研究其在免疫学中的应用奠定了实验基础。
- 邹晓华聂纪芹吴薇刘朝奇
- 关键词：葡萄球菌A蛋白荧光素酶融合蛋白免疫学检测
- SPA-荧光素酶的质粒构建、蛋白表达及其生物学活性
- 研究背景:荧光素酶(Luciferase,Luc)是一类能催化荧光素氧化并产生生物光的酶。葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A,SPA)是金黄色葡萄球菌细胞壁分离出的一种单一多肽链。SPA具有...
- 邹晓华金羽聂纪芹刘朝奇
- 关键词：SPA荧光素酶融合蛋白免疫学实验
- 抗HIV-1 p15(gag)IgY抗体的制备及活性检测
- 研究背景:鸡卵黄抗体(Immunoglobulin of yolk,Ig Y)具有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力,而且由于禽类与哺乳动物的亲缘关系较疏远,哺乳动物的蛋白质抗原在禽体内更易产生特异性较高的...
- 刘朝奇赵文思邹晓华沈雪莲王海龙柳发勇
- 关键词：卵黄抗体活性检测
- 文献传递
